国家自然科学基金(30871792)
- 作品数：24 被引量：83H指数：5
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- 相关机构：吉林农业大学吉林大学长春市妇产医院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- VEGF在绵羊发情周期中卵泡表达的研究
- 2011年
- VEGF（血管内皮生长因子，V＆scular Endotheli＆lGrowthF＆ctor）是一种能特异性地促进内皮细胞的增殖和血管新生的细胞因子，在雌性动物的卵泡发育、卵母细胞的成熟、黄体的形成与功能的维持等生理过程中，起着十分重要的调控作用。为探讨VEGF在绵羊卵巢发情周期中的表达规律，应用免疫组化方法结合计算机图像分析技术，分析同期发情后0d、5d、9d、12d、15d的绵羊卵巢中VEGF表达强度变化，以期了解VEGF在绵羊卵巢发情周期不同时期的表达规律。研究结果表明：VEGF阳性目标主要出现于卵泡膜与颗粒细胞。原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡VEGF表达依次增强（P〈0．05）。发情周期0～5d，大窦腔卵泡（颗粒细胞4～8层）VEGF表达量骤然上升（P〈0．05）；而9d开：皓显著下降，与5d比较差异显著（P〈0．05）；12d继续下降（P〈0．05），且为最低值；15d又明显上升（P〈0．05）。VEGF在卵巢间质呈弱表达，各个时期之间差异不显著（P〉0．05）。说明绵羊卵巢存在着血管周期性新生的变化特点，而VEGF在这种周期性血管新生过程中起着重要的调控作用。
- 杨雨江姜怀志王典陈洋
- 关键词：VEGF绵羊免疫组化法发情周期
- 妊娠期绵羊子宫内膜VEGF基因表达的RT-PCR检测
- 2010年
- [目的]探讨VEGF基因在不同繁殖力绵羊母羊妊娠期不同阶段的子宫内膜表达规律及差异。[方法]以已妊娠的2.5岁的东北细毛羊和小尾寒羊为试验动物,利用手术法采集样品组织。通过提取检测样品组织总RNA,并对其进行PCR扩增、检测分析扩增产物研究了VEGF基因在妊娠期绵羊子宫内膜的表达规律及差异。[结果]VEGFmRNA在绵羊各妊娠期的子宫内膜均有强烈表达,随着妊娠的持续,表达量逐渐升高,妊娠后期与妊娠前期相比子宫内膜VEGF基因的mRNA表达有明显差异(P<0.05)。小尾寒羊在妊娠各期子宫内膜上VEGF基因的表达水平均高于东北细毛羊,但差异不显著(P>0.05)。[结论]该研究为阐明VEGF基因在绵羊妊娠发育过程中的作用机制提供了参考。
- 戢爽王典王瑞雪姜怀志
- 关键词：VEGF基因妊娠期子宫内膜RT-PCR
- 不同培养基对小鼠黄体细胞体外培养效果的影响被引量：4
- 2011年
- 对未性成熟的雌性小鼠注射孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素,在适当的时间摘取小鼠卵巢进行卵巢黄体细胞的体外培养,培养用液为含10%血清的DMEM和含10%血清的RPMI 1640。结果发现,用前者培养的细胞在形态、规则程度和数量上都优于后者,为小鼠黄体细胞体外培养液的选择和进一步研究提供了参考。
- 陈娟杨永梅陈洋姜怀志杨雨江巩俊铭
- 关键词：体外培养
- 绵羊妊娠期生殖组织Flt-1基因的克隆及其组织表达量的检测
- 2011年
- 试验从雌性绵羊妊娠期不同阶段的输卵管、子宫内膜、卵泡组织中提取总RNA,根据已发表的绵羊Flt-1基因的cDNA序列设计引物,以β-Actin基因为内参,采用RT-PCR扩增绵羊Flt-1基因,将扩增产物克隆于载体后进行序列分析,并应用Kodak Science 1 D、Bandscan图像分析软件,推断出不同组织中Flt-1基因的表达量。结果表明,从雌性绵羊妊娠期不同阶段生殖道各组织上皮均获得82 bp的Flt-1基因的扩增片段,且Flt-1基因在雌性绵羊生殖道各组织内的表达量不同。说明Flt-1基因对绵羊的妊娠维持起着重要的作用。
- 姜怀志戢爽高爱萍李向军杨永梅
- 关键词：绵羊
- VEGF对绵羊卵泡颗粒细胞FSHR、E_2R表达的影响被引量：1
- 2013年
- 血管内皮生长因子(VEGF)可以促进颗粒细胞的增殖,但是否影响同样分布于颗粒细胞上的FSHR、E2R表达效果尚属未知。因此,通过Western blotting和荧光定量PCR分别对添加0、5、10、15、20、25μg/L VEGF卵泡颗粒细胞中FSHR、E2R表达量及FSHR mRNA、E2R mRNA表达量进行检测。Western blotting蛋白检测结果表明,空白对照组和各个不同质量浓度VEGF处理组的颗粒细胞上均有FSHR和E2R蛋白表达,FSHR相对分子质量为75 000,E2R相对分子质量为56 000;荧光定量PCR检测结果表明,添加VEGF的各个处理组中FSHR mR-NA、E2R mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05),各处理组间的FSHR mRNA之间差异不显著(P>0.05),而VEGF添加量20、25μg/L组的E2R mRNA表达量显著高于其他3个处理组(P<0.05),并且这2个组间则差异不显著(P>0.05),其余3个处理组间亦差异不显著(P>0.05)。
- 陈洋杨永梅谷博姜怀志
- 关键词：血管内皮生长因子卵泡颗粒细胞FSHR
- 小鼠卵巢颗粒细胞的优化培养被引量：5
- 2011年
- 为了找到小鼠卵巢颗粒细胞更加合适的体外生长环境,本研究分别向分离的小鼠卵巢颗粒细胞中加入无血清RM-PI1640、含10%血清RMPI1640、无血清DMEM(高糖)、含10%血清DMEM(高糖)及含15%血清DMEM(高糖)的培养液对小鼠卵巢颗粒细胞进行体外培养。试验经观察结果显示,DMEM(高糖)总体培养效果好于RMPI1640,且含15%血清的DMEM(高糖)是较理想的培养用液。
- 杨永梅陈娟陈洋姜怀志
- 关键词：颗粒细胞血清浓度
- 促凋亡基因(Bad)在卵泡期绵羊生殖器官中的表达被引量：5
- 2010年
- 以卵泡期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用免疫组织化学技术,对促凋亡基因(Bad)在生殖器官卵巢、输卵管和子宫中的表达与定位进行初步研究。结果表明,在卵巢组织中Bad基因在原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡中呈中度着染,在三级卵泡中呈轻度着染,阳性细胞在卵泡上皮细胞和颗粒细胞中分散分布,呈轻度着染;输卵管上皮分泌细胞和部分纤毛细胞胞质中见Bad基因中等强度表达,输卵管壶腹部上皮中,Bad基因多表达于分泌细胞,纤毛细胞中有部分呈阳性且强度弱,宫管结合部、峡部和壶腹部Bad基因阳性细胞染色强度弱,均呈中度着染;子宫内膜子叶和基质中的阳性细胞数量极少,阳性细胞呈轻度着色。利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊和萨福克羊生殖器官各组织细胞中Bad基因表达的阳性细胞率和平均光密度,结果Bad基因在这2品种绵羊组织中的表达规律大体相似,但也存在一些明显的差异:萨福克羊三级卵泡颗粒细胞Bad基因阳性细胞率显著高于小尾寒羊(P<0.01);萨福克羊三级卵泡和成熟卵泡膜细胞Bad基因阳性细胞率和平均光密度均显著高于小尾寒羊(P<0.01);萨福克羊子宫内膜腺体卵泡期Bad基因阳性细胞平均光密度显著高于小尾寒羊(P<0.01);由此表明,小尾寒羊和萨福克羊卵泡期生殖器官中细胞凋亡的差异与Bad基因表达的差异,可能是造成两者繁殖力高低差异的基础。
- 王龙涛葛晨霞李向军贾博寅马磊姜怀志
- 关键词：小尾寒羊萨福克羊卵泡期
- RNA干扰技术在动物繁殖中的应用
- 2011年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的转录后水平的基因沉默现象,是近几年发展起来的基因表达调节新机制,广泛地存在于真菌、植物和动物中。到目前为止,已有很多试验证明,RNAi作为一种基因功能研究的新手段,在动物繁殖研究中发挥了极其高效的作用。作者主要介绍了RNAi的研究历史、分子机制、作用特点、生物学意义及在动物繁殖中的应用。
- 陈娟杨永梅陈洋姜怀志杨雨江巩俊明
- 关键词：RNA干扰双链RNA小干扰RNA动物繁殖
- 绵羊发情周期子宫内膜微血管密度与VEGF的表达关系
- 2012年
- 以绵羊发情周期的子宫内膜为研究对象,采用免疫组化方法定量检测绵羊发情周期子宫内膜的微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达量。结果表明:MVD的标记物CD34和VEGF在绵羊发情周期的子宫内膜中呈现相同的表达特征,即表达位点均在子宫内膜上皮固有层及肌层;两者均在发情后0d开始表达,5d最高。5d开始到15d表达量缓慢下降。子宫内膜VEGF表达量和MVD相关系数r=0.669,P=0,表明子宫角中VEGF表达量和MVD显著正相关。
- 葛晨霞王龙涛曹颖楠谷博杨雨江姜怀志
- 关键词：微血管密度血管内皮生长因子子宫内膜发情周期
- 绵羊发情周期卵巢微血管密度的观察被引量：1
- 2012年
- 采用S-P免疫组织化学法通过CD34抗体标记血管内皮细胞,测定绵羊发情周期的0、5、9、12、15d的卵巢内原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、近成熟卵泡、卵巢间质微血管的分布,并分析微血管密度(MVD)的变化规律,探讨绵羊发情周期不同时期各级卵泡微血管生成状态及卵泡微血管生成与卵泡发育的关系。结果表明,绵羊的原始卵泡周围无独立血管网,而初级卵泡的卵泡膜附近开始出现微血管,其MVD值为3.60±0.89,次级卵泡周围微血管密度值显著增高(P<0.05),MVD值为6.80±0.84。大窦腔卵泡0、5、9、12、15dMVD分别为15.80±0.84、23.00±2.30、22.40±2.41、21.20±2.28、34.80±2.39。0～5dMVD值显著升高(P<0.05),而5、9、12dMVD值差异均不显著(P>0.05),12～15dMVD值又明显升高(P<0.05)。卵巢间质MVD值在各个发情周期各个时期差异均不显著(P>0.05)。说明绵羊在发情周期内卵泡的血管新生是从初级卵泡开始的,并且卵巢的血管新生主要发生在卵泡上,而卵巢间质无血管新生现象。
- 陈洋王典曹颖楠姜怀志
- 关键词：绵羊卵巢微血管密度
