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附睾特异RNase9蛋白对精子的作用被引量：1: 2012年; 目的研究附睾特异表达的RNase9蛋白在精子获能过程中的作用及对精子运动的影响。方法本实验主要采用免疫荧光技术、金霉素染色法以及计算机辅助精子分析法研宄RNase9蛋白或抗体对精子的作用。结果精子在获能过程中RNase9蛋白的定位不断发生改变，顶体反应发生后，精子头部的RNase9蛋白荧光信号明显减弱或消失。精子与RNase9蛋白共同孵育后，精子运动能力也明显降低。结论RNase9蛋白参与精子获能过程并在体外抑制精子的运动。; 刘杰孙成铭张成林张守信; 关键词：精子获能

附睾分泌蛋白与精子成熟的研究进展被引量：8: 2006年; 哺乳动物精子成熟是通过与附睾管腔微环境相互作用而实现的,精子通过在附睾内转运过程中与附睾蛋白相互作用获得运动和精卵识别结合能力。附睾蛋白通过直接或间接参与精子膜修饰或有助于保护精子的完整性参与精子成熟过程,与精子成熟相关的附睾蛋白的研究将有助于推动男性生殖医学的研究进展,同时有可能对附睾环节的男性避孕带来新的思路和突破。; 刘芙君李建远王海燕; 关键词：附睾蛋白精子蛋白质组

重组人附睾特异表达蛋白ESC42及其生物学鉴定被引量：5: 2005年; 　目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料。　方法: 从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备; Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS Fit软件查询NCBI数据库。　结果:获得rhESC42融合蛋白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%, 且符合率为100%。在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β defensin家族,具有抗菌活性。　结论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后的功能研究奠定基础。; 沈肖方李建远王海燕薛江南曹奇志连培文陈辉解美娜; 关键词：附睾大肠埃希菌生物学鉴定

大鼠附睾液蛋白质组二维液相色谱分离的实验研究被引量：1: 2006年; 目的建立一种利用二维液相色谱分离和质谱鉴定大鼠附睾液蛋白质组的实验方法,为以后研究其他哺乳动物附睾蛋白质组提供实验基础。方法分离提取大鼠附睾头、体、尾部管腔蛋白,样品经脱盐、浓缩,利用起始缓冲液置换,进行一维色谱聚焦分离,收集pH4．0—8．5之间的组分进行二维反相色谱分离,并通过自动馏分收集器收集分离组份;最后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成二维pL／UV图谱;选择含高丰度蛋白的馏分经冷冻干燥浓缩后进行质谱鉴定。结果通过二维液相色谱成功分离了大鼠附睾头、体、尾部附睾液蛋白并建立了二维pL／UV图谱;对二维获得的含高丰度蛋白的馏分进行了质谱鉴定,获得大鼠附睾头、体、尾部主要蛋白。结论为进一步利用二维液相色谱全面分离附睾蛋白和研究附睾功能奠定了基础。; 刘芙君李建远王培林张成林王海燕王修海; 关键词：蛋白质组

人附睾ESC42基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达: 2008年; 目的构建人附睾ESCA2（hESCA2）的真核表达载体，分析其在COS-7细胞中的表达。方法从人附睾cDNA文库中PCR扩增hESCA2片段，通过DNA重组构建真核表达载体pEGFP—N1-hESCA2，瞬时转染COS-7细胞，应用RT—PCR、激光扫描共聚焦技术和Western blot检测融合蛋白的表达。结果成功地构建了真核表达载体pEGFP-N1-hESCA2；以重组载体转染COS-7细胞后，RT—PCR结果显示hESCA2与EGFP在mRNA水平正确拼接；共聚焦证实有hESCA2融合蛋白的表达；转染细胞的培养上清浓缩后，进行SDS～PAGE及Western blot分析，可检出hESCA2融合蛋白的表达。结论成功地构建了hESCA2基因，并可在COS-7细胞中分泌表达，为其功能研究提供线索。; 沈肖方连培文李芹赵欣王海燕李建远; 关键词：附睾

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山东省科技发展计划项目(032050102)