湖北省卫生厅青年科技人才基金(QJX2005-15)
- 作品数：8 被引量：33H指数：4
- 相关作者：张力胡钧涛涂汉军李东升李新建更多>>
- 相关机构：太和医院华中科技大学十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)更多>>
- 发文基金：湖北省卫生厅青年科技人才基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GFP-BMSC-TRAIL载体的构建及其生物学活性的检测被引量：1
- 2014年
- 目的探讨转染肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因的骨髓间充质干细胞（BMSCs）基因表达情况。方法实验分3组：实验组转染TRAIL基因至绿色荧光蛋白（GFP）标记的BMSCs，空载体组转染空载体脂质体，对照组即空白对照的BMSCs。采用脂质体法将TRAIL转入GFP—BMSC中，RT-PCR法检测豫A／LmRNA水平的表达，Western blotting、免疫荧光检测TRAIL蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染后BMSCs的增殖活性。结果免疫荧光显示．转染豫A儿后24h和48h在胞浆和胞膜可见到TRAIL蛋白的表达，24h比48h荧光明显增强，对照组及空载体组未见表达；RT．PCR、Western blotting显示实验组TRIAL高表达，对照组及空载体组未见高表达；MTT法证实转染后BMSCs细胞的增殖活性无明显影响。结论构建的BMSC—TRAIL载体能够稳定表达目的基因，BMSCs可做为生物载体。
- 汤祥军鲁军体张力黄宽明曹刚罗杰陈晓涂汉军
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体骨髓间充质干细胞
- 大鼠骨髓基质细胞移植治疗胶质瘤的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的将Wistar大鼠骨髓基质细胞体外移植入C6胶质瘤大鼠模型,观察其生物学特性及大鼠存活状态。方法建立C6载瘤模型和骨髓基质细胞移植治疗模型;待术后生长至3w和4w时行MRI检测;不同时间段内大鼠脑标本行免疫组化染色。结果骨髓基质细胞移植组模型平均生存时间为4.03w;对照组平均生存时间为3.88w;且其平均肿瘤体积与对照组无明显差异。大鼠体内移植体外培养5月余的骨髓基质细胞未发现肿物生成。骨髓基质细胞包绕在胶质瘤周围,对胶质瘤细胞有定向靶向作用。结论骨髓基质细胞对胶质瘤有定向靶向作用,可以安全的作为生物载体转染目的基因治疗胶质瘤。
- 罗杰张力胡钧涛李新建李东升雷霆
- 关键词：胶质瘤骨髓基质细胞
- 大鼠胚胎神经干细胞的体外培养及冻存被引量：7
- 2007年
- 目的体外培养、冻存大鼠胚胎神经干细胞（NSCs），观察其生长、增殖特点及复苏后的活性。方法取孕15d的大鼠海马区细胞，体外培养。以20％牛血清白蛋白（BSA）加10％二甲基亚砜（DMSO）作冷冻保护剂，于液氮中冻存。复苏后计数活细胞数，免疫细胞化学鉴定其分化状态。结果第1-4代NSCs复苏后神经干细胞存活率在40％～63％之间，差异无统计学意义。冻存复苏后的NSCs能够存活、传代，并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论大鼠胚胎神经干细胞能够在体外增殖、分化，并且冻存复苏不影响其生物学特点和细胞活性。
- 涂汉军胡钧涛张力李东升李新建陈晟
- 关键词：胚胎神经干细胞冻存
- 大鼠胚胎神经干细胞移植治疗C_6胶质母细胞瘤被引量：6
- 2007年
- 目的将Wistar大鼠神经干细胞移植入C6胶质瘤模型,观察其生物学特性,为神经干细胞转染目的基因移植治疗颅内肿瘤提供可靠的依据。方法建立25只C6载瘤模型和35只神经干细胞移植治疗模型;待肿瘤生长至3周和4周时,两组分别随机抽取5只大鼠行MRI检测;分不同时间段大鼠灌注取材,分别做HE染色、GFAP及BrdU免疫组化染色。结果神经干细胞移植组模型平均生存时间为4.28周;对照组平均生存时间为3.88周;且其平均肿瘤体积比对照组小。BrdU染色显示沿针道及与C6胶质瘤交界的部位有大量BrdU标记阳性的神经干细胞。结论神经干细胞对胶质瘤有定向靶向作用,能够“追踪”渗透到周围正常组织的肿瘤细胞,可以作为生物载体转染目的基因治疗胶质瘤;神经干细胞对胶质瘤细胞的生长有抑制作用,能够延长大鼠模型的生存期。
- 张力涂汉军胡钧涛李新建李东升黄宽明付锐刘涛
- 关键词：胚胎神经干细胞
- 大鼠胚胎神经干细胞两种不同分离、传代方法的比较被引量：13
- 2006年
- 目的体外培养大鼠胚胎神经干细胞(NSCs),比较不同分离、传代方法对其生长的影响。方法取怀孕15d的大鼠,分别用机械分离法和含0.01%EDTA的胰蛋白酶消化法分离海马区细胞,均以1×106/mL的活细胞密度接种到无血清的NSCs培养基中培养,分离纯化至P5代。以含10%胎牛血清(FBS)和2%多聚赖氨酸的DMEM/F12诱导分化,免疫细胞化学鉴定。结果机械分离组获得的活细胞及培养后的神经干细胞球数目明显多于胰蛋白酶消化组,其细胞贴壁率却高于胰蛋白酶消化组。取神经干细胞球及诱导分化后的细胞作免疫细胞化学染色鉴定,细胞分别呈Nestin、β-tubulin-Ⅲ、GFAP和O4阳性反应。结论大鼠胚胎海马区有NSCs存在,离体培养时能分裂增殖,并能被诱导分化。机械分离法和胰蛋白酶消化法各有利弊,可以根据实验情况交叉采用两种不同的分离方法,以稳定高效地培养出NSCs。
- 胡钧涛涂汉军张力李东升李新建黄宽明付锐
- 关键词：胚胎神经干细胞细胞培养
- 大鼠胚胎NSCs与人胚NSCs的比较
- 2007年
- 目的探讨体外培养的大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)及人胚NSCs的生长增殖特点。方法取孕15d的大鼠,采用胰酶消化法获取海马区细胞,以106个/ml的细胞密度接种到无血清NSCs培养基中培养,分离纯化至第5代后,以10%胎牛血清(FBS)和2%多聚赖氨酸诱导分化,免疫细胞化学鉴定。同样方法分离、培养人胚海马区细胞。结果取大鼠胚胎NSCs和人胚NSCs的细胞球及诱导分化后的细胞作免疫细胞化学染色鉴定,细胞分别呈巢蛋白(nestin)、微管蛋白(β-tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学反应阳性。结论大鼠胚胎海马区与人胚海马区均有NSCs存在,离体培养时能分裂增殖,并能被诱导分化,且两者形态相似,但是其生长速度、体积大小有差异。
- 涂汉军张力胡钧涛李新建李东升黄宽明付锐
- 关键词：胚胎NSCS细胞培养
- 大鼠胚胎神经干细胞的培养与鉴定被引量：7
- 2006年
- 目的体外培养大鼠胚胎神经干细胞(NSCs),观察其生长、增殖特点。方法取孕15d的大鼠,采用机械分离法获取海马区细胞,以106个细胞/m l的密度接种到无血清NSCs培养基中培养,分离纯化至第5代。以10%胎牛血清(FBS)和2%多聚赖氨酸诱导分化,免疫细胞化学鉴定。结果取NSCs的细胞球及诱导分化后的细胞作免疫细胞化学染色鉴定,细胞分别呈小鼠抗巢蛋白(nestin)、小鼠抗微管蛋白(-βtubu lin)、豚鼠抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小鼠抗O4免疫化学反应阳性。结论大鼠胚胎脑海马区有NSCs存在,离体培养时能分裂增殖,并能被诱导分化。
- 胡钧涛涂汉军张力李东升李新建黄宽明付锐
- 关键词：胚胎神经干细胞细胞培养
- 外源性TRAIL基因转染对胶质瘤C6细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨外源性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因对大鼠C6胶质瘤细胞的凋亡作用。方法 C6细胞在杜伯改良的Eagle培养基(DMEM),37℃,5%CO2条件下培养;质粒提取与转染;用Hoechst试剂盒检测C6细胞凋亡。结果转染重组质粒PDC315-TRAIL的C6细胞组凋亡率明显高于未转染的C6细胞组及转染空载体PDC315的C6细胞组(P<0.05)。结论外源性TRAIL基因可引起C6细胞凋亡。
- 张相华涂汉军张力胡钧涛王晓勋
- 关键词：C6胶质瘤细胞细胞凋亡
