公共文化服务平台

鸡Mx基因2032位点单核苷酸多态性研究被引量：5: 2009年; 研究采用错配PCIK-IKFLP的方法对15个品种鸡的Mx基因进行筛查，旨在探索不同鸡品种Mx cDNA第2032位点抗病基因A与易感等位基因G的多态性，为生产转基因鸡的可行性提供理论基础。结果表明：15个鸡品种Mx基因的2032位点存在A、G2个等位基因，AA、AG、GG3种基因型，其中鹿苑鸡、狼山鸡、斗鸡未发现AA型个体，茶花鸡、红色原鸡未发现GG个体；携带帆抗性基因A和易感基因G的比例分别是0．350、0．650：抗性等住基因A的检测比例为0．034～0．984。红色原鸡的抗性等位基因A基因频率（0．984）高于地方鸡种的抗性等住基因A的基因频率（0．321）；地方鸡种中的观赏型、蛋肉兼用型、肉用型、蛋用型鸡种的抗性等位基因A的基因频率分别为0．221、0．297、0．425、0．462。χ^2适合性检验表明，15个品种的鸡群均处于Hardy—Weinberg平衡状态。; 吴晓伟范敏其倪黎纲程旭梅陈强田智泉李碧春; 关键词：MX基因抗性基因单核苷酸多态性

两种载体重组神经氨酸酶基因及其在细胞中瞬时表达差异: 2011年; 2009年全球暴发的甲型H1N1流感对人和猪等一些动物健康构成了威胁,引起世界卫生组织（WHO）和世界各国密切关注。流感病毒表面蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）与流感传染和发病有关。NA是构成病毒囊膜纤突的一重要蛋白,可诱导机体产生NA抗体,; 丁爱军傅德智吴信生高波李碧春; 关键词：神经氨酸酶

鸡胚ESC和SSCs特定基因表达差异的研究被引量：3: 2011年; 目的:探讨鸡胚胎干细胞(ESC)和精原干细胞(SSCs)在基因表达水平上的差异。方法:传至二代的ESC和SSCs,采用免疫荧光和碱性磷酸酶检测法联合鉴定其干细胞特性,RT-PCR方法检测两者相关基因的表达差异。结果:两种处于未分化状态时的干细胞基因表达存在差异:未分化的ESC表达基因GDF3基因和Nanog基因;SSCs表达特定基因c-kit、Cvh和Stra8基因。结论:两种干细胞在基因表达水平上有差异,为ESC与SSCs在基因水平上的鉴定提供参考依据。; 孙敏施青青傅德智阴彦辉张亚妮李碧春; 关键词：鸡胚胎干细胞基因表达

鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养比较初探被引量：11: 2010年; 为比较鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养效果,对鸡Ⅹ期胚盘细胞分别进行分散培养和整胚培养并进行传代,观察细胞生长情况,通过碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定计算阳性克隆率;结果,分散培养的细胞生长状态良好,整胚培养的细胞贴壁能力较差,培养过程中细胞易分化;传代后两种方法培养的细胞AKP阳性克隆率差异显著(P<0.01)。表明鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养效果较为理想。; 杨海燕孙敏田智泉秦玉蓉任丽伟许峰李碧春

鸡Dazl基因的克隆及其亚细胞定位研究被引量：2: 2013年; 为克隆鸡Daz(lDeleted in azoospermia-like,Dazl)基因CDS序列,通过构建eGFP标记的DAZL真核表达载体,实现该基因产物的亚细胞定位以探究其生物信息学功能。提取1日龄鸡睾丸总RNA,通过巢式PCR方法扩增出Dazl基因的CDS,构建真核表达载体pEGFP-C1-DAZL。采用LipofectaminTMLTX介导重组表达载体pEGFP-C1-DAZL转染CEF细胞,48h后于荧光倒置显微镜下观察其表达定位,同时利用RT-PCR和Western-blot进一步鉴定eGFP-Dazl和蛋白水平的表达情况。结果表明:克隆出Dazl基因的完整CDS,长度870bp,共编码289个氨基酸,与公布的鸡Dazl基因(GenBank登陆号:NM_204218)CDS区同源性达99%,编码氨基酸完全一致。酶切鉴定和序列分析均表明真核表达载体pEGFP-C1-DAZL构建成功。转染48h后,RT-PCR和Western-blot分别检测到949bp特异条带和59.7ku的融合蛋白。荧光显微镜观察显示,融合蛋白(eGFP-Dazl)主要分布于细胞核。; 郑蒙蒙李伟施青青王丹黄晓梅李碧春; 关键词：DAZL 真核表达载体绿色荧光蛋白亚细胞定位

鸡ES细胞体外定向诱导分化特性的研究被引量：1: 2011年; 旨在探索鸡胚胎干细胞(ES细胞)体外定向诱导的多向分化潜能。分离鸡X期胚盘细胞,体外培养传代,经鉴定后,采用地塞米松(DEX)、β-甘油磷酸钠(β-GP)和维生素C(VitC)诱导ES细胞向成骨细胞分化;采用维甲酸(RA)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导ES细胞向神经元样细胞分化;采用DEX、胰岛素、IBMX诱导ES细胞向脂肪细胞分化,比较不同浓度组合诱导剂的诱导效果,分别用Von Kossa’s染色法、甲苯胺蓝染色法、免疫组化法、油红O染色法和RT-PCR鉴定诱导产生的细胞。结果显示,ES细胞被诱导3～21d后,分化为成骨细胞,诱导率为40%～72%;被诱导4～7d后,分化为神经元样细胞,诱导率为71%～84%;被诱导2～21d后,分化为脂肪细胞,油红O染色阳性,并表达PPARγ基因。结果表明,在体外条件下,ES细胞可被特异的化学物质定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,具有多向分化潜能。; 李碧春陈香凝裴敬帅施青青傅德智阴彦辉张振韬窦套存王克华; 关键词：胚胎干细胞体外培养诱导分化

禽流感H5N1型神经氨酸酶在细胞中的表达: 2010年; 利用表达载体pIRES-NA研究H5N1型神经氨酸酶(neuramidinase,NA)基因在NIH-3T3细胞中表达,为今后转基因家禽的培育提供证据。通过构建重组表达载体转染细胞经G418筛选后,利用PCR方法检测NA基因在细胞基因组中整合,利用RT-PCR和Western Blotting的方法分别在RNA及蛋白质水平上检测NA基因在细胞中表达。结果表明细胞转染经筛选后,提取细胞基因组进行PCR,能扩增出NA基因片段,约1.4kb;同时RT-PCR能检测到NA基因mRNA,Western Blotting能检测到细胞表达约55ku NA蛋白,构建重组载体能整合到NIH-3T3细胞基因组中,NA基因能在细胞中表达。; 丁爱军任丽伟傅德智李碧春; 关键词：H5N1 神经氨酸酶

聚乙烯亚胺介导NIH-3T3细胞体外转染pEGFP-N1系统优化: 2010年; 目的优化聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导的细胞转染以提高目的基因在细胞中的表达强度。方法根据PEI/DNA不同的质量比(0:1、0.5:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1)利用凝胶阻滞分析结合的情况;不同质量比PEI/DNA形成的复合物对NIH-3T3细胞的转染通过细胞表达强度获得最佳PEI/DNA质量比;比较实验组1(PEI/DNA质量比2:1)、实验组2(重复PEI/DNA质量比2:1)及实验组3(PEI/DNA质量比4:2)3种转染方案,探讨重复转染的方法是否提高细胞表达强度。结果①通过凝胶阻滞分析PEI/DNA能够稳定结合的质量比是1:1～10:1;②PEI/DNA复合物对NIH-3T3细胞进行转染,其荧光表达强度当PEI/DNA(质量比)≤2时随着PEI的增加而提高,当PEI/DNA(质量比)>2时,荧光表达强度反而降低;③采用重复转染的方法实验组2细胞荧光表达强度(24.08±0.28)%明显高于实验组1(8.97±4.02)%和实验组3(14.24±2.68)%(P<0.05)。结论在PEI/DNA(质量比)=2的条件下,PEI/DNA复合物转化NIH-3T3细胞的效果比较理想,重复转染可以提高细胞转染后荧光表达强度。; 丁爱军任丽伟许峰秦玉蓉傅德智李碧春; 关键词：聚乙烯亚胺细胞转染

体内精原干细胞介导法制备抗病转基因鸡被引量：1: 2011年; 实验旨在利用精原干细胞介导的方法体内转染融合基因EGFP-MMx,制备抗病毒性疾病转基因鸡。采用脂质体包埋法,睾丸内注射EGFP-MMx融合基因,术后采集30、40、50、60、70、80 d睾丸组织进行冰冻切片、基因组PC R、点杂交实验,转染后60 d公鸡精液人工授精于正常母鸡,对后代血液采用PC R检测技术、R T-PC R和W estern blot方法检测外源基因EGFP-MMx的整合表达情况。结果表明:睾丸基因组点杂交阳性率为72.2%。通过PC R、R T-PCR检测方法,在实验公鸡精液和F1代血液中检测到目的基因,精液阳性率为25%,F1代阳性率为10.53%,Western blot检测F1代阳性率为7.89%。结果证明外源基因通过睾丸注射法可整合到基因组上,为培育抗病转基因鸡提供参考依据。; 孙敏施青青阴彦辉傅德智秦玉蓉许峰李碧春; 关键词：精原干细胞转基因鸡

鸡胚原始生殖细胞生物学特性鉴定及相关基因表达研究被引量：2: 2012年; 采用酶消化法分离鸡胚原始生殖细胞(PGCs),纯化后进行体外培养,传至5～6代时,通过对阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)免疫荧光标记、碱性磷酸酶检测等方法联合鉴定其基本生物学特性,同时以RT-PCR方法检测其特异基因的表达。结果表明:体外培养的PGCs维持未分化状态,碱性磷酸酶阳性、免疫荧光检测其特异标志物SSEA-1阳性。鸡胚PGCs表达减数分裂前标志基因Dazl、Nanog和GDF3,生殖细胞分化后期基因CVH,原始生殖细胞标志基因Blimp-1以及干细胞多能性相关基因Oct-4,不表达减数分裂启动基因Stra8。提示所获得的鸡胚PGCs,其生物学特性稳定,表达相关特异基因,为鸡胚PGCs的体外培养及鉴定提供理论依据。; 施青青孙敏郑蒙蒙王丹黄晓梅张亚妮李碧春; 关键词：体外培养生物学特性

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

国家自然科学基金(30871791)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

国家自然科学基金(30871791)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈