国家自然科学基金(30770477)
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- 脱腺苷酸酶与RNA代谢调控
- 2023年
- 真核细胞中,RNA 3’端poly(A)或oligo(A)的特异性水解被称为脱腺苷酸化(deadenylation)。脱腺苷酸化的执行者被称为脱腺苷酸酶(deadenylase)。绝大多数真核细胞中都存在多种脱腺苷酸酶,其中CCR4-NOT复合体和PAN2-PAN3复合体负责细胞中大多数mRNA的非特异性降解,PARN和PNLDC1等参与了特定子集mRNA的降解和多种非编码RNA的生物合成。作为RNA水平的重要调控者之一,脱腺苷酸酶参与了几乎所有细胞生命活动和多种重要生理和病理过程。在真核细胞中,脱腺苷酸酶的分子调控机制可能是:细胞中的大量RNA结合蛋白是RNA命运调控的中心分子,一方面根据RNA的状态或细胞需求识别特定的靶标RNA子集,另一方面招募特定脱腺苷酸酶,对特定子集RNA的3’端进行降解或修剪,从而调控RNA的最终命运。细胞中十余种脱腺苷酸酶同工酶、上千种RNA结合蛋白以及多种多样的翻译后修饰构成了复杂的动态分子调控网络,帮助细胞在生长、增殖、分化、应激、死亡等重要生命活动中精确维持RNA稳态或快速转换基因表达谱。
- 廖小燕闫永彬
- 关键词：MRNA降解RNA结合蛋白
- 人BimS蛋白的原核表达及纯化
- 2009年
- 目的克隆人BimS基因,原核表达并纯化目的蛋白。方法用PCR方法从HeLa细胞cDNA文库中扩增人BimS基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化。结果PCR扩增得到327bp的DNA片段,重组表达质粒pGEX-6P-1-BimS经双酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。表达的目的蛋白相对分子质量约37000,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后纯度可达93%。结论已成功克隆并原核表达了人BimS基因,得到纯度较高的BimS蛋白,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。
- 何侃佟立全战卓金英花
- 关键词：原核表达纯化
