北京市自然科学基金(5112018)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 一种新的以影像为基础的细胞增殖和细胞毒性检测方法被引量：1
- 2014年
- 噻唑蓝3-(4,5-二甲基-2-)-2,5-二苯基溴化四唑盐(MTT)比色法是传统上检测细胞增殖和细胞毒性的常用方法.CloneSelectTM成像系统是一种以影像为基础的用于分析细胞生长的可视检测系统.本研究采用人结直肠癌HCT116细胞系,运用CloneSelect成像系统和MTT方法分别检测药物阿的平的细胞毒性,并采用Bland-Altman作图法比较两种实验方法获得的pEC50值,分析两种研究方法获得的结果的一致性.结果表明,CloneSelectTM成像系统和MTT法获得的pEC50值具有较好的一致性.与MTT方法相比,基于影像的CloneSelectTM成像分析技术检测快速、无损伤且结果更准确,获取资料不损伤细胞,允许后续其它时间点或动力学检测.研究提示,这种新的以影像为基础的检测技术可以替代MTT方法,用于分析不同药物的抗细胞增殖活性.
- 卢瑶王献慧李淑艳
- 关键词：成像方法细胞增殖细胞生长曲线
- NF-κB p65的敲减加重结肠上皮HCT116细胞氧化损伤
- 2013年
- 炎症细胞诱导的活性氧类生成和肠道氧化应激与慢性炎症性肠疾病以及结直肠肿瘤的发病密切相关.目前,核因子κB(NF-κB)信号通路在氧化应激反应、结直肠炎症和肿瘤发生中的作用还未研究清楚.本研究将化学合成的一对编码小干扰RNA序列、靶向人NF-κB基因长60 bp寡核苷酸链定向克隆至pSUPER小干扰RNA表达载体中,经单酶切、双酶切及测序证实重组RNA干扰载体构建成功.将构建成功的质粒转染至结肠上皮细胞HCT116中敲减p65,分别采用免疫印迹方法检测NF-κB p65蛋白表达水平,(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-3,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)方法检测细胞存活情况.结果显示,pSUPER-NF-κB p65载体可特异性下调NF-κB p65蛋白表达;下调p65表达可导致过氧化氢诱导的HCT116内活性氧类物质生成增高,存活细胞数目显著减少,氧化损伤加重.研究表明,在人结肠上皮细胞内NF-κB p65通路的抑制显著加重了结肠上皮细胞氧化损伤情况.
- 周雪宏卢瑶曹继祥李淑艳
- 关键词：结肠上皮细胞
