广东省科技计划工业攻关项目(2009B030803040)
- 作品数：3 被引量：19H指数：3
- 相关作者：范宏英龙北国刘欢王丹吴清平更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军广东省微生物研究所更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 阪崎肠杆菌环介导等温扩增检测方法建立被引量：5
- 2011年
- 目的针对当前国内外传统检测方法缺点,建立阪崎肠杆菌快速检测法。方法根据阪崎肠杆菌外膜蛋白(OmpA)基因,设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立并优化环介导等温扩增(loop-mediated isotherm alamp lification,LAMP)检测体系及反应条件,并进行LAMP反应的灵敏度、特异性实验及实际样品检测。结果 LAMP检测阪崎肠杆菌,优化后的条件选择为:Mg2+浓度6 mmol/L,dNTP浓度0.6 mmol/L,甜菜碱浓度0.8 mol/L,外引物与内引物的浓度比1∶4,扩增温度58℃60m in;细菌纯培养检测灵敏度为101cfu/mL;对11种细菌共26株菌进行LAMP扩增,仅8株阪崎肠杆菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性;对实际样品进行增菌检测,采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时26 h;并采用传统检测方法验证,正确性为100%。结论该方法检测阪岐肠杆菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低、耗时短,有望成为快速检测阪岐肠杆菌的有效方法。
- 范宏英龙敏刘欢罗军龙北国
- 关键词：环介导等温扩增技术
- 检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7的环介导等温扩增和PCR法比较被引量：7
- 2012年
- 目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。
- 姜容龙北国曾桂芬王丹范宏英吴娴波
- 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增技术PCR技术
