中国博士后科学基金(20060390944)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
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- 猪繁殖和呼吸综合症病毒河南地方株ORF5/6基因的克隆及真核表达
- 2008年
- 应用RT-PCR方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)河南地方株的ORF5和0RF6基因。将扩增基因克隆入真核表达载体pcDNA3.0中,设计不同引物自行构建重组质粒PcDNA-ORF5、ORF6和pcDNA-ORF5/6。运用磷酸钙法将重组质粒分别瞬时转染293T细胞,经流式细胞和westbloting试验分析表明共表达重组质粒PcD-NA-ORF5/6表达蛋白能够与PRRSV的阳性血清发生特异性反应,而pcDNA-ORF5-ORF6在293T细胞很难检测到蛋白表达。该结果表明蛋白质生物活性和其蛋白质空间构象有一定关系,也为下一步进行构建PRRSV假型病毒来研究ORF5/6蛋白的结构与功能的关系奠定了基础。
- 党占国李志勇夏平安陈溥言崔保安李伟娟王中明
- 关键词：PRRSV克隆真核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白介导的E蛋白假型鼠白血病病毒的构建
- 利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,4...
- 党占国夏平安周斌陈溥言崔保安邱璜卢高峰
- 关键词：假病毒鼠白血病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 文献传递
- 整合猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的重组鼠白血病病毒特性被引量：1
- 2008年
- 通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒完整的GP5基因并进行了克隆与鉴定。序列测定结果与已经登陆GenBank的EF488048高致病性江西株比对分析表明碱基同源性达98.7%。构建含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染人胚肾细胞293T,48h后收集假病毒上清,超离后通过Western-blot证明GP5蛋白在假型病毒颗粒表面存在,表明GP5蛋白被整合到此假型病毒粒子表面。通过感染293T、Mark-145不同的靶细胞,证实所构建的假型病毒粒子具有感染性。成功构建了具有感染性的MuLV-GP5假病毒体系,为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法。
- 党占国夏平安周斌尹彦涛王建举柴春霞崔保安陈溥言
- 关键词：鼠白血病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因假病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白介导的E蛋白假型鼠白血病病毒的构建被引量：3
- 2008年
- 利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcD-NA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSVORF5基因编码囊膜蛋白(E蛋白)能在在293T细胞表面表达,而由共表达M蛋白(ORF6基因编码的基质蛋白)介导的E蛋白的表达量比单独E蛋白表达量高,串联表达与单独E蛋白相比较低。将pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6分别与MuLV假病毒构建体系的两种骨架载体pHIT60(包括MuLV的结构蛋白基因,即gag和pol)和pHIT111(为MuLV的基因组,还包括一个报告基因LacZ)瞬时共转染293T细胞,48h后收集假病毒上清,超速离心后通过Westernblot证实E蛋白能够在此假病毒颗粒表面表达,证明E蛋白已整合到此假病毒粒子表面。将整合PRRSVE蛋白的假病毒粒子分别感染Marc-145和PAM宿主靶细胞,均能检测到LacZ基因的表达,结果表明:所构建的假病毒粒子具有感染性,且由M蛋白介导的MuLV-E/M感染性比MuLV-E假病毒感染性高。
- 夏平安党占国周斌陈溥言崔保安邱璜卢高峰
- 关键词：假病毒鼠白血病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株GP5基因的克隆及在293T细胞中表达
- 2008年
- 根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株GP5基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增PRRSV Hn/06-1分离株GP5基因片段.将扩增片段克隆到真核表达载体pcDNA3.0中,测序后用DNAstar序列分析.构建的pcDNA-GP5重组质粒瞬时转染293T细胞,48 h后用Western-blot检测,证明GP5基因在293T细胞中获得了表达,可与PRRSV阳性血清发生特异性反应.
- 党占国夏平安高进勇尹彦涛王建举崔保安陈溥言
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因克隆真核表达
- PRRSV河南地方分离株ORF 2～6基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2008年
- 根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ATCC VR-2332株的ORF2～6基因的核苷酸序列，设计合成4对特异性引物，用RT—PCR方法扩增出PRRSV河南地方株（命名为HN-2株）的ORF 2～6片段，克隆到pUC-57T载体并进行测序。应用DNAStar序列分析软件对分离株的ORF 2～6基因和其推导的氨基酸序列与不同来源的9个PRRSV毒株进行了同源性比较，结果表明：该分离株的ORF 2～6基因与不同来源美洲型毒株之间的同源性分别为89．1％～98．1％和81．4％～96．1％，而与欧洲型毒株之间的同源性仅为46．9％～61．9％和44．2％～45．0％；同时将分离株ORF 2～6基因的推导氨基酸序列与7个关洲型PRRSV毒株进行变异分析比较，证实了该分离株ORF 2～6基因发生了变异。
- 党占国李志勇陈溥言崔保安夏平安
- 关键词：PRRSVORF基因克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株ORF5基因的克隆及在293T细胞中表达
- 根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株ORF5基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增PRRSV Hn/06-1分离株ORF5基因片段。将扩增片段克隆到真核表达...
- 党占国夏平安崔保安张红英尹彦涛王建举柴春霞陈溥言
- 关键词：PRRSVORF5基因真核表达
- 文献传递
