国家自然科学基金(30800786)
- 作品数：3 被引量：24H指数：2
- 相关作者：刘建新王佳堃叶均安陈振明安培培更多>>
- 相关机构：浙江大学杭州师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 湖羊瘤胃微生物Fosmid文库的构建和分析被引量：18
- 2010年
- 为了开发瘤胃微生物酶资源,本研究以湖羊瘤胃为对象,构建瘤胃微生物的Fosmid文库,并对其库容量、稳定性和功能性进行分析。文库共获得克隆12704个。通过XhoⅠ和BamHⅠ限制性酶切分析发现,文库插入片断平均为30.9kb(17～55kb),主要集中于36～40kb和26～30kb2个区间;所建文库容量为393Mb。HindⅢ限制性分析证实,在连续传代100次时,文库仍保持很好的稳定性。通过刚果红染色分析获得18个具有木聚糖酶活性的阳性克隆。上述结果表明该文库具有较好的库容量、稳定性和功能性,可用于后续酶资源开发。
- 王佳堃安培培陈振明叶均安刘建新
- 关键词：湖羊瘤胃微生物FOSMID文库木聚糖酶
- 纤维素结合域的酿酒酵母表面展示及其黏附位点初探被引量：1
- 2011年
- 利用酿酒酵母表面展示系统表达产琥珀酸丝状杆菌S85纤维素结合域家族2(CBD2),分析其纤维黏附位点。将CBD2基因插入质粒pYD1的AGA2 3′端,构建pMCBD2重组质粒,化学转化pMCBD2至酿酒酵母EBY100中,2%半乳糖诱导CBD2表达于酿酒酵母表面。利用免疫组化技术检测重组酵母细胞在稻草茎细胞壁上的黏附位点。结果表明:利用酿酒酵母表面展示系统可成功表达产琥珀酸丝状杆菌S85的CBD2基因;重组CBD2的pMCBD2-EBY100与稻草茎孵育后,经抗V5异硫氰酸荧光素标记抗体处理可在稻草茎的薄壁、厚壁和维管组织均检测到荧光。产琥珀酸丝状杆菌S85的CBD2黏附稻草多个组织。结果提示:酿酒酵母表面展示技术与免疫组化技术联用研究瘤胃细菌CBD的黏附位点是可行的。
- 张玉杰王佳堃叶均安刘建新
- 关键词：纤维素结合域
- 酵母细胞表面展示技术被引量：6
- 2011年
- 酵母细胞表达体系具备较为完善的蛋白质翻译后修饰和分泌的机制。以酵母为基础的细胞表面展示技术是一项新兴的真核蛋白展示技术,已成功应用于蛋白质识别、蛋白质的固定化和定向进化研究,成为了蛋白质工程研究的重要工具。根据与酵母细胞壁的外源目的蛋白融合部位的不同,酿酒酵母表面展示系统主要分为凝集素系统和絮凝素系统2大系统。将该技术引入动物营养研究领域,有望通过诱导宿主产生原虫或甲烷菌的抗体,对瘤胃微生态进行调控,从而以减少甲烷排放;生产高活性的全细胞催化剂,以提高反刍动物和单胃动物对纤维物质的利用效率。为此,本文就该技术的原理、特点和应用领域进行了综述。
- 王佳堃孙中远刘建新
