国家自然科学基金(31071922)
- 作品数：7 被引量：57H指数：3
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- 动物内源性多肽CGA-N46生物信息学分析被引量：8
- 2013年
- 抗菌肽是存在于动植物、昆虫、微生物等生物体内,具有抗菌活性的肽类物质。CGA-N46是一种抗真菌多肽。利用生物信息学工具分析CGA-N46,发现CGA-N46等电点为7.38,分子质量为5.363ku,为亲水蛋白,二级结构为α螺旋,有两个磷酸化位点,无糖基化位点、信号肽序列和跨膜区。通过对CGA-N46结构与性质的分析,推测其可能作用于细胞壁或某些生物分子,致使菌体死亡。
- 李瑞芳卢研博陈士华张慧茹王彬熊前程
- 关键词：生物信息学抗菌肽
- 纳米伊曲康唑药代动力学特性初步研究
- 2015年
- 伊曲康唑难溶于水,使其用药方式受到限制.以多聚物5k PEGCA8作为包裹物,采用薄膜分散法制备伊曲康唑纳米粒,静脉注射小鼠体内,采用荧光-HPLC测定血液和体内组织中伊曲康唑药物浓度,并通过药代动力学软件Win Nonlin测定纳米粒型伊曲康唑在小鼠体内的药代动力学特性.结果表明:小鼠血液最大浓度Cmax为(2.850±0.075)μg/L,血药浓度-时间曲线下面积AUC(0-∞)为(25 490.84±720.416)(μg·h)/L,半衰期t1/2z为(6.526±1.386)h,达锋时间Tmax为1h.研究结果表明,纳米型伊曲康唑可以有效解决伊曲康唑难溶于水的问题,为伊曲康唑注射针剂的开发提供了参考.
- 李瑞芳刘帅杨硕晔苏兰利
- 关键词：伊曲康唑纳米粒
- 抗菌肽CGA-N46对皮肤感染克柔念珠菌小鼠的治疗作用被引量：3
- 2015年
- 为研究抗菌肽CGA-N46对皮肤感染克柔念珠菌小鼠的治疗效果,用克柔念珠菌感染免疫抑制小鼠制备感染模型,采取皮肤病变观察、皮下脓疱液和痂皮分离真菌,确定建模是否成功。对克柔念珠菌感染小鼠模型分别涂抹4 mg/mL和8 mg/mL CGA-N46进行治疗,以成活率、有效率和组织病理变化判断CGA-N46治疗效果。结果表明,以2×108 CFU/mL克柔念珠菌菌悬液感染表皮可建立感染模型;4 mg/mL和8mg/mL CGA-N46均能提高克柔念珠菌感染小鼠成活率,对克柔念珠菌皮肤感染有缓解作用,其中8mg/mL CGA-N46治疗效果更好。结果证实,CGA-N46对克柔念珠菌临床感染有治疗效果,具有开发成新型抗真菌药物的潜力。
- 张琳李瑞芳张慧茹钟升威黄亮
- 关键词：抗菌肽克柔念珠菌皮肤真菌感染
- 动物内源性多肽CGA-N46抗菌谱及对动物细胞的作用被引量：8
- 2014年
- 目的研究抗真菌肽CGA-N46的抗菌谱及对不同动物细胞的作用效果。方法采用微量稀释法测定CGAN46对14种常见病原真菌的抗菌活性;采用分光光度法检测CGA-N46对红细胞的溶解作用,采用MTT法测定CGAN46对鸡胚成纤维细胞的毒性作用及对癌细胞的抑制作用。结果 CGA-N46对光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、白念珠菌具有抑菌活性,其MIC分别为4.0、4.0、0.5、1.0、1.0mg/ml;最小抑菌浓度的CGA-N46无溶血作用,对鸡胚成纤维细胞无毒性,但对肺癌A549细胞有抑制作用,72h最大抑制率为60.53%。结论 CGA-N46多肽具有抗念珠菌作用,且具有抗癌潜力,而对正常细胞安全、无毒性。
- 卢亚丽张慧茹李瑞芳卢研博翟晋豫阎晓慧
- 关键词：抗菌谱细胞毒性
- 动物内源性多肽CGA-N46对念珠菌细胞增殖的影响被引量：1
- 2014年
- CGA-N46是人嗜铬粒蛋白N端具有抗真菌活性的多肽片段。采用MTT法检测CGA-N46对克柔念珠菌生长的抑制作用,以β-1,3-葡聚糖酶活性检测克柔念珠菌细胞壁的完整性,采用PI检测克柔念珠菌细胞膜通透性,用罗丹明123检测线粒体膜电位。试验结果证实,0.5 mg/mL的CGA-N46能够明显抑制克柔念珠菌的细胞增殖能力;对其细胞壁的完整性及细胞膜的通透性没有影响;CGA-N46能明显降低线粒体膜电位。推测CGA-N46可能通过影响线粒体膜电位来抑制克柔念珠菌的生长。
- 阎晓慧李瑞芳张慧茹尹艳杰卢研博卢亚丽
- 关键词：克柔念珠菌抑菌作用线粒体膜电位
- 抗真菌肽CGA-N46基因多顺反子表达载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的:为提高抗真菌肽CGA-N46表达量,对该基因多顺反子表达进行研究。方法:以pEASY-Blunt为克隆载体,以"pET-30a rbs序列-起始密码子-CGA-N46编码序列-终止密码子"为外源片段,利用同尾酶Nhe I、Spe I和Xba I,构建了含有上述外源片段1、3、5、8拷贝的重组载体pT-CAN46、pT-3CAN46、pT-5CAN46和pT-8CAN46;将pEASY-Blunt上的外源基因片段亚克隆至pET-30a的rbs序列下游,构建了CGA-N46基因1、3、5、8顺反子的重组表达载体pET-CAN46、pET-3CAN46、pET-5CAN46和pET-8CAN46;利用感受态转化法转化大肠杆菌Rosetta,进行了表达研究。结果:在IPTG诱导下,CGA-N46基因1、3、5、8顺反子重组表达载体均能表达CGA-N46单体,各重组表达载体表达CGA-N46的量在总蛋白中的百分含量分别为3.4%、5.0%、12.4%、17.1%。结果表明随着CGA-N46基因顺反子个数的增加,外源蛋白表达量也越来越多。其中,8顺反子表达量最高,实现了CGA-N46的高效表达。结论:多顺反子表达可以克服融合表达和串联表达肽类蛋白的不足;创建的多顺反子表达载体构建方法简化了传统基因工程构建方法的步骤,为基因工程有效提高小肽表达量奠定了基础。
- 李瑞芳熊前程张宗武黄亮王彬
- 关键词：抗真菌肽
- 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究被引量：39
- 2011年
- 为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进。用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DB1342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5 kb质粒pSBPTQ进行转化,并研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培养方法对枯草芽孢杆菌质粒转化的影响。结果表明,该方法适用于不同基因型枯草芽孢杆菌的质粒转化,营养缺陷型突变株DB1342的转化率为750 CFU/μgDNA,非营养缺陷型突变株WB800转化率为1 070 CFU/μg DNA,野生型菌株BS501a转化率为270 CFU/μg DNA。根据影响转化效率的因素,推测在该方法中,枯草芽孢杆菌质粒转化原理:一定生物量的枯草芽孢杆菌在外界营养条件和钙、镁离子作用下,细胞壁和细胞膜形成缺陷,使外源DNA转入枯草芽孢杆菌细胞内。
- 李瑞芳薛雯雯黄亮熊前程王彬
- 关键词：枯草芽孢杆菌感受态细胞
