湖南省教育厅科研基金(06C503)
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
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- 雷氏大疣蛛毒素-V的分离纯化与初步活性鉴定
- 2007年
- 雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)是最近发现的异仿蛛科大疣蛛属的蜘蛛新种.雷氏大疣蛛毒素-V就是以该蜘蛛粗毒为原料,利用阴、阳离子交换层析和反相高效液相色谱分离纯化得到并命名的一种新型蜘蛛毒素.利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪分析得知它的相对分子质量为3133.48;通过初步活性研究证明雷氏大疣蛛毒素-V是一种昆虫专一性神经毒素.
- 曾雄智梁宋平
- 关键词：蜘蛛离子交换层析反相高效液相色谱
- 敬钊毒素-V突变体K12A-JZTX-V的化学合成与氧化还原复性
- 2008年
- 敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第12位赖氨酸残基的突变体K12A-JZTX-V,合成粗品经反相高效液相色谱分离纯化和MALDI-TOF质谱鉴定,证明化学合成是成功的.线性多肽经谷胱甘肽氧化复性后,复性产物经质谱测定其相对分子量为3549.63,比线性分子的理论分子质量低6,说明六个半胱氨酸已经配对形成了三对二硫键.
- 曾雄智全妙华皮建辉梁宋平
- 关键词：固相多肽合成突变体氧化复性
- 间斑寇蛛粗毒液的生理生化分析及两种采毒方法的比较被引量：9
- 2009年
- 利用两种不同方法采集间斑寇蛛(Latrodectus tredecimguttatus)毒液并对其进行理化和生物学性质的比较分析。结果显示,粗毒液中的蛋白质成分主要是相对分子质量较大(>104)的酸性蛋白质。与毒囊粗毒液相比,电刺激粗毒液中相对分子质量在105左右的蛋白质含量明显高于毒囊粗毒液中的含量,而两者中相对分子质量较小(<104)的蛋白质与多肽的组成非常相似。电刺激粗毒冻干粉和毒囊粗毒冻干粉对小白鼠的LD50值分别为(0.16±0.03)mg/kg和(0.39±0.05)mg/kg体重;对美洲蜚蠊(Periplaneta Americana)的LD50值分别为1.87μg/g和2.32μg/g。在浓度为3.2×10-6g/mL时,电刺激粗毒冻干粉能在(25.0±2.2)min内完全阻断小鼠膈神经-膈肌标本的神经肌肉接头传递;毒囊粗毒冻干粉在浓度为6×10-6g/mL时的完全阻断时间为(23.3±2.2)min;粗毒液中的低相对分子质量(<104)部分在10-4g/mL浓度下对标本的神经肌肉接头传递无明显影响。上述结果表明,间斑寇蛛毒液是一种富含大分子量蛋白质的混合物;哺乳动物神经毒性主要基于其中的大的相对分子质量酸性蛋白质成分,而不是低的相对分子质量的多肽;电刺激粗毒液中的活性成分与毒囊粗毒液中的相似,但含量高于毒囊粗毒液。
- 段志贵杨静晏晓军曾雄智王贤纯梁宋平
- 关键词：间斑寇蛛
- Arg20突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响被引量：1
- 2008年
- 敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位精氨酸残基的突变体R20A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性。复性产物分别用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)进行分子量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析。研究结果表明,Arg20被Ala取代后,R20A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞(DRG)膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V相当,提示Arg20与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性无关或关系不大;而R20A-JZTX-V对TTX-R钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约18.3倍,说明Arg20是与JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道抑制活性相关的关键活性残基之一,推测R20A-JZTX-V活性降低的原因是用Ala替代Arg20后改变了JZTX-V与TTX-R型钠通道的作用位点。
- 曾雄智邓梅春皮建辉全妙华王贤纯梁宋平
- 关键词：突变体氧化复性膜片钳
- 敬钊毒素-V对大鼠术后疼痛模型中机械性异常疼痛的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究敬钊毒素-V对大鼠术后疼痛模型中机械性异常疼痛的影响。方法首先建立大鼠术后疼痛模型,并将造模大鼠随机分为生理盐水组、吗啡组和JZTX-V实验组,每组8只,然后采用von Frey细丝法测量各组大鼠的机械刺激缩爪阈值。结果与生理盐水组比较,肌肉注射5.4 mg/kg吗啡产生了明显的镇痛效果,作用时间持续2.5 h;实验显示肌肉注射500μg/kg JZTX-V具有明显的镇痛作用(P<0.01),持续时间长达4.5 h,比吗啡作用时间延长至少2 h。结论JZTX-V对大鼠术后疼痛模型中机械性异常疼痛具有显著的镇痛效果。
- 孙正华徐德宏陈仁忠蔡丽君池宇朋曾雄智梁宋平
- 关键词：吗啡术后疼痛
- 一种新型人血小板聚集抑制剂的纯化与初步活性鉴定被引量：5
- 2008年
- 目的从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化一种新型人血小板聚集抑制剂,并进行活性鉴定。方法采用阳离子交换与反相高效液相色谱法从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,并命名为敬钊去整合素-I。采用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱测定分子量,用人血制备富含血小板的血浆并加入敬钊去整合素-I,采用血小板聚集仪测定二磷酸腺苷ADP诱导血小板聚集作用。结果从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,其相对分子质量为3 631.42,对血小板具有明显抑制作用,但它对血小板聚集的作用受剂量的影响很大,总的趋势是较低浓度时促进血小板的聚集,较高浓度时则抑制血小板的聚集。结论敬钊去整合素-I是一种源于蜘蛛粗毒的新型人血小板聚集抑制剂,但其对血小板的影响在高浓度与低浓度时产生的效应相反,其准确的作用机制还有待深入研究。
- 曾雄智徐敏梁宋平
- 关键词：蜘蛛反相高效液相色谱质谱血小板活性鉴定
