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HIV-1核心蛋白的表达与纯化: 2000年; 将编码人I型免疫缺陷病毒(HIV1)核心蛋白p24gag的基因序列克隆到原核表达载体pET28(b)中,高效表达了N,C端融合His·Tagp24蛋白,所表达的重组p24蛋白占菌体总蛋白的46%。在变性条件下,使用NiNTA亲和层析法纯化了p24蛋白,纯度为94%。菌体中及纯化、复性后的目的蛋白均能与抗HIV1p24单克隆抗体发生特异性反应。用纯化的p24蛋白免疫小鼠,4周时小鼠血清抗p24抗体效价达1∶400。实验结果表明:大肠杆菌表达的HIV1p24蛋白纯化后可用作HIV1检测试剂的原料。; 金宁一李体远刘晓明王玉红王宏伟郭志儒安汝国殷震; 关键词：大肠杆菌纯化基因表达核心蛋白

HIV-1 Gag p^(17-)p^(24)在痘苗病毒中的表达及性质研究: 2000年; 研究了重组痘苗病毒表达的HIV1核心蛋白(Gag)p17p24蛋白的一些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、DotELISA及Westernblot结果表明,构建的两株重组病毒分别表达了HIV1Gagp24及p17p24融合蛋白。电镜观察证实,Gagp24及p1724重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗HIV1Gagp24抗体。重组病毒感染BHK21细胞后,可见由于细胞凋亡而致的染色体DNA断裂“梯子”电泳图。; 李体远金宁一王宏伟郭志儒方厚华安汝国殷震; 关键词：HIV-1 痘苗病毒核心蛋白疫苗

应用P_RP_L串联启动子表达HIV-2gag蛋白: 2000年; 目的 :探讨HIV 2gag非融合蛋白的表达。方法 :应用DNA重组技术 ,将HIVgag基因全序列 (gag)和部分 (gag’)cDNA片段克隆到pBV2 2 0载体PRPL 串联启动子下游 ,构建成HIV 2gag重组表达载体pBV gag和pBV gag’ ,在大肠杆菌中表达。结果 :SDS PAGE显示pBV gag’在 2 1kD处可见一明显的额外蛋白带 ,经薄层扫描分析占菌体总蛋白的 6 .1% ,蛋白印迹结果证明 ,表达出的特异蛋白分子量pBV gag为 5 7kD和 47kD ;pBV gag’为 47kD和 2 1kD。经提取包涵体证明 ,表达的蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。结论 :HIV; 王秀清金宁一田梅李体远李钟洙郭志儒李萍赵丽娟殷震; 关键词：艾滋病基因表达

分离型痘苗病毒表达载体的构建及HIV-1 gag p17-24的表达被引量：1: 1999年; 目的:探索荧光蛋白作为报告基因以及His·Tag作为纯化标签在重组痘苗病毒表达系统中的应用.方法:将N-端融合His·Tag基因序列,插入痘苗病毒表达载体pSFJ2-16,并在其多克隆位点下游装入带有巨细胞病毒(CMV)启动子的突变型荧光蛋白基因(GFP),构建成N-端融合His·Tag并带有荧光蛋白报告基因的分离型痘苗病毒表达载体.再从pET-28中切出C-端融合His·Tag及多克隆位点序列,并与CMV-FP基因一同装入pSFJ2-16,构建成C-端融合His·Tag的分离型痘苗病毒表达载体.将人免疫缺陷病毒-1型(HIV-1)核心蛋白(gag)p17-24基因分别插入上述载体,并筛选出重组病毒.结果:实验表明,重组病毒表达了gag蛋白.结论:将His-Tag的纯化标签加入到通用型痘苗病毒表达载体中用于纯化表达的目的蛋白,该方法是可行的.荧光蛋白基因作为一个筛选标记基因应用于痘苗病毒载体系统还有待进行进一步研究.; 金宁一王宏伟殷震李体远王玉红罗坤安汝国; 关键词：痘苗病毒荧光蛋白 HIV-1

HIV-2 gag蛋白在大肠杆菌中的表达纯化被引量：1: 1999年; 目的　在原核系统中高效表达及纯化人II型免疫缺陷病毒 (HIV 2 )gag蛋白 ,以期作为检测试剂的原料。方法　采用基因工程手段将编码II型人免疫缺陷病毒 (HIV 2 )核心蛋白的部分p5 5 gag1(G1)及全部 p5 5 gag2 (G2 )基因片段分别克隆到原核高效表达载体 pET2 8a的T7噬菌体启动子下游 ,构建出重组表达质粒pET2 8aG1和 pET2 8aG2 ,将其转入不同的受体菌后 ,IPTG诱导下进行表达。经SDS PAGE以及免疫印迹分析鉴定表达产物。在变性和非变性条件下 ,使用Ni NTA亲和层析对 gag蛋白进行了纯化。结果　构建出两个重组表达质粒pET2 8aG1和 pET2 8aG2 ,它们在受体菌BL2 1(DE3 )plysS中有高的表达。pETY2 8aG1的表达产物相对分子质量为 5 5 0 0 0 ,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的 10 % ,pET2 8aG2的表达产物相对分子质量为 610 0 0 ,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的 6 8% ,经免疫印迹分析表明 ,纯化前后的目的蛋白均可与HIV 2患者全血清发生特异性反应。结论　在大肠杆菌中表达及纯化了HIV 2Gag蛋白 ,具有良好的反应原性 ,认为可作为HIV; 苏忠兰金宁一段正芳王宏伟李体远李钟洙王玉红王洪军殷震; 关键词：大肠杆菌纯化

HIV-1Gag p24的高效表达: 1999年; 将编码人免疫缺陷病毒I型 (HIV 1)核心蛋白p2 4的基因序列克隆到原核表达载体pET2 8(b)中 ,并转化不同的受体菌后 ,用IPTG诱导表达。SDS PAGE分析表明 ,受体菌BL2 1(DE3)plysS表达量最高 ,表达的重组p2 4蛋白占菌体总蛋白的 46 %。目的蛋白可与抗HIV 1p2 4单克隆抗体发生特异性反应。; 李体远金宁一王玉红王宏伟方厚华安汝国殷震; 关键词：HIV-1 核心蛋白大肠杆菌

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国家自然科学基金(39770661)