上海市卫生局青年科研基金(044Y06)
- 作品数：8 被引量：24H指数：4
- 相关作者：王玉东李大金王文君朱影陶敏芳更多>>
- 相关机构：上海交通大学附属第六人民医院复旦大学上海医学院中国福利会国际和平妇幼保健院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局青年科研基金国家自然科学基金上海市科委科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 补肾宁心方对小鼠绝经后骨质疏松的影响被引量：10
- 2005年
- 目的探讨补肾宁心方防治绝经后骨质疏松的作用。方法建立BALB/c小鼠绝经后骨质疏松模型,灌服补肾宁心方浓缩液(简称补肾方组),并以17β-雌二醇为阳性对照(简称E2组),以生理盐水为阴性对照(简称模型组)。12周后处死,取血测Th1/Th2型细胞因子;取椎骨(L3-4)和左股骨测骨密度(BMD);取右股骨行骨组织形态计量分析;胫骨提取总RNA,半定量RT-PCR分析护骨素(OPG)的mRNA表达。计算子宫对体重的比值,并行子宫组织切片观察。结果补肾方组的IFN-γ水平较模型组明显升高(P<0.01),而IL-4水平低于模型组(P<0.05)。补肾方组与E2组小鼠的BMD均改善,骨小梁面积增加,OPG mRNA表达增加;但补肾方组小鼠的子宫明显小于E2组(P<0.05),与模型组比较差异无显著性。结论补肾方能够选择性地防治绝经后骨质疏松,对子宫无或仅有轻微的刺激作用。其机制可能与调节Th1/Th2的偏移及提高OPG的表达,抑制破骨细胞的活性有关。
- 王玉东李大金王文君朱影
- 关键词：补肾宁心方绝经后骨质疏松护骨素TH1/TH2MRNA表达
- ERβ介导脱氢表雄酮对成骨细胞的选择性作用被引量：1
- 2011年
- 目的明确ERβ介导脱氢表雄酮（DHEA）对成骨细胞的选择性作用机制。方法构建ERβ沉默表达的pLVTHM—GFP／ERβ-shRNA质粒和ER[3高表达的pWPT-ERβ重组质粒，转染人成骨细胞系hMG63，使hMG63细胞中的ER[3沉默表达（命名为hMG63-shER[3细胞）和高表达（命名为hMG63-ERβ细胞），分别给予DHEA（1×10^-7mol／L）、加或不加入U0126、依托泊苷作用后，流式细胞仪检测细胞的增殖和凋亡情况；同时利用逆转录PCR技术检测DHEA对hMG63细胞雌激素受体亚型mRNA表达的影响。结果hMG63-ERβ和hMG63-shERβ细胞中ERβ基因的相对表达量分别比hMG63细胞升高7．39倍和降低为17％。DHEA对hMG63-shERβ、hMG63-ERβ和对照细胞hMG63细胞ER[3mRNA的表达有升调节作用，而对ERamRNA的表达无明显影响。与hMG63-shERβ细胞相比，DHEA能明显促进ER[3高表达时（即hMG63-ERβ细胞）和对照细胞hMG63的细胞增殖[增殖指数分别为（81．6±7．6）％、（75．0±5．3）％，P均〈0．05]并拮抗细胞的凋亡[凋亡率分别为（12．2±1．6）％、（14．6±1．5）％，P均〈0．01]，该作用可被U0126部分阻断[增殖指数分别为（33．2±2．0）％、（41．2±2．4）％，凋亡率分别为（40．5±4．3）％、（43．3±4．1）％，P均〈0．05]。结论优势表达的ERB是介导DHEA对成骨细胞选择性作用的主要受体。
- 王玉东郎虓陶敏芳程蔚蔚
- 关键词：去氢表雄酮雌激素受体Β成骨细胞
- β雌激素受体介导脱氢表雄酮对OPG/RANKL的升调节被引量：3
- 2012年
- 目的探讨β雌激素受体(ERβ)介导脱氢表雄酮(DHEA)对成骨细胞骨保护素/细胞核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)的调节作用。方法构建ERβ沉默表达(pLVTHM-GFP/ERβ-shRNA)和ERβ高表达(pWPT-ERβ)重组质粒,并转染人成骨细胞系hMG63,使hMG63的ERβ沉默表达(hMG63-shERβ)和高表达(hMG63-ERβ)。有或无U0126(丝裂原活化蛋白激酶信号途径中特异抑制分子)作用后,给予生理浓度(10-7mol.L-1)的DHEA作用24、48和72 h,ELISA和Western blot法分别检测hMG63培养上清中OPG和细胞中RANKL蛋白表达;Western blot法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径中pERK1/2、JNK和p38分子的表达。结果给予DHEA作用48和72 h后,hMG63分泌的OPG明显增高(P<0.01),而RANKL表达无明显变化;与hMG63细胞相比较,在DHEA作用下hMG63-shERβ和hMG63-ERβ组的ERα表达无明显改变;而hMG63-ERβ细胞中ERβ表达增高,伴随着pERK1/2和OPG的升高(P<0.05,P<0.01);相反,hMG63-shERβ组ERβ表达减少并伴随pERK1/2和OPG分泌的降低(P<0.05)。另外,DHEA对pERK1/2和OPG的升调节可部分被U0126阻断。结论 ERβ可能通过激活pERK1/2-MAPK途径介导了DHEA对成骨细胞OPG/RANKL的调节。
- 王玉东陶敏芳王丽华黄勇万小平
- 关键词：脱氢表雄酮骨保护素破骨细胞分化因子ERΒ
- β雌激素受体沉寂表达载体的构建及表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建雌激素受体β(ERβ)亚型沉寂表达载体,并观察其转染成骨细胞后抑制ERβ基因表达的效果。方法参考人ERβ基因mRNA序列,设计、合成ERβ-shRNA的DNA Oligo后行PCR扩增,获得的shRNA双链DNA片段与pLVTHM-GFP质粒双酶切后连接,转化大肠杆菌E.coliDH5α感受态细胞。取鉴定正确的pLVTHM-GFP/ERβ-shRNA重组质粒转染人成骨hMG63细胞,实验分空白载体组、空白对照组和ERβ-siRNA组,转染48h后于倒置荧光显微镜下观察各组细胞的转染效果,并采用流式细胞术检测转染效率。抽提各组细胞的总RNA,经RT-PCR生成cDNA,Realtime-PCR检测ERβ基因的抑制效率。结果倒置荧光显微镜下观察显示,ERβ-siRNA组hMG63细胞90%以上呈现绿色荧光。流式细胞术检测ERβ-shRNA转染hMG63细胞的转染效率为92.3%。Realtime-PCR检测结果表明,ERβ-siRNA组ERβ表达量(0.17±0.01)仅约为空白载体组(1.00±0.01)的17.3%(P<0.001),ERβ-siRNA对hMG63细胞ERβ基因的抑制效率约为83%。结论成功建立了人ERβ沉寂表达的成骨细胞模型,慢病毒载体介导的ERβ-siRNA能有效抑制成骨细胞ERβ基因的表达,满足了研究成骨细胞中ERβ相关功能的需要。
- 孙旭妍陶敏芳程蔚蔚王玉东
- 关键词：成骨细胞雌激素受体Β
- 脱氢表雄酮增强去势鼠Th1型偏移及成骨细胞增殖能力被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对去势鼠CD4+T细胞Th1/Th2型细胞因子表达和成骨细胞(OB)增殖的影响。方法:建立小鼠绝经后骨质疏松(PMO)模型,分为OVX组、OVX+DHEA组、OVX+E2组。另设Sham组为假手术对照。取腰椎和股骨行骨组织形态计量分析;流式细胞术(FCM)检测各组鼠脾脏CD4+T细胞内IL-2、IFN-γ(Th1型)和IL-4、IL-10(Th2型)的表达;并取椎骨植块法培养OB,FCM分析增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果:OVX组与Sham组相比,椎骨和股骨骨小梁面积显著下降(P<0.01),说明PMO模型成功建立;与OVX组相比,OVX+DHEA组腰椎、股骨及OVX+E2组腰椎、股骨骨小梁面积都明显增加(P<0.01)。OVX组IL-2及IFN-γ表达显著低于Sham组(P<0.05);而OVX+DHEA组和OVX+E2组显著高于OVX组(分别为P<0.01和P<0.05)。OVX+DHEA组IL-4及IL-10表达显著低于OVX组(P<0.01)。OVX组IFN-γ/IL-4比值明显低于Sham组(P<0.05);OVX+DHEA组和OVX+E2组IFN-γ/IL-4比值均显著高于OVX组(P<0.01)。OVX组OB的PCNA表达与Sham组相比显著增高(P<0.05);与OVX组相比,OVX+DHEA组OB核内PCNA的平均表达强度和阳性细胞百分率皆显著增高(分别为P<0.05和P<0.01)。OVX+DHEA组OBPCNA表达与CD4+T细胞IFN-γ水平呈明显正相关(r=0.931,P<0.05);与IL-4水平呈负相关(r=-0.815,P<0.05)。结论:DHEA可通过细胞免疫调节作用形成Th1型免疫偏移,从而显著改善PMO的免疫状态;并有效促进OB增殖,显著改善骨形态。
- 王凌王玉东李大金王文君朱影
- 关键词：脱氢表雄酮CD4+T细胞TH1/TH2型细胞因子成骨细胞增殖
- 脱氢表雄酮抑制成骨细胞凋亡的实验研究被引量：5
- 2005年
- 王玉东罗来敏童剑倩李大金
- 关键词：成骨细胞凋亡脱氢表雄酮绝经后骨质疏松胰岛素样生长因子1雌激素水平肾上腺皮质
- 脱氢表雄酮对成骨细胞ERβ的上调节作用被引量：4
- 2006年
- 目的研究脱氢表雄酮（DHEA）对成骨细胞雌激素受体（ER）亚型的调节及防治绝经后骨质疏松的作用机制。方法取新生2—4dBALB／c小鼠颅骨，用酶消化法进行成骨细胞原代培养并鉴定。取原代培养的成骨细胞，模仿雌激素撤退现象后，给予不同时间1×100mol·L^-1的DHEA培养，透射电镜观察细胞器的变化，RT-PCR分析成骨细胞护骨素（OPG）／破骨细胞分化因子（RANKL），ER亚型的表达；同时分析ER亚型与OPG生成的相关性。结果1×10^-7mol·L^-1的DHEA使成骨细胞的细胞器更为丰富，糖原减少，高尔基体发达且分层增多；对成骨细胞ERα的表达无明显影响，却增高OPG／RANKL．ERβ的表达（均为P〈0．01），二者的表达水平呈明显正相关（P〈0．01）。结论DHEA能够增高OPG／RANKL的表达，从而抑制骨的吸收；其作用机制与ERβ的上调有关。
- 王玉东童剑倩罗来敏李大金
- 关键词：脱氢表雄酮成骨细胞成骨细胞护骨素雌激素受体
- 补肾宁心方对鼠成骨细胞协同刺激分子表达的升调节作用被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨补肾宁心方药物血清对成骨细胞(OB)及CD4+T细胞协同刺激分子表达的调控作用。方法:颅骨酶解法培养OB,体外模拟雌激素撤退;MACS法分离CD4+T;将OB或CD4+T分别予以20%对照鼠血清、E2及20%中药血清培养并以LPS刺激,流式细胞术分析OB表面CD80、CD86以及CD4+T细胞表面CD28、CTLA-4的表达。结果:E2及中药血清组OB表面CD80、CD86的表达显著增加(P<0.01);CsA可降低对照鼠血清组及中药血清组OB表面CD80、CD86的表达(P<0.01);各组CD4+T细胞CD28和CTLA-4的表达无显著改变(P>0.05)。结论:补肾宁心方可上调OB协同刺激分子CD80、CD86表达;该作用可被CsA阻滞;而对T细胞CD28/CTLA-4表达无显著影响,其免疫学意义有待进一步研究。
- 王凌王玉东朱晓勇李大金王文君朱影
- 关键词：协同刺激分子补肾宁心方成骨细胞CD4^+T细胞
