国家科技支撑计划(2006BAD6A13-4)
- 作品数：4 被引量：28H指数：3
- 相关作者：李刚曾妮李伟范晓娟田康乐更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用被引量：7
- 2011年
- 以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。
- 胡小华李刚史利军张坤贾凤芹
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白间接ELISA抗体检测试剂盒
- 狂犬病病毒糖蛋白在Bac-to-bac杆状病毒系统中的表达及应用被引量：2
- 2011年
- 为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RVFluryLEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获得含有G基因的重组杆状病毒。采用SDS-PAGE和westernblot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析,以重组G蛋白作为包被抗原的ELISA检测36份犬血清样品。结果表明,在Bac-to-bac杆状病毒系统中表达的RVG蛋白能与his-tag单克隆抗体及RV阳性血清发生特异性反应,其相对分子量为60ku;与以RV为包被抗原的商品化ELISA试剂盒相比,以重组RVG蛋白为抗原建立的间接ELISA的敏感性、特异性和符合率分别为80%、81.8%和80.6%,表明杆状病毒系统表达的RVG蛋白是检测RV抗体的理想抗原蛋白,作为一种亚单位疫苗具有潜在的应用前景。
- 范晓娟李刚李伟曾妮宫苗苗
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统
- 犬和猫狂犬病病毒抗体SPA-ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 采用RT-PCR方法扩增狂犬病病毒(RV)FluryLEP毒株N基因,将该片段克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将阳性重组质粒转化至宿主菌E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,RVN蛋白以包涵体形式表达,大小约为70ku,且该重组N蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组N蛋白作为诊断抗原建立了检测犬、猫RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原的最佳包被浓度为6μg/mL,血清最佳稀释度为1:200,SPA-HRP的最佳稀释度为1:2000。用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对30份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为96.67%。表明基于重组N蛋白的间接ELISA方法可用于检测犬、猫RV抗体水平。
- 范晓娟曾妮李刚
- 关键词：狂犬病病毒N蛋白原核表达酶联免疫吸附试验SPA
