以文心兰Oncidium flexuosum无菌苗叶片为外植体,1/2MS(Murashige and Skoog)为基本培养基,对不同叶位、叶片大小(叶龄)、不同植物生长调节物质处理诱导体胚的效果进行了研究。结果表明:①幼苗的叶尖、叶基部切口、叶面切口、叶面和叶缘均能诱导出体胚,绝大部分体胚能形成二次体胚并能分化成多个类原球茎(PLBs)。②诱导体胚的最佳外植体材料是取自带根幼苗15mm长叶片。③诱导体胚的适宜培养基组成如下:1/2MS培养基(其中微量元素和有机添加物为全量,铁盐减半),磷酸二氢钠170.00mg·L-1,谷胺酰胺1000.00mg·L-1,蛋白胨1000.00mg·L-1,噻苯隆(TDZ)0.50mg·L-1,聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)250.00mg·L-1,蔗糖20000.00mg·L-1,固化剂(gelrite)2800.00mg·L-1,pH5.2。叶片体胚诱导率为90.00%以上,叶片基部切口和中切口体胚诱导率分别达74.56%和66.91%。
以旱柳Salix matsudana及东南景天Sedum alfredii为实验材料,利用改进的SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术分别构建了旱柳盐胁迫和东南景天氯化镉胁迫后的全长cDNA文库,把文库包装到酵母表达载体中,转化酿酒酵母感受态细胞,通过在尿嘧啶缺陷型培养基上添加不同浓度梯度的筛选压来筛选酵母高抗转化子,并对其基因进行鉴定。结果从旱柳盐胁迫全长cDNA文库中得到了2个能耐受1.709mol·L-1氯化钠的阳性转化子,从东南景天氯化镉胁迫全长cDNA文库中得到了2个能耐受0.123mmol·L-1氯化镉的阳性转化子。分别测定对照菌(转空载体重组菌INV/pYES2.1)和转cDNA重组菌在无胁迫、高盐(1mol·L-1氯化钠)和高氯化镉(150μmol·L-1)胁迫下的生长曲线。结果表明高耐盐/耐镉相关基因的表达对酵母正常生长没有影响。在含高盐或者高镉的培养基里,2个转基因重组菌的延滞期短于对照菌。这表明高耐盐/耐镉相关基因的表达可以提高酵母细胞的耐盐/耐镉能力。对6号耐盐转化子序列进行生物信息学和表达模式分析,发现该基因为一盐胁迫应答相关基因SMpla6(暂定名)。用酿酒酵母建立了一个高效快速筛选植物抗逆基因的体系,研究结果为快速克隆植物抗逆相关基因奠定基础。
