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猪瘟兔化弱毒E2蛋白A/D区的高效表达和蛋白纯化及其应用被引量：16: 2003年; 本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件下,对所得的重组蛋白质进行了定量。重组蛋白质被用来包被96孔ELISA板并应用于免疫猪瘟抗体水平的测定。; 苏小运缪德年许立华陈德胜陈溥言; 关键词：猪瘟兔化弱毒原核表达血清抗体

新型SPA协同凝集试验与血凝抑制试验检测猪乙型脑炎病毒特异性抗体的比较被引量：5: 2006年; 用新型SPA协同凝集(SPA-CoA)试验对144份猪血清进行了乙型脑炎病毒(JEV)抗体检测,并与血凝抑制试验(HI)进行了对比。2种方法检测结果,血凝抑制试验检测阳性率为57.63%(83/144),新型SPA-CoA阳性率为63.89%(92/144);二者阳性符合率87.00%(80/92),总符合率为88.89%(128/144)。对8份SPF猪血清进行检测,2种方法检测结果均为阴性。结果表明,新型SPA-CoA与HI检测乙型脑炎结果符合,前者更为简便和实用。; 宋大伟魏建超郑其升周斌曹瑞兵陈溥言; 关键词：乙型脑炎血凝抑制试验

猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因和流感病毒HA基因的联合表达及应用被引量：4: 2003年; 参照已公布的流感病毒血凝素基因(HA基因)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计并合成一对引物P1、P2,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF7片段(约410bp),其中含HA基因主要核苷酸序列(33bp)。用BamH Ⅰ、Xho Ⅰ分别对扩增出的片段及pET32a质粒进行酶切,连接后构建了重组质粒pETHN并转化到BL21(DE3)宿主菌中诱导表达。用纯化后的表达产物与流感病毒血凝素单抗及乳胶建立了诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的乳胶凝集试验。检测结果显示:该方法有良好的特异性及敏感性,与IDEXX公司FLISA检测试剂盒符合率达93.8％。; 许立华苏小运王玲苏鑫铭任雪枫苏春霞陈溥言; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒流感病毒 HA基因血凝素基因乳胶凝集试验

新型SPA协同凝集试验与血凝抑制试验检测猪乙型脑炎病毒特异性抗体的比较: 用新型SPA协同凝集(SPA-CoA)试验对144份猪血清进行了乙型脑炎病毒(JEV)抗体检测,并与血凝抑制试验(HI)进行了对比,两种方法检测结果血凝抑制试验,检测阳性率为57．63％(83／144),新型SPA-Co...; 宋大伟魏建超郑其升周斌曹瑞兵陈溥言; 关键词：乙型脑炎血凝抑制试验; 文献传递

检测CSFV、JEV、PRRSV三种RNA病毒多重RT-PCR方法的建立被引量：15: 2007年; 猪瘟病毒(CSFV)、流行性乙型脑炎病毒(JEV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起严重的种猪繁殖障碍的病原,而且经常混合感染,及时准确诊断是防治的前提。根据GenBank发表序列选取3对引物建立检测CSFV、JEV和PRRSV病毒的多重RT-PCR方法,扩增产物分别为508 bp、380 bp、263 bp。经与IDEXX商品化的检测CSW抗原试剂盒比较,二者的符合率为96.7%;扩增JEV和PRRSV PCR产物分别经EcoR V和Sau3A I酶切得到预期的片段。建立的多重RT-PCR检测JEV、PRRSV和CSFV敏感度分别为12.5个TCID_(50)、10个TCID_(50)和10^(-3)ng总RNA。结果表明该多重RT-PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床三种病毒核酸的检测。; 张雪寒何孔旺郭容利俞正玉倪艳秀; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒多重RT-PCR

猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建被引量：2: 2002年; 根据ＧｅｎＢａｎｋ中猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－２）ＯＲＦ２基因序列，设计一　对引物，应用ＰＣＲ从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症（ＰＭＷＳ）的死亡仔猪组织病料中扩增出ＯＲＦ　２全基因（７０２ｂｐ）。将此片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ　ｅａｓｙ载体，筛选获得重组质粒ｐＴＯＲＦ２，并对此质　粒中的插入序列进行了测序分析，结果表明本试验克隆的ＯＲＦ２与美国ＰＣＶ－２分离株ＡＦ２６４０３９　的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到１００％，与其他ＰＣＶ－２毒株同源性分别为９２．３％～９８．　６％和　９２．３％～９６．６％。重组质粒ｐＴＯＲＦ２经　Ｂａｍ　Ｈ　Ｉ、Ｅｃｏ　Ｒ　Ｖ双酶切，回收ＯＲＦ２基因，转　移入真　核表达载体ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ的相应酶切位点之间，构建成重组质粒ｐＳｅｃＴａｇＯＲＦ２。此重组表　达载体的构建成功为进一步研究ＯＲＦ２编码蛋白的生物学活性及建立ＰＣＶ诊断试剂盒打下基础。; 芦银华陈德胜华修国黄伟坚谈国蕾陈溥言; 关键词：猪圆环病毒 ORF2 真核表达载体基因序列

流行性乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原域的原核表达与间接ELISA检测方法的初步建立被引量：17: 2004年; 重组质粒pET-E转化宿主菌BL21,经1.0mmol/LIPTG诱导,外源基因以包含体的形式获得高效表达。通过Westernblotting检测证明表达产物具有良好的抗原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测JEV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳稀释度为1:2000,血清的最佳稀释度为1:200,待检血清阳性标准初步定为:OD490nm>1.2,且待检血清与阴性血清的OD490nm比值大于2。; 郑其升杨耀武周斌曹瑞兵陈溥言; 关键词：原核表达间接ELISA

猪圆环病毒2型及猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速检测被引量：61: 2003年; According to the published genome sequences of Porcine circovirus type 2 (PCV2) and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), primers were designed and PCR, RT-PCR were set up for the detection of PCV2 and PRRSV, respectively. With the established methods, 38 clinical samples from the respiratory disease pigs were detected for the presence of PCV2 and PRRSV. The results demonstrated that 22 samples were positive for PCV2, 27 samples were positive for PRRSV and among the above positive samples, 18 samples were positive for both viruses. The data obtained in the present study indicated that PCV2 and PRRSV maybe play an important role in the course of the development of respiratory diseases.; 芦银华许立华华修国谈国蕾黄伟坚陈德胜陈溥言; 关键词：猪圆环病毒2型共感染呼吸道疾病 PCR RT-PCR

猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位基因的原核表达及应用: 将构建好的重组质粒PET-VP2转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了PPV VP2基因的高效表达。通过Western-blot检测证明表达的重组蛋白具有良好的免疫学活性。表达产物经HisBind层...; 李斐任雪枫郑其升魏建超曹瑞兵周斌陈溥言; 关键词：原核表达间接ELISA; 文献传递

猪圆环病毒2型ORF2编码基因真核表达载体的构建及表达被引量：3: 2003年; 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计了1对引物,应用PCR从含有PCV-2的PK-15细胞中扩增出ORF2基因,将其克隆入pSecTag2载体中,构建了pSecORF2载体。又设计一条含信号肽序列的上游引物,以pSecORF2为模板,扩增出含信号肽序列的ORF2基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRESiORF2真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO细胞,进行表达。间接免疫荧光实验(IFA)成功检测到pIRESiORF2在CHO细胞中的表达。这为进一步研究ORF2编码蛋白的生物学活性及建立PCV诊断试剂盒打下基础。; 谈国蕾胡志华芦银华陈德胜陈溥言; 关键词：猪圆环病毒 ORF2 编码基因真核表达载体

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国家高技术研究发展计划(2001AA249012)

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