国家自然科学基金(30370692)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：白增亮葛汝村李季李栋时永香更多>>
- 相关机构：山东大学山东省立医院山东省交通医院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 大鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞相关基因表达谱分析被引量：1
- 2005年
- 目的:利用cDNA微阵列技术研究大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化中基因表达谱的变化。方法:分离、培养大鼠骨髓基质细胞,以地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导分化,抽提细胞mRNA并逆转录成cDNA探针,用含有1176个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达。结果:经诱导后的细胞可见有钙化结节,与正常传代的细胞相比有292个基因的差异表达超过了3倍,而参与转录、翻译、糖基化修饰和调节细胞外基质、信号分子形成及参与代谢的相关基因表达均有不同程度的上调。结论:cDNA微阵列技术可显示细胞在诱导分化中多基因的差异表达,这些差异表达基因是大鼠骨髓基质细胞在增殖和成骨分化诱导中所必需参与的基因。
- 葛汝村白增亮李季李栋张辉
- 关键词：骨髓基质细胞诱导分化基因表达谱CDNA微阵列
- 大鼠骨髓基质细胞传代培养中相关基因的差异表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :研究大鼠骨髓基质细胞 (BMSCs)体外传代培养中相关基因的差异表达。方法 :取大鼠骨髓 ,分离、培养骨髓基质细胞并传代 ,抽取细胞 (mRNA)并逆转录成cDNA探针 ,用含有 1 1 76个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达 ,整理、分析实验数据。结果 :传至P3代细胞与原代细胞 (P0 )相比有1 0 4个基因的差异表达超过了 3倍 ,其中有 5 3个基因表达量明显上升 ,5 1个基因表达量明显下降 ,主要涉及一些细胞粘附分子及胞外基质、细胞信号与传导、细胞受体和细胞骨架等方面的相关基因。结论 :通过基因芯片技术可以显示BMSCs在体外传代培养中众多基因的差异表达 ,而这些基因的差异表达与细胞的增殖和分化存在一定的关系 。
- 葛汝村白增亮李栋李季邓长江
- 关键词：骨髓基质细胞传代培养CDNA微阵列
- 应用基因表达谱芯片研究骨髓基质细胞诱导分化为成骨细胞中基因表达水平的变化
- 2014年
- 目的 探讨骨髓基质细胞（MSC）诱导分化为成骨细胞过程中各基因表达水平的变化,同时为合理选择及构建符合临床需求的组织细胞系在基因水平上寻求理论依据.方法 无菌条件下分离SD大鼠MSC进行原代培养,根据培养体系不同,将其分为两组：①诱导分化组（6例）,采用含浓度为1×10-8mol/L地塞米松,浓度为10 mmol/L β-甘油磷酸钠及浓度为50 mg/L维生素C的诱导性DMEM培养基进行诱导分化培养;②对照组（6例）,采用DMEM培养基进行同步培养.通过倒置相差显微镜观察诱导分化组与对照组MSC的形态特征,并采用茜素红染色观察细胞的生长与分化情况.采用基因表达谱芯片杂交技术选出诱导分化组与对照组的表达水平存在差异的基因,并对差异基因进行生物学功能分析.结果 ①分离MSC进行原代培养.培养72 h后,MSC开始增殖,细胞形态多呈梭形、三角形或不规则细胞形态.继续培养6～7 d后,细胞逐渐形成散在的细胞集落,多呈成纤维细胞形态.培养10～12 d后,MSC集落间相互融合成单层细胞.②MSC传代培养,诱导分化组细胞与对照组相比细胞增殖速度缓慢,细胞形态多呈梭形或多角形,且逐渐向成骨细胞转变;培养10～12 d后,密集的细胞间出现较多散在的致密圆形透光性差的钙化结节;钙化结节经茜素红染色呈片状棕染,茜素红染色呈显著阳性.对照组细胞增殖迅速,多呈成纤维细胞形态生长,在常规培养14 d后未出现明显钙化结节.③诱导分化组细胞内表达水平发生改变的基因占总有效基因的27.7％,显著高于对照组MSC传代培养中表达水平发生改变的基因数,差异有统计学意义（P=0.01）.诱导分化组细胞与原代细胞、对照组细胞基因表达水平的相关性较低（R2 =0.524 8,0.495 4）,诱导分化组细胞表达水平发生改变的基因数目增多.诱导分化组与对照组MSC表达水平存在＞3倍差异的部分已知基因,包�
- 芦璐葛汝村高阳侯明
- 关键词：基因表达谱微阵列分析成骨细胞
- 用改进的细胞核移植方法构建重构胚被引量：4
- 2007年
- 为了能够找出一种既容易操作,又不需要特殊设备的核移植方法,对以前的操作进行了改进。首先以预先吸有细胞核或细胞的注射针在固定于持卵针上的卵母细胞透明带上穿刺两个孔,然后一边缓慢地将注射针回拔至卵周隙中,一边逐渐增加持卵针中的负压,直至极体与目标核质被完整吸入持卵针中而完成去核,最后在不拔出注射针的情况下直接注射细胞核或完整细胞进而完成重构胚的构建。用此方法对200个卵母细胞进行注核和注细胞操作,平均完成一个重构胚的构建各自耗时约40s和30s,成功率分别为62·6%和86·0%。用核染料Hoechst33342对卵母细胞的去核效率进行验证,去核成功率达到73·3%。实验证明,用此方法可以在只有倒置显微镜和显微操作仪的条件下一次性快速完成去核和注核,大大提高了细胞核移植的效率和重构胚成活率;更重要的是该方法操作简单,新手可以很快掌握该技术,易于在实际工作中推广应用。
- 吴克良时永香白增亮田海滨张楠刘兰兰刘昌彬
- 关键词：细胞核移植重构胚去核
