国家自然科学基金(31070446)
- 作品数：17 被引量：76H指数：6
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- 相关机构：黑龙江大学东北农业大学更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 副干酪乳杆菌HD1.7遗传转化体系的初步建立被引量：3
- 2011年
- 优化副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD1.7的电转化条件,为构建L.paracasei HD1.7prcR基因敲除突变株奠定基础。通过电转化方法将自杀质粒pUC18-prcR-tet导入L.paracasei HD1.7内,对影响L.paracasei HD1.7电转化的几个主要因素进行了初步研究。当L.paracasei HD1.7生长8h时,加入青霉素使终浓度为12.5μg/mL,再培养1h。经AEB1电转缓冲液(蔗糖浓度为0.3mol/L)处理后,在1.8～2.0KV电压下完成电击,并迅速加入MRS培养基中,复苏5h,成功地将自杀质粒pUC18-prcR-tet转入L.paracasei HD1.7内,并发生了部分同源重组。本研究得到了副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD1.7较优电转化条件,为继续研究L.paracasei HD1.7的群体感应调控因子prcR奠定了基础。
- 葛菁萍高先军由田平文祥
- 关键词：副干酪乳杆菌电转化
- 休哈塔假丝酵母HDYXHT-01利用木糖生产乙醇的发酵工艺优化被引量：5
- 2011年
- 采用Plackett-Burman(PB)方法和中心组合设计(Central composit design,CCD)对休哈塔假丝酵母Candida shehatae HDYXHT-01利用木糖发酵生产乙醇的工艺进行优化。PB试验设计与分析结果表明:硫酸铵、磷酸二氢钾、酵母粉和接种量是影响木糖乙醇发酵的4个关键因素,以乙醇产量为响应目标,采用CCD和响应面分析法(Response surface methodology,RSM),确定了木糖乙醇发酵的最佳工艺为:硫酸铵1.73 g/L、磷酸二氢钾3.56 g/L、酵母粉2.62 g/L和接种量5.66%,其他发酵条件为:木糖80 g/L,MgSO4.7H2O 0.1 g/L,pH 5.0,培养温度30℃,装液量100 mL/250 mL,摇床转速140 r/min,发酵时间48 h,在该条件下发酵液中乙醇产量可以达到26.18 g/L,是优化前的1.15倍。
- 葛菁萍刘国明杨晓峰孙红兵凌宏志平文祥
- 关键词：休哈塔假丝酵母木糖乙醇响应面分析法
- 传统发酵豆酱中纤溶酶产生菌的分离、筛选及鉴定被引量：2
- 2014年
- 为了对豆酱中的纤溶酶产生菌进行研究,通过传统微生物学方法和分子生物学方法对不同发酵时期豆酱中的纤溶酶产生菌进行分离、培养和鉴定,得到7株纤溶酶产生菌,其中HDBF-1产量较高,其产生的透明圈直径与菌落直径比达到1.5695,继续对HDBF-1菌株进行16S rDNA序列测定并在GenBank数据库进行比较,结果表明,HDBF-1菌株与黄(单胞)杆菌Xanthomonas sp.属于同一属。
- 赵靖雯周晓杭赵仲阳辛星葛菁萍陈丽平文祥
- 关键词：RDNA豆酱
- 地衣芽孢杆菌HDYM-04产β-甘露聚糖酶补料分批发酵条件优化被引量：6
- 2011年
- 利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformics)HDYM-04在5L发酵罐中发酵生产β-甘露聚糖酶,并对其发酵条件、补料策略及用量进行优化。得到最优起始魔芋粉加入量、初始pH值和接种量分别为60g/L、8.0和6.7%;最佳发酵工艺为:温度37℃,搅拌速率300r/min,通气量3L/min,发酵48h。最后确定最佳补料策略为起始加入30g魔芋粉,对数生长后期再加入90g魔芋粉,最终酶活力可高达3913U/mL,较未优化前(2070U/mL)酶活力提高了89%。
- 解鑫平文祥葛菁萍
- 关键词：地衣芽孢杆菌Β-甘露聚糖酶补料
- 鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2012年
- 用SPF鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)J1C7毒株。用纯化的病毒颗粒提取RNA基因组。根据已报道的IBDV JD1株的VP2序列设计引物,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)进行扩增,将获得的1 359 bp片段克隆于pMD 18-T载体上。经过限制性酶切及PCR鉴定后,得到阳性重组质粒。对VP2基因进行全序列测定表明,克隆的VP2基因长1 359 bp,编码452个氨基酸。J1C7株VP2蛋白高变区内两个亲水区与其他标准Ⅰ型毒株完全相同,而且具有弱毒疫苗株的特征性氨基酸:222P、256V、279N、284T、294L、299N,七肽区的氨基酸序列为SWS ARGS,因此,从分子水平上推断本研究的J1C7株为标准Ⅰ型毒株,且属于弱毒疫苗株。与已报道的IBDV VP2基因的氨基酸序列进行比对,结果表明,本研究的J1C7株与来自欧洲和中国的弱毒疫苗株有密切的亲缘关系。
- 唐晓艳宋姗姗高冬妮楼庄伟平文祥葛菁萍
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2克隆
- 产GABA的乳酸菌菌株的选育及最佳发酵条件研究被引量：6
- 2013年
- γ-氨基丁酸(简称GABA),又称氨酪酸,是一种天然存在的非蛋白质氨基酸。本文主要对GABA高产乳酸菌进行选育,优化其发酵条件。经UV诱变、NTG诱变和UV、NTG复合诱变,得到1株高产GABA的突变株F11。经高效液相色谱测定,在最佳诱变条件下诱变的菌株GABA产量达到0.87 mmol/L,是出发菌株产量(0.21mmol/L)的4倍多。对F11的培养基和发酵条件进行优化,GABA最大产量1.19 mmol/L,是出发菌株HDBR-02产量的近6倍。通过诱变方法获得的GABA高产乳酸菌菌株,扩大了GABA产生菌来源,为GABA的生产奠定了良好的基础。
- 葛菁萍程明宋明明平文祥
- 关键词：Γ-氨基丁酸乳酸菌诱变发酵
- 氦氖激光和亚硝基胍复合诱变选育高产乙醇的休哈塔假丝酵母被引量：2
- 2011年
- 木糖的乙醇发酵一直被视为木质纤维原料生物转化产生乙醇的关键因素,休哈塔假丝酵母(Candidashehatae)是木糖发酵性能较好的天然酵母之一。对Candida shehatae HDYXHT-01进行了氦氖激光诱变和NTG诱变,力求选育出发酵木糖产乙醇能力强的菌株。氦氖激光诱变得到的突变株HN-3乙醇产量为17.03g/L,乙醇得率达到0.3393g/g,相比原始菌株提高20.36%。再对HN-3进行NTG诱变,得到的突变株NTG-2乙醇产量为24.20g/L,相比HN-3提高42.10%。进而对NTG-2菌株进行了摇瓶48h连续发酵试验,测得其乙醇产量、木糖利用率、乙醇得率和乙醇产率分别达到24.16g/L,69.26%,0.4360g/g和0.7075g/(L·h)。
- 葛菁萍孙红兵王轶男宋刚平文祥
- 关键词：休哈塔假丝酵母NTG诱变乙醇
- 构建基于杆状病毒的BV-T7杂合表达体系及利用其在哺乳动物和禽类细胞中表达eGFP基因
- 2012年
- 【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP),从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,结合T7表达系统,通过对eGFP表达水平的调控来把握噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的功能。利用两支重组杆状病毒,pFastBac-CMV-T7 RNAP重组杆状病毒为哺乳动物细胞启动子CMV调控的噬菌体T7 RNA聚合酶的cDNA;pFB-T7pro-IRES-GFP-T7ter重组杆状病毒为T7启动子控制的eGFP报告基因。将两支重组杆状病毒共同侵染哺乳动物OL(oligodendrocyte)细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞。【结果】两支重组杆状病毒利用T7启动子和T7 RNAP,在OL细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中成功表达eGFP报告基因,而且未引起细胞病变,但在鸡胚原代细胞中eGFP的表达相对弱于在OL细胞中的表达。在OL细胞中重组杆状病毒对细胞的转导效率为59.5%,在鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中转导效率分别为23.2%和33.1%。【结论】本研究构建的基于杆状病毒、T7RNA聚合酶、T7启动子(BV-T7)杂合表达体系能够在哺乳类细胞及禽类细胞中表达T7 RNAP,并利用T7RNAP继续高效而稳定地表达外源基因。这为难于体外操作的RNA病毒提供了有效的研究方法,并对新型基因工程疫苗的研制提供了一个高效而稳定的表达载体系统。
- 葛菁萍唐晓艳高冬妮宋姗姗鲁珊楼庄伟平文祥
- 关键词：重组杆状病毒EGFP
- 副干酪乳杆菌prcA基因克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2014年
- 旨在了解副干酪乳杆菌prcA基因的结构和功能,探明prcA基因与副干酪乳杆菌拟群体效应相关基因—自诱导肽编码基因之间的联系。通过PCR方法对副干酪乳杆菌中prcA进行扩增,并通过生物信息学方法对该基因的核苷酸组成、蛋白质构象等方面进行预测和分析。克隆得到的prcA基因全长为416 bp,包括一个138 bp的开放阅读框,编码45个氨基酸,蛋白分子量为5326.83 Da,等电点为4.85,是一种稳定蛋白,不含跨膜区,蛋白质的二级结构以α-螺旋、不规则卷曲和延伸主链组成,亚细胞定位预测显示该蛋白主要位于细胞外;prcA基因为副干酪乳杆菌拟群体效应相关基因—自诱导肽编码基因,负责细菌素生成的调控。
- 王洋葛菁萍由田平文祥
- 关键词：副干酪乳杆菌生物信息学
- 副干酪乳杆菌HD1.7群体感应行为被引量：12
- 2011年
- 【目的】Paracin1.7是从副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD1.7发酵液中提取的一种细菌素,本文主要研究菌株HD1.7在发酵过程中调控Paracin1.7代谢的群体感应机制。【方法】利用杯碟法检测不同生长条件下菌株HD1.7培养液的抑菌活性,通过调整培养基营养成分的多寡,控制培养液中细胞密度。【结果】菌株HD1.7的抑菌活性与其细胞密度密切相关,只有当细胞密度达到一定的阈值(OD600为0.8,菌体干重为0.331 1 g/L)时,菌株才能表现抑菌活性;以发酵上清液作为信号分子,当添加不同浓度信号分子至低于阈值浓度培养液后,菌株抑菌活性受到不同程度的影响,并且在去除信号分子后,菌株的抑菌活性明显降低。【结论】细菌素Paracin1.7是存在于HD1.7发酵液中的特殊的群体感应信号分子,可进行自我诱导。细菌素Paracin1.7的抑菌活性受到HD1.7群体感应系统的调控。
- 葛菁萍房保柱苑婷婷平文祥
