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国家自然科学基金(81171373)
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丁小江
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两条肿瘤靶向抑制肽的修饰及作用靶点的初步研究
2016年
目的探讨两条肿瘤靶向抑制肽(QKRKRKKSRKKH、RKRKRKKSRYIVLS)经化学修饰后(N端乙酰化、C端酰胺化)的稳定性,并初步探讨其作用靶点。方法3H-TdR掺入法、CCK-8法分别探讨多肽修饰前后对A549细胞增殖、活力的影响;高效液相色谱法(HPLC)测定多肽在10%血清条件下,不同时间点(12、24 h)的剩余量,评价其修饰前后在血清中的稳定性;构建GST标签的多肽(GST-多肽)融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中诱导表达、纯化;免疫共沉淀法鉴定GST-多肽融合蛋白能否与VEGFR-1、VEGFR-2结合。结果多肽RKRKRKKSRYIVLS经化学修饰后在10%血清环境下对A549细胞增殖的抑制率由(2.63±6.19)%提高至(48.50±7.14)%(P<0.01),对A549细胞活力的抑制率由(1.30±7.90)%提高至(20.80±5.90)%(P<0.01),24 h后多肽在血清中的剩余量由(56.04±1.81)%提高至(64.64±0.30)%(P<0.01);多肽QKRKRKKSRKKH化学修饰前后在10%血清环境下对A549细胞增殖的抑制率分别为(28.38±5.63)%、(34.25±10.90)%(P>0.05),对A549细胞活力的抑制率分别为(8.09±5.84)%、(15.07±8.09)%(P>0.05),24 h后多肽在血清中的剩余量由(72.72±2.60)%提高至(77.43%±1.78)%(P<0.05);免疫共沉淀表明这两条多肽均能与VEGFR-1、VEGFR-2结合。结论 VEGFR-1、VEGFR-2为这两条肿瘤靶向抑制肽的作用靶点;多肽RKRKRK KSRYIVLS、QKRKRKKSRKKH修饰后在血清环境下稳定性明显提高,修饰后的RKRKRKKSRYIVLS对A549细胞增殖及活力的抑制能力明显增强。
刘杰
丁小江
郑磊
李前伟
黄定德
关键词:
血管内皮生长因子受体
GST融合蛋白
免疫共沉淀
3H-TDR
CCK-8
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