广东省自然科学基金(06107503)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 相关作者：江千里周光飚胡政裴国献江汕更多>>
- 相关机构：中国科学院广州生物医药与健康研究院南方医科大学南方医院中国科学技术大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 二萜化合物Rabdocoetsin B抑制蛋白酶体功能并诱导t(8;21)白血病细胞凋亡被引量：2
- 2009年
- 从香茶菜属植物细锥香茶菜中分离得到的二萜类化合物Rabdocoetsin B(Rabd-B),研究其对人类t(8;21)白血病细胞凋亡的诱导作用及其对蛋白酶体19S泛素识别亚基S6’(Rpt5)的抑制作用,为Rabd-B应用于t(8;21)白血病治疗提供实验依据。以不同浓度的Rabd-B处理t(8;21)白血病Kasumi-1细胞,应用CCK-8法检测细胞活力,用Bliss法计算IC50值,通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以稳定表达pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞作为蛋白酶体抑制剂筛选模型,荧光显微镜成像拍照GFP荧光。Western blotting检测不同浓度的Rabd-B处理Kasumi-1,检测Casp-3、S6’(Rpt5)、PARP、ubiqutin在该细胞内的表达变化。结果显示,Rabd-B明显抑制t(8;21)阳性的Kasumi-1细胞生长,48 h的IC50值为1.27μmol/L;同时诱导Kasumi-1细胞凋亡效果显著;荧光显微镜观察药物处理和未处理的pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞Ub-GFP表达,结果显示GFP平均荧光值随药物浓度增高而增强;Rabd-B处理Kasumi-1细胞24、48 h后蛋白质免疫印迹技术检测Casp-3、PARP,发现Casp-3激活,其底物PARP发生切割产生85 kD的降解带;2.5、5.0μmol/L Rabd-B处理Kasumi-1细胞24、48 h后Western blotting检测蛋白酶酶体组分,发现19S调节亚基S6’(Rpt5)降解,细胞内泛素化水平增高。以上结果说明,Rabd-B一方面通过激活Caspase级联反应,另一方面抑制蛋白酶体19S泛素识别亚基,导致细胞内泛素化积累,进而抑制t(8;21)白血病细胞生长并诱导其凋亡。
- 冯婷婷普建新胡政刘大鹏孙汉董周光飚
- 关键词：泛素凋亡
- 一种基于绿色荧光蛋白的蛋白酶体抑制剂细胞筛选模型被引量：4
- 2009年
- 为建立基于绿色荧光蛋白(GFP)的药物筛选模型,并用此模型从包括中药提取物在内的化合物中筛选新型蛋白酶体抑制剂,本研究构建了pGC-E1-ZU1-GFP融合蛋白慢病毒表达载体并感染A549细胞,筛选稳定表达细胞株,用已知蛋白酶体抑制剂PS-341处理细胞,荧光显微镜检测处理前后细胞GFP水平变化。结果获得了稳定表达pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞,这些细胞用PS-341处理24h后用荧光显微镜检测,发现细胞绿色荧光强度相对于对照组明显增强。利用这一模型对一些化合物进行筛查,发现了一些新的蛋白酶体抑制剂。
- 方海同胡政周光飚
- 关键词：蛋白酶体抑制剂绿色荧光蛋白
- 蛋白酶体活性测定与组分分析方法的建立被引量：4
- 2010年
- 背景:26S蛋白酶体对维持细胞周期、增殖、生存等细胞生物学行为的正常具有极其重要的作用,但目前对细胞体内蛋白酶体活性的测定及组分分析缺少明确的方法。目的:建立蛋白酶体活性与组分的分析方法,用以检测肿瘤组织、细胞蛋白酶体的活性状态与组分表达情况。方法:应用3种特异性的荧光多肽底物Suc-LLVY-AMC、Z-ARR-AMC和Z-LLE-AMC建立对蛋白酶体的糜蛋白酶样、胰蛋白酶样和肽基谷氨酰肽水解酶样蛋白酶活性的测定方法。并基于蛋白酶体特异亲和性探针AdaK(Bio)Ahx3L3VS建立对蛋白酶体各亚基(包括β1/β1i,β2/β2i,β5/β5i)组分分析的方法。结果与结论:利用特异性的荧光多肽底物检测蛋白酶活性及蛋白酶体特异亲和性探针检测蛋白酶体亚基组分分析的方法发现在K562红白血病细胞,β2、β5亚基表达较高,而蛋白酶体抑制剂PS341及PSI对K562细胞的蛋白酶体活性与组分的抑制作用主要是靶定在β5和β5i亚基,抑制其糜蛋白酶样活性。实验建立了对以上3种蛋白酶体活性测定及组分分析的方法,为蛋白酶体抑制剂的体外活性鉴定提供了实验方法。
- 陈晓勤潘小芬谢军
- 关键词：蛋白酶体活性蛋白酶体抑制剂蛋白酶体活性
- 骨性材料复合绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞研究体系的建立与应用被引量：3
- 2009年
- 背景:由于骨性生物材料和骨组织本身坚硬致密的物理特性,限制了对生长在其中的靶细胞的示踪研究。目的:针对骨性材料含钙、透光性差的特性,拟建立骨性材料复合绿色荧光蛋白基因标记的骨髓间充质干细胞的研究体系。设计、时间及地点:体外观察实验,于2008-06/2009-01在南方医科大学南方医院骨与软骨再生医学重点实验室完成。材料:β-磷酸三钙多孔骨性生物支架材料(1cm×1cm×0.8cm)购自上海贝奥路生物材料有限公司。3月龄新西兰大白兔用于获取并培养骨髓间充质干细胞。方法:①骨髓间充质干细胞以携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体标记后,接种于β-磷酸三钙骨性生物支架材料内部。②以荧光倒置显微镜观测材料中细胞的生长情况,并通过荧光定量聚合酶链反应等检测材料内部细胞的增殖情况。③以自创的半固体脱钙体系对复合细胞的材料脱钙后,制备连续冰冻切片观察;同时,采用不脱钙塑料包埋、扫描电镜等方法观察。主要观察指标:骨性材料中绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的分布、形态及增殖情况。结果:①荧光显微镜下观察到绿色荧光细胞在材料内部生长、增殖。②普通聚合酶链反应可对材料内的绿色荧光细胞进行定性分析,荧光定量聚合酶链反应检测的Ct值和接种的绿色荧光细胞数量呈指数相关,故可以对材料中的绿色荧光细胞进行定量分析。③半固体脱钙可使骨性材料内部坚硬的钙质成分消失,而细胞所在的位置、形态和荧光不变;不脱钙塑料包埋可以原位保留细胞形态和荧光,但仅适用于小块组织;而扫描电镜观察范围有限,细胞无法保留荧光。结论:建立了可在骨性材料内部方便、直观地追踪绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的体系,具有广泛的应用前景。关键词:骨组织工程;绿色荧光蛋白;半固体脱钙;荧光定量聚合酶链反应;
- 江汕江千里裴国献赵培冉易正山
- 关键词：骨组织工程绿色荧光蛋白荧光定量聚合酶链反应塑料包埋
- 半固体脱钙对骨性材料内部绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:通过试制半固体脱钙体系,建立在坚硬、透光性差的骨性材料内部观察、研究荧光基因标记细胞的方法。方法:靶细胞以携带绿色荧光蛋白的重组慢病毒载体标记后,接种于骨性生物支架材料内部;负载荧光细胞的生物材料经多聚甲醛固定后,研究不同脱钙剂对细胞荧光的影响;负载荧光细胞的生物材料经自创的半固体脱钙体系脱钙后,制备冰冻切片,并与塑料包埋切片、常规石蜡切片比较。结果:荧光倒置显微镜可以观察到在生物材料内部生长的绿色荧光细胞。骨性材料在半固体脱钙过程中,荧光倒置显微镜可以观察到,材料中不透光的坚硬钙质成分逐渐消失,而细胞在原位保持形态和荧光;以不脱钙塑料包埋切片为对照,半固体脱钙和随后的冰冻切片可原位精细保持细胞的荧光和形态,且可适用于大块骨性组织。结论:本研究采用自行试制的半固体脱钙体系,可原位保留骨性材料内部生长细胞的位置、形态和荧光,为进行骨性材料内部结构及功能的相关研究提供依据。
- 江汕江千里裴国献赵培冉
- 关键词：骨髓间充质干细胞绿色荧光蛋白
- “五字诀”优化骨髓穿刺培训体系被引量：4
- 2010年
- 骨髓穿刺术是临床常用的四大穿刺术之一,对相关疾病的诊断、治疗和预后有重要意义,但其对操作者理论、技能和心理素质的要求均较高。医学实习生刚刚接触临床,如按照以往的方式教学,熟练掌握骨穿技术需要较长时间。作者以独创的"骨穿五字诀——净准好直快"为核心,实施循证教学,突破了以往的教学瓶颈,在大规模培训中取得了良好的效果。
- 郑潇潇郑维扬江千里徐波儿何美蓉孟卫东
- 关键词：骨髓穿刺实习生循证教学医学教育
