湖北省自然科学基金(2005ABA092)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：刘志国吕玲肖杜静杨高山周志春更多>>
- 相关机构：武汉工业学院华中科技大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 极低密度脂蛋白受体结合功能片段的克隆与表达
- 2007年
- 建立具有正常极低密度脂蛋白(VLDL)受体结合功能的小分子受体片段模型并借助此模型研究VLDL受体与配体结合的作用机制。PCR扩增获得LBR1-3和LBR1-8两个DNA片段并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌菌株Rosetta(DE3),利用IPTG诱导蛋白表达。表达产物经N i+-NTA亲和层析柱纯化,为VLDL受体的进一步功能与应用研究,特别是针对该受体的配体识别、结合作用机制研究奠定了基础。
- 吕玲肖刘志国陈上海张怀东
- 关键词：极低密度脂蛋白基因克隆纯化
- VLDL-R配体结合结构域的克隆与表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建含VLDL-R配体结合结构域融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达与纯化。方法利用PCR技术扩增LBR1-8的DNA片段,将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,随后将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌Rosetta中,利用IPTG诱导蛋白表达并优化其表达条件,表达产物经Ni+-NTA亲和层析柱纯化回收,并采用SDS-PAGE和Western印迹对目的蛋白进行分析和鉴定。结果构建的重组表达质粒经PCR,酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主经过IPTG诱导成功表达了LBR1-8,并经优化确定了最佳的诱导表达条件。结论成功构建pET28a(+)-LBR1-8表达质粒,表达并经纯化得到了LBR1-8。
- 夏文豪吕玲肖刘志国屈伸1
- 关键词：极低密度脂蛋白受体基因克隆蛋白纯化
- 人源受体相关蛋白的原核表达及功能检测
- 2006年
- 目的研究人源受体相关蛋白(RAP)的表达并鉴定表达产物的功能。方法用IPTG诱导培养含有人源RAP重组表达载体(pET-28 a(+)-RAP)的BL21转化菌,利用融合蛋白中6个组氨酸纯化标签,经N i+-NTA树脂亲和层析、SDS-PAGE分离鉴定表达产物,并经脱盐、浓缩、冻干处理获得RAP融合蛋白冻干品。将RAP融合蛋白与富含LDLR家族受体的巨噬细胞进行结合实验,分析RAP融合蛋白的功能。结果经亲和层析分离纯化后获得可溶性表达的RAP融合蛋白。实验显示,表达的RAP融合蛋白可竞争性抑制VLDL与巨噬细胞的结合。结论实验获得的RAP融合蛋白具有正常的结合活性,可用于相关研究,为RAP蛋白生产开发奠定了良好的基础。
- 刘志国张红吕玲肖屈伸
- 关键词：受体相关蛋白原核表达
- 金霉素多克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2008年
- 研究制备能有效用于金霉素残留检测的特异性多克隆抗体.采用戊二醛法和混合酸酐法合成2种不同的金霉素-BSA完全抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,应用ELISA法鉴定抗金霉素多克隆抗体.结果表明,2种血清的抗体效价最高均达3·2×105,而戊二醛法制备的抗原产生的抗体具有更高的亲和力,抑制率为50%时的金霉素的质量浓度(IC50)为96·2μg·mL-1,金霉素的最低检测限为6·67ng·mL-1,金霉素和四环素的交叉反应率为77%.研究结果为畜产品中四环素类抗生素残留的检测奠定了较好的基础.
- 武玉香刘志国周志春杨高山杜静
- 关键词：金霉素多克隆抗体酶联免疫吸附测定
