上海市科学技术委员会资助项目(045458032)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：狄春红顾少华谭晓华杨磊仙玲玲更多>>
- 相关机构：石河子大学复旦大学石河子大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金高层次人才科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 用抑制性差减杂交构建As_2O_3诱导的NB4细胞凋亡相关基因文库
- 2009年
- 目的:构建三氧化二砷(As2O3)诱导的急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞凋亡相关基因文库。方法:用含4μmol·L-1As2O3和正常培养基培养NB4细胞24h,抽提总RNA,经逆转录酶合成双链cDNA,分别以砷诱导凋亡组和对照组作为tester和driver,进行双向抑制性差减杂交(suppress-ion subtractive hybridization,SSH),筛选As2O3诱导的NB4细胞凋亡相关基因,将差异表达基因进行PCR扩增并与pGEM-Teasy克隆载体连接,转化DH5α大肠杆菌,经蓝白斑筛选获得白色阳性克隆,PCR扩增出未知基因片段。结果:成功构建了分别代表在NB4细胞中表达上调和下调的基因文库。结论:经双向抑制性差减杂交获得了NB4细胞差异表达基因文库,为克隆NB4细胞凋亡相关基因奠定了基础。
- 狄春红顾少华谭晓华仙玲玲吴奇涵杨磊
- 关键词：白血病NB4细胞三氧化二砷抑制性差减杂交凋亡
- 硫氧还蛋白还原酶2基因抗砷作用被引量：2
- 2009年
- 目的研究硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase,TrxR2)基因在抗砷细胞(As-ECV304)中的抗砷作用。方法蛋白印迹法(Western Blot)检测As-ECV304和对照组细胞TrxR2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞周期分布,化学合成TrxR2基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染As-ECV304细胞,Western Blot验证干扰效率,细胞急性毒性试验检测细胞抗砷性的改变。结果As-ECV304细胞中TrxR2蛋白水平较对照组细胞高,As-ECV304细胞G0/G1期细胞所占比例高于对照细胞。3个siRNA中有一个能特异性抑制TrxR2基因表达,干扰组细胞的生存率低于阴性对照组和未干扰组,3组细胞的半数抑制率IC50分别为9.13,15.88和18.52μmol/L。结论siRNA干扰TrxR2基因表达后能明显降低抗砷细胞的抗砷性,提示该基因在细胞抗砷机制中发挥了重要作用。
- 狄春红谭晓华仙玲玲顾少华杨军周婷周迪李宏杨磊
- 关键词：RNA干扰
