国家科技重大专项(2011ZX08007-002)
- 作品数：24 被引量：94H指数：5
- 相关作者：严云勤佟慧丽张伟伟李树峰刘丹更多>>
- 相关机构：东北农业大学内蒙古大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家肉牛牦牛产业技术体系项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛SREBP1基因shRNA序列的筛选及其腺病毒载体的构建与鉴定被引量：2
- 2013年
- 【目的】筛选可靶向干扰牛的SREBP1基因的有效shRNA,构建相应腺病毒载体并包装重组腺病毒,为在细胞水平上研究SREBP1基因的功能和作用机制提供基础。【方法】以秦川牛SREBP1基因为研究对象,首先靶向其编码区(coding sequence,CDS)序列设计并合成6条干扰和1条阴性对照shRNA,并构建表达载体pENTR-U6-shRNA。然后与载体psiCHECK-Ⅱ-SREBP1共转染293A细胞,筛选有效的pENTR-U6-shRNA。其次将筛选的pENTR-U6-shRNA和阴性对照pENTR-U6-NC分别与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST体外重组,得到腺病毒重组载体,并在293A细胞包装扩繁得到高滴度腺病毒,GFP标记法测定病毒滴度。最后将病毒侵染牛前体脂肪细胞,实时荧光定量法(qRT-PCR)检测干扰效率。【结果】筛选出靶向牛SREBP1基因干扰效率为87.4%的shRNA-1053。构建了pAd-1053和阴性对照pAd-NC重组腺病毒载体并包装得到Ad-1053和Ad-NC高滴度病毒,测定得到的病毒滴度分别为7×108 GFU·mL-1和9×108 GFU·mL-1。Ad-1053和Ad-NC分别侵染牛前体脂肪细胞,qRT-PCR检测结果显示Ad-1053可显著降低SREBP1基因的mRNA水平(干扰率>85%),而Ad-NC对SREBP1基因表达无明显影响。【结论】成功筛选得到靶向干扰牛SREBP1基因的有效shRNA,并包装扩繁获得相应的高滴度重组病毒。
- 付常振昝林森王虹成功王洪宝李耀坤姜碧杰高建斌杨宁
- 关键词：SHRNA重组腺病毒
- 转牛Myf6基因小鼠脾脏功能的研究被引量：2
- 2015年
- 为了研究外源基因转入对动物免疫功能的影响,即转牛Myf6基因小鼠脾脏淋巴细胞的增殖能力以及相关细胞因子IL-2、IFN-γmRNA表达的变化,试验随机选择5只转牛Myf6基因的子一代小鼠,采用MTT法体外检测脾淋巴细胞增殖能力和实时荧光定量PCR研究宿主脾脏中的IL-2mRNA、IFN-γmRNA表达变化。结果表明:Myf6子一代小鼠T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖指数与阴性对照组相比显著降低,IL-2 mRNA相对表达量显著降低,IFN-γmRNA表达也出现了显著下降。说明外源基因Myf6转入抑制了小鼠的脾脏免疫机能。
- 王彬胡倩常淑伟高朋严云勤曹允考
- 关键词：转基因免疫增殖IL-2IFN-Γ
- 动物转基因技术在转基因牛中的研究进展被引量：3
- 2012年
- 本研究综述了目前应用于转基因牛中原核显微注射法、体细胞克隆法、病毒载体法等传统动物转基因技术以及具有应用前景的ZFN技术、TALEN技术和iPS技术等。概述了20年来国内外转基因牛重要的研究进展,并就目前转基因牛在乳腺生物反应器、抗病育种、品种改良主要3个方面的应用进行了介绍。在此基础上,就目前转基因牛育种中存在的问题及今后发展趋势进行了讨论,以促进转基因牛技术的发展。
- 张兆顺成功昝林森
- 关键词：转基因牛乳腺生物反应器
- 转MSTN干扰载体细胞株的获得及外源基因整合情况的研究
- 2014年
- 转基因细胞株的建立能够为转基因体细胞克隆技术奠定重要基础。该实验利用MSTN干扰载体,转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞,获得5个相应的转基因单克隆细胞株。采用Realtime PCR和高效热不对称互交式PCR(hiTAIL-PCR)技术检测细胞克隆中MSTN表达载体的拷贝数及其在牛基因组中的整合位点。结果表明,荧光定量PCR有效检测到5个细胞克隆中质粒的拷贝数分别为2.26±0.32、1.52±0.25、25.68±1.02、8.43±0.73和6.72±0.10。hiTAIL-PCR对整合位点的检测结果表明,质粒片段在插入到基因组的过程中进行了重组,其与基因组的结点处有2或4个共同的碱基序列。该研究探索MSTN干扰载体在牛胎儿成纤维细胞中的整合机制,以期获得遗传背景清楚的转基因细胞作为体细胞核移植的重要材料,为高产转基因肉牛新品种的培育提供重要的理论和实验基础。
- 刘丹佟慧丽李树峰常淑伟杨翠翠严云勤
- 关键词：MSTN拷贝数整合位点REAL-TIME
- 牛卵泡液小细胞外囊泡亚型特性及颗粒细胞摄取研究
- 细胞外囊泡（extracellularvesicles，EVs）是几乎所有细胞均可释放的纳米级被膜囊泡，在细胞间通讯中发挥着重要作用。卵泡液中含有EVs，对卵泡发育以及卵母细胞成熟具有调控功能。到目前为止，关于卵泡液EV...
- 王晓梅
- 关键词：卵泡液颗粒细胞细胞增殖
- 文献传递
- 组蛋白H3K27me3去甲基化酶UTX在合子基因组激活中的作用机制研究
- 受精后，胚胎发生了自母源基因组向合子基因组的转变，即合子基因组激活(Zygotic genome activation，ZGA)。在此期间发生了包括H3K27me3在内的表观遗传修饰重塑过程。UTX(Ubiquitous...
- 白力格
- 关键词：胚胎发育
- miR-103在牛骨骼肌卫星细胞中的分化调节作用被引量：2
- 2015年
- 为了阐明miR-103对牛骨骼肌卫星细胞的分化调节作用,试验将miR-103的过表达载体和miR-103抑制剂分别转染到分离培养的卫星细胞中,利用EDU功能检测试验、Real-time PCR和免疫荧光试验来分析miR-103对卫星细胞增殖和分化的调控作用,并用Western-blot和实时定量PCR检测miR-103对靶基因CCNE1的蛋白和mRNA水平表达情况的影响。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,miR-103能促进卫星细胞的分化并抑制细胞的增殖。说明miR-103是牛骨骼肌卫星细胞分化的一种重要的调控因子。
- 孙晓峰张伟伟王阳佟慧丽严云勤
- 关键词：骨骼肌卫星细胞细胞分化
- 位点特异整合酶φC31的作用机制及应用被引量：1
- 2012年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异整合酶(Site-specific recombinase,SSR),其能够精确并单向的促进attP位点与attB位点的重组,是继Cre/Loxp、FLP之后又一个倍受关注的位点特异整合酶,该整合酶已经成为基因治疗、转基因研究等领域的常用技术手段。现对φC31位点特异性整合酶的作用机制、整合位点及其在转基因和基因治疗中的应用进行了综述,并对其发展前景进行了展望。
- 上官陶朱其军孙涛李光鹏仲跻峰何洪彬
- 关键词：ΦC31整合酶转基因基因治疗
- 小鼠四倍体胚胎凋亡检测及嵌合胚胎制作
- 2013年
- 四倍体胚胎补偿技术,特别是ES细胞和iPS细胞功能验证是已成为目前干细胞研究领域热点。本试验旨在通过提高四倍体胚胎与ES细胞形成嵌合胚胎效率,为构建转基因动物模型搭建技术平台。本研究利用电融合法制作小鼠四倍体胚胎,并采用TUNEL法检测四倍体胚胎凋亡情况以对其进行质量评估,同时通过四倍体胚胎补偿法和聚合法,将小鼠四倍体胚胎与带有GFP标记ES细胞制作成嵌合胚胎,从而能够为快速、简便获得完全ES细胞发育而来生物个体提供重要技术支持,并为基因功能研究和疾病动物模型构建提供一定研究基础。
- 严云勤杨悦叶枫赵丹丹
- 关键词：胚胎干细胞四倍体胚胎电融合小鼠
- 不同肌肉特异性启动子IGF2表达载体构建及对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响被引量：4
- 2015年
- 旨在获得带有高效特异性启动子的IGF2表达载体,研究其对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响。本研究将构建的3种含有IGF2肌肉特异性启动子的真核表达载体转染牛骨骼肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞,RT-PCR检测IGF2的相对表达量,从而筛选高效特异性的载体,并进行EdU试验及细胞周期相关基因RT-PCR检测。结果,成功构建了不同启动子desminpro、CMV-MyoGpro和MyoGpro-double表达IGF2的载体。RT-PCR检测结果表明,pGL3-desminpro-IGF2是较高效的并具有特异性的载体。载体转染体外培养细胞提高了细胞增殖速度,并上调了细胞周期相关基因CDK6和IGF2的表达。这为转基因肉牛的生产奠定了重要基础。
- 孙晓丽李树峰佟慧丽张伟伟殷红艳严云勤
- 关键词：IGF2骨骼肌卫星细胞细胞增殖
