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siRNA沉默平滑肌细胞Cx43的表达及对细胞增殖的影响被引量：1: 2008年; 目的通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默平滑肌细胞缝隙连接蛋白Cx43的表达,观察其对平滑肌细胞增殖的影响。方法应用阳离子脂质体转染的方法,将化学合成的特异性378siRNA转染平滑肌细胞设为特异性siRNA组,并以转染非特异性siRNA和空白作为对照,半定量RT-PCR法分析转染不同时间(24、48、72、96 h)细胞Cx43 mRNA表达水平的变化;同时噻唑蓝(MTT)比色法检测平滑肌细胞增殖,观察转染不同浓度(50、100、1502、00 nmol/L)378siRNA对细胞增殖的影响。结果半定量RT-PCR结果显示与非特异性siRNA组及空白对照组相比,转染特异性378siRNA后Cx43 mRNA表达水平显著地下调并呈时间依赖性特点。MTT结果显示与空白对照组相比,转染低浓度(50 nmol/L)378siRNA早期(24、48 h)OD值开始降低,但差异无统计学意义(P>0.05),随着特异性siRNA浓度的升高,OD值显著降低(P<0.05)。200 nmol/L 378siRNA转染72、96 h对细胞的增殖抑制率分别为32.51%、42.67%(P<0.01),并呈浓度依赖性特点;而作为阴性对照的siRNA转染后则无上述作用。结论转染特异性378siRNA可有效沉默平滑肌细胞缝隙连接Cx43mRNA的表达并抑制平滑肌细胞的增殖。; 冯九庚封荣华段剑蒋丽萍洪涛; 关键词：缝隙连接蛋白CX43 RNA干扰平滑肌细胞增殖

诱导型一氧化氮合成酶在OxyHb诱导的血管痉挛细胞模型中的表达被引量：2: 2008年; 我们应用氧合血红蛋白（OxyHb）孵育平滑肌细胞，构建脑血管痉挛细胞模型，通过免疫细胞化学和比色法检测细胞诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）表达及上清液一氧化氮（NO）含量，探讨其在脑血管痉挛过程中的作用。; 冯九庚封荣华段剑洪涛; 关键词：诱导型一氧化氮合成酶脑血管痉挛细胞模型氧合血红蛋白免疫细胞化学

外膜成纤维细胞在实验性脑血管痉挛中的作用被引量：1: 2008年; 目的在体外模拟血管壁外层结构，建立外膜成纤维细胞（AF）和平滑肌细胞（SMC）共培养，研究血管AF在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用。方法（1）以多聚碳酸酯膜（PET膜）作为载体，将AF和SMC进行共培养。（2）模拟体内出血环境，在PET膜一侧接种AF细胞并加入含10^-6moL／L OxyHb的培养液，分别共培养24h、48h、72h，应用电镜观察SMC的长度。（3）提取各组AF缝隙连接蛋白Cx43进行RT-PCR半定量分析。结果（1）扫描电镜测量发现，加入OxyHb处理的AF能使PET膜对侧未经OxyHb处理的SMC产生收缩（P〈0．001），且收缩程度与OxyHb处理AF细胞时间成正比。（2）AF缝隙连接蛋白Cx43半定量RT-PCR分析显示：24h、48h、72h组中Cx43mRNA平均相对含量较正常组上调（P〈0．01）。结论血管壁外层的AF受到OxyHb作用后可以引起未直接接触OxyHb的SMC发生持续收缩且缝隙连接蛋白Cx43mRNA表达上调，提示AF在蛛网膜下腔出血引起的脑血管痉挛中可能发挥重要作用。; 洪涛段剑汪阳冯九庚江志群; 关键词：外膜成纤维细胞脑血管痉挛共培养氧合血红蛋白

一种可应用于研究脑血管痉挛的新型细胞模型被引量：6: 2006年; 目的在体外模拟血管外壁组织结构,建立一种可应用于研究氧合血红蛋白(Oxy- Hb)诱导的脑血管痉挛的新型细胞模型。方法以微孔多聚碳酸酯膜(PET膜)作为载体,模拟血管壁外弹力层,将成纤维细胞(AFB)和平滑肌细胞(SMC)分别接种于PET膜的两侧共培养,建立AFB-PET-SMC血管外壁重构模型。在PET膜一侧接种的AFB中加入含1×10^(-6)mol/L OxyHb的培养液,而另一侧的SMC培养液中无OxyHb,分别共培养24、48、72 h,应用扫描电镜观察SMC的长度。结果AFB-PET-SMC组织结构关系类似于体内血管外层(成纤维细胞-外弹力层-平滑肌细胞)结构；模拟体内出血环境,OxyHb处理AFB 24、48、72 h后SMC平均长度分别为(41．6±9．21)、(28．34±8．38)、(19．80±7．09)μm,与正常组(55．66±10．35)μm比较差异有统计学意义(P＜0．01)。结论OxyHb作用于PET膜一侧的AFB引起对侧未直接接触OxyHb的SMC发生持续收缩,该细胞模型可应用于研究OxyHb诱导的脑血管痉挛。; 洪涛段剑汪阳蒋丽萍冯九庚江志群; 关键词：脑血管痉挛氧合血红蛋白

RNA干扰抑制血管平滑肌细胞缝隙连接Cx43介导的细胞间通讯被引量：15: 2006年; RNA干扰技术的效应分子是小分子短链RNA（siRNA）。本实验拟通过转染Cx43特异性siRNA检测平滑肌细胞Cx43基因表达和细胞间通讯（GJIC）功能。探讨RNA干扰技术在血管平滑肌细胞缝隙连接功能研究中的应用。; 洪涛冯九庚蒋丽萍段剑汪阳江志群; 关键词：细胞缝隙连接细胞间通讯血管平滑肌 CX43 介导 RNA检测

蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛细胞模型的建立被引量：2: 2004年; 目的　建立蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的细胞模型。方法　①基底动脉平滑肌细胞的培养与鉴定。取兔基底动脉中层 ,应用组织贴块法培养平滑肌细胞 ,用光学相差显微镜、免疫细胞化学染色鉴定。②蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛细胞模型的建立。培养的平滑肌细胞加入OxyHb分别孵育 2 4h和 72h两组 ,应用电镜测定平滑肌细胞的长度和超微结构改变。结果　①培养的动脉平滑肌细胞的鉴定 :在相差倒置光学显微镜下观察 ,传代细胞呈单层及多层重叠成长 ,为典型的峰谷状。抗α actin抗体免疫细胞化学染色显示 ,95 %培养的细胞染色阳性。②成功建立蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的细胞模型 :2 4h组与正常组比较平滑肌细胞平均长度缩短了 2 7.6 7% ,72h组与正常组比较平滑肌细胞平均长度缩短了 6 5 .2 6 %。结论OxyHb对基底动脉平滑肌细胞有收缩作用。细胞模型的建立为在细胞水平探讨蛛网膜下腔出血引起脑血管痉挛的发病机制提供了条件。; 江志群孙华洪涛王玲汪阳何安慰; 关键词：脑血管痉挛细胞模型动物实验

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国家自然科学基金(30360105)