四川省应用基础研究计划项目(07JY029-128)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 相关作者：字向东陈达文徐华伟黄磊梁冠男更多>>
- 相关机构：西南民族大学青海省畜牧兽医科学院更多>>
- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目四川省学术和技术带头人培养资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 体外受精条件对牦牛与黄牛异种受精的影响被引量：1
- 2010年
- 本实验通过改变体外受精精子浓度（0．5×10^6、2×10^6、8×10^6个／mL），精卵共培养时间（12h、18h、24h），体外受精96h后是否更换培养液（IVC）以及氧气的含量（5％CO2和5％CO2、5％O2、90％N2）等培养条件，观察牦牛精子对黄牛卵母细胞受精后卵裂和早期胚胎发育状况．结果显示精子浓度为2×10^6个／mL、精卵共培养24～26h、培养96h后要更换培养液，在5％CO2、5％O2、90％N2的条件下培养，受精和早期胚胎的发育．
- 王红梅梁冠男字向东陈达文黄磊徐华伟穆晓琨
- 关键词：牦牛IVF卵裂率囊胚率
- 牦牛胚胎性别鉴定PCR反应体系的建立被引量：6
- 2011年
- 研究旨在建立牦牛胚胎性别鉴定准确、可靠的PCR反应体系及研究切割取样对胚胎发育能力的影响。根据牦牛SRY和HSL基因序列分别设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物和2对引物作为内标引物,通过优化PCR反应条件,对已知性别牦牛血液基因组DNA和牦牛杂种胚胎DNA采用巢式PCR进行性别鉴定。结果表明,血液样本性别鉴定与实际性别完全相符,准确率100%。从早期胚胎取8个细胞进行性别鉴定,结果雄性为45.8%(11/24),雌性为54.2%(13/24),取样后胚胎发育率为56.7%。结果说明已成功建立牦牛胚胎性别鉴定的PCR体系。
- 张大伟字向东黄磊马力陈达文徐华伟梁冠男
- 关键词：牦牛体外受精巢式PCR性别鉴定
- 牦牛生长分化因子-9基因cDNA克隆及序列分析被引量：5
- 2009年
- 根据GenBank中普通牛生长分化因子9(GDF-9)基因序列(AF 307092)设计1对引物,以麦洼牦牛卵母细胞总RNA为模板,通过RT-PCR技术对牦牛GDF-9基因cDNA进行克隆测序和序列分析。结果表明:所克隆的1399 bp片段为预期的牦牛GDF-9基因cDNA序列,包含由2个外显子组成的全编码区和3′-下游部分序列。牦牛GDF-9基因编码区核苷酸序列长度为1362 bp,编码453个氨基酸,与GenBank中报道的普通牛、水牛、绵羊、山羊相应序列一致,而与人和黑猩猩存在差异。和普通牛相比,牦牛GDF-9基因编码区存在1处碱基转换(C→T),导致相应的氨基酸由丙氨酸(A)转换为缬氨酸(V)。牦牛与普通牛、水牛、绵羊、山羊、人和黑猩猩的核苷酸同源性分别为99.9%、98.4%、97.0%、96.8%、85.6%和85.1%;氨基酸同源性分别为99.8%、97.1%、95.1%、95.4%、79.4%和79.5%。利用NJ法和MP法以该基因编码区核苷酸序列构建的物种间分子系统进化树结果基本一致,即牦牛与普通牛先聚为一类,再与水牛聚为一类,而后与绵羊和山羊聚为一类,最后与人和黑猩猩聚为一类。该聚类结果与物种间遗传距离大小一致,也与各物种在动物学上的分类相吻合,表明GDF-9基因编码区适用于构建物种间系统进化树。
- 尹荣华字向东马志杰陈绍威张大伟梁冠男
- 关键词：牦牛GDF-9克隆
- 牦牛催乳素受体基因部分片段的克隆与序列分析被引量：3
- 2010年
- 扩增出牦牛催乳素受体(PRLR)基因部分保守序列,为研究牦牛乳腺组织中PRLR基因表达水平奠定基础.提取牦牛乳腺组织总RNA,根据NCBI的奶牛PRLR基因cDNA序列的保守区设计特异性引物,采用RT-PCR技术扩增牦牛PRLR基因,结果获得577 bp的片段,将该片段连接于pMD18-Simple质粒中,转化大肠杆菌,菌液PCR鉴定阳性克隆子,测序并分析氨基酸序列.分析序列与氨基酸与其他物种同源性,结果表明该序列与水牛、奶牛、绵羊、人、小鼠的PRLR基因mRNA的对应序列的同源性分别为97.40%、99.13%、93.41%、71.07%、60.20%,编码的氨基酸同源性分别为97.40%、100%、95.83%、82.38%、72.22%.
- 陈达文字向东徐华伟黄磊穆晓琨
- 关键词：牦牛催乳素受体克隆
- 牦牛ZP3基因的克隆及蛋白质结构的预测被引量：5
- 2010年
- 本研究对牦牛ZP3基因的编码区进行了克隆,在此基础上对ZP3蛋白的分子结构预测,为研究牦牛受精生物学提供基础。根据GenBank中普通牛的ZP3核苷酸序列设计特异性引物,以牦牛卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增牦牛ZP3基因cDNA序列(GenBank登录号为GQ856646),利用DNAMAN生物软件进行核苷酸和氨基酸序列分析、蛋白质专家系统ExPASy进行ZP3蛋白质分子结构预测。结果表明,扩增出的牦牛ZP3基因编码序列长1 266 bp,编码421个氨基酸。牦牛与牛、猪、狗、人、鼠和鸡ZP3基因核苷酸相应序列的同源性分别为98.42%、96.73%、79.67%、78.71%、69.15%和56.61%,氨基酸同源性分别为98.10%、83.85%、74.24%、70.26%、62.62%和46.12%,符合物种进化规律。预测的ZP3蛋白二级和三级结构显示它是一个具有22个氨基酸信号肽的亲水性β-桶状跨膜蛋白。牦牛ZP3基因编码区的成功克隆,为进一步研究该基因的结构与功能及其在受精过程中的作用提供了基础。
- 徐华伟字向东黄磊陈达文穆晓琨王红梅
- 关键词：牦牛克隆分子结构
