湖北省卫生厅青年科技人才基金(QJX2005-16)
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
- 相关作者：彭成为王清秀姚尚龙钟和英李国华更多>>
- 相关机构：郧阳医学院附属人民医院同济大学附属东方医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：湖北省卫生厅青年科技人才基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠脊髓星形胶质细胞的分离与纯化被引量：3
- 2008年
- 目的:纯化培养和鉴定新生大鼠的脊髓星形胶质细胞,建立稳定的星形胶质细胞培养体系,为研究创伤后慢性神经病理性痛的脊髓机制奠定基础。方法:根据成纤维细胞与星形胶质细胞生长倍增时间的差异,用阿糖胞苷(Ara-C)抑制成纤维细胞生长分裂的方法获取星形胶质细胞,用胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光法对其鉴定。同时与差速贴壁培养法进行对比。结果:用Ara-C处理后,可获得较高纯度的星形胶质细胞,经鉴定其纯度可达90%以上,而对照组几乎全部为成纤维细胞。结论:Ara-C处理能彻底清除成纤维细胞,从而保持星形胶质细胞的正常生长繁殖,达到纯化星形胶质细胞的目的。
- 杨镭镭王清秀彭成为钟和英王家宁李国华
- 关键词：脊髓星形胶质细胞纯化
- 人神经生长因子β基因转染对神经病理性痛大鼠脊髓背角致痛物质含量的影响被引量：9
- 2009年
- 目的探讨人神经生长因子β（hNGFβ）基因转染对神经病理性痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽（CGRP）和P物质（SP）含量的影响。方法雄性SD大鼠48只，体重200～250g，随机分为3组（n=16）：假手术组（Ⅰ组）假手术后立即鞘内注射人工脑脊液；Ⅱ组和Ⅲ组制备坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI）模型，术后分别立即鞘内注射人工脑脊液或重组腺病毒介导人神经生长因子β（Ad—hNGFβ）基因。于术前1d、转染后28d内每4天测定热痛阈、机械痛阈及行为学评分。每组分别于转染后4、7、14及28d各处死4只大鼠，取脊髓组织，采用免疫组织化学法测定SP和CGRP含量。结果与Ⅰ组比较，Ⅱ组和Ⅲ组行为学评分升高，机械痛阈及热痛阈均降低（P〈0．01）；与Ⅱ组比较，Ⅲ组行为学评分及机械痛阈差异无统计学意义（P〉0．05），转染后8～24d热痛阈升高（P〈0．05）。术后Ⅱ组和Ⅲ组术侧脊髓背角SP及CGRP含量明显高于Ⅰ组，术后7～28dⅢ组术侧脊髓背角SP及CGRP含量明显低于Ⅱ组（P〈0．05或0．01）。结论Ad—hNGFβ基因转染可能通过降低脊髓背角SP及CGRP含量减轻神经病理性痛大鼠的热痛觉过敏。
- 彭成为余开峰杨镭镭张丽曹书芬王清秀姚尚龙
- 关键词：神经生长因子转染
- 神经病理性痛大鼠背根神经节神经元电生理学的改变被引量：5
- 2009年
- 目的探讨神经病理性痛大鼠背根神经节（DRG）神经元电生理学的改变。方法成年雄性SD大鼠20只，周龄3～4周，体重100～150g，随机分为对照组（C组，n=5）和神经病理性痛组（NP组，n=15）。采用坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI）法制备神经病理性痛模型。于CCI前1d和CCI后第4天测定热痛阈和机械痛阈。痛阈测定后，急性分离大鼠DRG神经元，采用全细胞膜片钳技术记录其电生理学活动。结果与CCI前1d比较，NP组CCI后第4天热痛阈和机械痛阈均降低（P〈0．05）；与C组比较，NP组DRG小神经元基强度降低，膜电位、重复放电率和自发放电率均升高（P〈0．05或0．01），阈电位和超射值差异无统计学意义（P〉0．05），DRG中神经元膜电位、闽电位、自发放电率升高，基强度降低（P〈0．05或0．01），超射值差异无统计学意义（P〉0．05），DRG大神经元阈电位升高（P〈0．05），其余指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论神经病理性痛大鼠DRG神经元电生理学的改变主要发生在DRG中、小神经元上，表现为兴奋性升高、重复放电和自发放电现象增多。
- 冉然王清秀王群彭成为李国华刘忠武姚尚龙
- 关键词：神经痛电生理学
- Ad-hNGFβ转染原代培养的大鼠脊髓星形胶质细胞及其生物活性研究被引量：1
- 2007年
- 目的:体外培养新生SD大鼠脊髓星形胶质细胞,观察携带人β神经生长因子基因的重组腺病毒(Ad-hNGFβ)对其存活及毒性作用,为Ad-hNGFβ在体研究打下基础。方法:分离新生SD大鼠的脊髓星形胶质细胞(Astrocyte,Ast),应用DMEM/F-121∶1培养基进行原代培养扩增鉴定。重组Ad-hNGFβ(MOI=25,50,100)转染Ast后,噻唑蓝(MTT)法检测病毒感染滴度与细胞存活的关系。ELISA方法测定培养3,6,9,12,15d时培养上清中hNGFβ的含量;用流式细胞仪对转染细胞进行倍体分析,观察转染Ad-hNGFβ对细胞周期和凋亡的影响;Western blot印迹法测定转染后表达产物的存在形式。结果:从新生SD大鼠的脊髓组织中成功分离培养出星形胶质细胞,GFAP免疫荧光阳性。经MTT法测定,当MOI=25,50,100时试验组的吸光值OD490与对照组比无显著差异,P>0.05。转染Ad-hNGFβ后试验组细胞培养上清中hNGFβ表达量与对照组同期相比有显著差异,P<0.01;且hNGFβ可持续表达至15d。Ad-hNGFβ转染细胞后所表达的活性产物以hNGFβ二聚体的形式存在。流式细胞仪测得细胞增殖指数与对照组比明显升高,P<0.01。结论:Ad-hNGFβ可有效介导hNGFβ基因转染原代培养的脊髓星形胶质细胞,并且成功表达有活性的hNGFβ,增加细胞活性。
- 王清秀杨镭镭钟和英彭成为王家宁马大青
- 关键词：重组腺病毒星形胶质细胞
- 人神经生长因子β基因转染对糖尿病大鼠神经病理性痛的影响被引量：2
- 2008年
- 目的 探讨皮下转染重组腺病毒介导的人神经生长因子β（Ad-hNGFβ）基因对糖尿病大鼠神经病理性痛的影响及其可能机制。方法 采用腹腔注射佐脲霉菌素（STZ）75mg／kg的方法制备大鼠糖尿病模型。健康雄性SD大鼠，体重180～220g，随机取10只大鼠作为对照组（C组）不制备糖尿病模型；取模型制备成功的大鼠75只随机分为3组（n=25）：糖尿病神经病理性痛组（DNP组）、Ad-hNGFβ基因治疗组（NGF组）和Ad-LacZ基因治疗组（LacZ组）。NGF组和LacZ组分别于STZ注射后21d且痛阈测定结束后双侧腹股沟皮下脂肪接种1．12×10^11 PFU Ad-hNGFβ10μl和1．12×10^11 PFU Ad-LacZ 10 μl，C组和DNP组不作任何处理。于STZ注射前（基础状态）、注射后21、35、49d时测定机械痛闯和热痛阈。于注射后49d且痛阈测定结束后测定血清hNGF／3浓度和背根神经节降钙素基因相关肽（CGRP）的表达。结果与基础值和C组比较，DNP组、NGF组和LacZ组STZ注射后机械痛阈和热痛阈均降低，DNP组和LacZ组血清hNGFβ浓度和背根神经节CGRP表达下降，NGF组血清hNGFβ浓度和背根神经节CGRP表达升高（P〈0．05）；与DPN组比较，NGF组STZ注射后49d时热痛阈升高，血清hNGF／3浓度和背根神经节CGRP表达升高（P〈0．01），LacZ组各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 Ad—hNG耶基因转染可在一定程度上减轻糖尿病大鼠神经病理性痛，其机制与上调背根神经节CGRP表达有关。
- 王群王清秀冉然彭成为钟和英杨镭镭马大青
- 关键词：神经生长因子转染神经痛
- 鞘内转染重组腺病毒介导人神经生长因子β基因对神经病理性痛大鼠的镇痛作用被引量：1
- 2007年
- 目的评价鞘内转染重组腺病毒介导人神经生长因子β（Ad-hNGFβ）基因对神经病理性痛大鼠的镇痛作用。方法雄性SD大鼠96只,体重200～250 g,随机分为3组（n=32）,假手术组（Ⅰ组）假手术后立即鞘内注射人工脑脊液;Ⅱ组和Ⅲ组制备坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI）模型,术后分别立即鞘内注射人工脑脊液或Ad-hNGFβ基因。分别于术前1d（基础值）和转染后4～28 d每4天测定整体行为学评分、机械痛阈和热痛阈;每组分别于转染后4、7、14及28 d各处死8只大鼠,取脊髓组织,每个时点的4个标本用于测定hNGFβ表达（免疫组化方法）,每个时点的另外4个标本用于测定hNGFβ的含量（ELISA法）。结果Ⅲ组脊髓出现hNGFβ表达;Ⅲ组脊髓hNGFβ含量高于Ⅰ组和Ⅱ组（P〈0.01）;与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组行为学评分升高,机械痛阈及热痛阈均降低（P〈0.05或0.01）;与Ⅱ组比较,Ⅲ组行为学评分及机械痛阈差异无统计学意义（P〉0.05）,转染后8～24 d热痛阈升高（P〈0.05）。结论CCI诱导的慢性神经病理性痛大鼠鞘内转染Ad-hNGFβ基因后,可在脊髓组织持续、高效表达,且能减轻热痛觉过敏,但对机械痛觉过敏无影响。
- 王清秀彭成为杨镭镭施静姚尚龙
- 关键词：神经生长因子神经痛
