国家自然科学基金(30471095)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- 甘蓝型油菜BnFAD8基因编码序列的克隆和表达谱分析被引量：3
- 2011年
- 通过比对拟南芥等同源基因,克隆了甘蓝型油菜FAD8基因中的保守序列.以得到的FAD8(Fatty Acid Desaturase 8)保守序列片段为信息探针,在GenBank的EST数据库中检索高度同源的EST,并通过人工拼接及RT-PCR得到油菜该基因的全长为1299 bp的cDNA序列,命名为BnFAD8.序列分析结果中发现该基因符合质体定位的ω3脂肪酸脱饱和酶序列特征.通过比较22℃和8℃处理的甘蓝型油菜的BnFAD8基因表达谱,发现该基因在常温下仅存在痕量表达;而在低温条件下在叶中表达出现较大幅度的升高.推测BnFAD8基因和油菜的低温调控存在联系.
- 刘绵学王茂华向俊蓓杨毅李旭锋
- 关键词：甘蓝型油菜基因克隆
- 甘蓝型油菜脂肪酸链延长酶基因FAE1的克隆与原核表达被引量：4
- 2007年
- 脂肪酸延长酶1(FAE1)是广泛存在于植物中并定位于内质网上的一种能催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶.根据Genbank上已知的植物FAE1基因设计引物,以从甘蓝型油菜叶片中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,获得了1380bp的片段.回收该片段,并连接到pMD18-T载体测序.序列比对结果说明了该片段与植物中已知的FAE1序列有极高的相似性,并且不存在内含子序列.将该片段通过高保真酶扩增,EcoRⅠ酶切消化后定向克隆到pGEX-2T表达载体中,在IPTG诱导下于28℃表达出Mr76×103的蛋白质条带.用兔抗GST多克隆抗体做第一抗体进行Western-blot检测,并获得阳性检测结果.这为甘蓝型油菜脂肪酸链延长酶基因FAE1功能的进一步研究奠定了基础.
- 郭经宇王茂华刘绵学王慧徐柯杨毅李旭锋
- 关键词：甘蓝型油菜融合蛋白原核表达
