国家重点基础研究发展计划(2008CB517305)
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 相关作者：洪葵李菊香程晓曙孙国芳丁浩更多>>
- 相关机构：南昌大学第二附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- SOCS1对氧化型低密度脂蛋白促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响被引量：6
- 2011年
- 目的探讨细胞因子信号转导抑制因子-1(suppressor of cytokine signaling-1,SOCS1)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)促进人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响。方法用脂质体转染法将靶向人SOCS1基因的siRNA(SOCS1-siRNA)和阴性对照siRNA(NC-siRNA)转染VSMC,然后给予100μg/mL的oxLDL孵育48 h。实验分为6组:空白对照组、NC-siRNA组、SOCS1-siRNA组、oxLDL组、oxLDL+NC-siRNA组、oxLDL+SOCS1-siRNA组。用RT-PCR和Western blot法检测SOCS1、Bcl-2、Bax和野生型p53(wt-p53)表达量的变化,用MTT法观察细胞存活力,用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果 RT-PCR和Western blot检测发现,SOCS1-siRNA的转染使细胞SOCS1表达降低(P<0.05,P<0.01),同时使Bcl-2表达降低,Bax和wt-p53表达增高(P<0.05,P<0.01),并能抑制oxLDL促进VSMC的Bcl-2表达增高,Bax和wt-p53表达降低的作用(P<0.05,P<0.01)。MTT结果显示,SOCS1表达下调抑制了细胞存活力(P<0.05),并能抑制oxLDL促进VSMC增殖的作用(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,SOCS1表达下调引起了细胞G0/G1期增加(P<0.05)、S期减少(P<0.05)、凋亡率增加(P<0.01),并能抑制oxLDL促进VSMC G0/G1期减少、S期增加、凋亡率降低的作用(P<0.01)。结论 SOCS1表达下调能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制oxLDL促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的作用靶点。
- 丁浩李菊香洪葵孙国芳张南程晓曙
- 关键词：SOCS1OXLDL血管平滑肌细胞增殖
- NADPH氧化酶亚单位nox-1在心肌细胞急性缺氧复氧损伤时的变化及心肌营养素-1的作用
- 目的:探讨心肌细胞急性缺氧复氧损伤时NADPH氧化酶亚单位nox-1的变化及心肌营养素-1的作用。方法:用改良的方法培养出生1-3 d的乳鼠心肌细胞,分为6组:（1）对照组;（2）缺氧复氧组;（3）缺氧复氧+CT-1组;...
- 万磊李菊香洪葵丁浩夏子荣苏海颜素娟吴延庆吴清华程晓曙
- 关键词：心肌细胞缺氧复氧心肌营养素-1
- 文献传递
- Rock可能通过抑制PI3K/Akt通路促进缺氧诱导的心肌细胞凋亡被引量：3
- 2014年
- 目的：通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察Rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）在不同缺氧时点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用。方法：（1）原代培养SD乳鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。（2）利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌细胞缺氧模型,分别缺氧培养1 h、3 h、6 h、9 h,以正常氧培养的心肌细胞作为对照。（3）用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,MTT检测细胞存活率,Western blotting检测ROCK-1、ROCK-2、caspase-3活化片段、PI3K和p-PI3K的表达情况。结果：（1）缺氧1 h、3 h、6 h、9 h后,心肌细胞凋亡率分别为（8.76±1.51）%、（15.36±2.34）%、（26.50±3.43）%、（41.96±4.22）%,与对照组[2.60±0.34）%]比较均有显著差异（P〈0.01）;存活率分别为（93.20±4.12）%、（86.14±3.10）%、（75.53±7.25）%、（60.21±6.75）%,与对照组[（97.60±1.12）%]比较均有显著差异（P〈0.05）。（2）ROCK-1和ROCK-2缺氧1 h即开始升高,3-6 h表达达高峰,9 h开始回落,且均明显高于对照组（P〈0.05）。（3）Caspase-3在缺氧1 h开始逐渐活化,在随后观察的时点内持续处于活化状态,与对照组比较均有显著差异（P〈0.01）。（4）p-PI3K在缺氧1 h后开始升高,3 h达高峰,6 h开始回落,9 h表达基本消失,各时点比较差别有统计学意义（P〈0.05）。结论：ROCK-1和ROCK-2在缺氧后表达逐渐升高,与细胞凋亡的过程相一致。ROCK可能通过抑制p-PI3K信号途径,促进缺氧心肌细胞凋亡。
- 董家龙李菊香孙国芳洪葵
- 关键词：心肌细胞缺氧细胞凋亡
- RNAi对细胞因子信号转导抑制因子1在内皮细胞中表达的沉默作用被引量：1
- 2009年
- 背景:利用RNAi技术引发细胞因子信号转导抑制因子1沉默可促进神经内分泌肿瘤细胞的凋亡,然而对于内皮细胞是否有类似的作用,目前尚不清楚。目的:实验拟验证内皮细胞中是否有细胞因子信号转导抑制因子1表达,并在所设计的siRNA中,筛选出1对对细胞因子信号转导抑制因子1沉默效率最高的siRNA。设计、时间及地点:随机对照,体外细胞学实验,于2007-12/2008-06在南昌大学医学院第二附属医院所属的江西省分子医学重点实验室完成。材料:人脐静脉内皮细胞由南京凯基生物公司提供。方法:设计并化学合成4对靶向细胞因子信号转导抑制因子1的siRNA:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4。培养人脐静脉内皮细胞,利用RT-PCR检测人脐静脉内皮细胞是否有细胞信号转导抑制因子1表达。将带有荧光标记的阴性对照siRNA配制成25,50,75,100nmol/L的4组,利用脂质体转染细胞,并在荧光倒置显微镜下观察转染效率,对比得出有最佳转染效率的浓度。然后,实验根据不同的处理因素分成8组:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和阳性对照组、阴性对照组、转染试剂组、空白对照组4个对照组。将均为有最佳转染效率浓度的各组siRNA转染细胞,48h后提取RNA。主要观察指标:利用RT-PCR测定细胞因子信号转导抑制因子1mRNA的相对表达水平。结果:人脐静脉内皮细胞高表达细胞因子信号转导抑制因子1。siRNA在50nmol/L时有较高的转染效率。4对siRNA干扰后,细胞因子信号转导抑制因子1mRNA的表达水平与阴性对照、转染试剂组和空白对照组相比明显下调(P<0.05),与阳性对照组相比显著下调(P<0.01),其中siRNA-3的沉默效率最高(P<0.05),阴性对照、转染试剂组和空白对照组与阳性对照组相比明显下调(P<0.05),阴性对照、转染试剂组和空白对照组之间差异无显著性意义(P>0.05)。结论:内皮细胞中存在细胞因子信号转导抑制因子1表
- 丁浩李菊香洪葵万磊夏子荣颜素娟罗伟程晓曙吴清华苏海吴延庆
- 关键词：内皮细胞SIRNA
- 着色性干皮病基因B对白介素-6介导的血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响
- 2011年
- 目的探讨着色性干皮病基因B（xeroderma pigmentosum B，XPB）对白介素-6（IL-6）介导入血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及凋亡的影响。方法用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3．1-XPB和空载质粒pcDNA3．1稳定转染VSMC，然后给予100U／ml的IL-6孵育48h。实验分为6组：（1）空白对照组；（2）peDNA3．1组；（3）pcDNA3．1-XPB组；（4）IL-6组；（5）IL-6＋pcDNA3．1组；（6）IL-6＋pcDNA3．1-XPB组。用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质免疫印迹法（Westernblotting）检测XPB、Bcl-2、Bax和野生型p53（wt—p53）表达量的变化；用比色法（MTT）观察细胞增殖活力；用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果重组质粒pcDNA3．1-XPB转染使细胞XPB表达增高（P〈0.05或P％0．01），同时Bcl-2表达降低、Bax和wt—p53表达增高（P〈0.05或P％0.01），抑制IL-6促进VSMC的Bcb2高表达、Bax和wt-p53降表达（P％0．05或P％0．01）；XPB高表达抑制了细胞增殖活力（q=2．95，P〈0．05），并抑制IL-6促进VSMC增殖，IL-6＋pcDNA3．1-XPB组和IL-6＋pcDNA3．1组VSMC存活率分别为（102．6±6．2）％和（124．5±7．9）％（q=3．49，P〈0．05）；流式细胞仪检测结果显示，XPB高表达引起细胞G0／G1期增加、S期减少、凋亡率增加（q值分别为2．99、5．39、3．05，P〈0.05或P〈0．01），并抑制IL-6促进VSMC G0／G1期减少、S期增加、凋亡率降低的作用，IL-6＋peDNA3．1-XPB组和IL-6＋peDNA3．1组分别为（70．9±6．7）％与（54．8±2．9）％、（20．2±3．6）％与（36．4±7．2）％、（5．9±2．1）％与（0.3±0．1）％（q值分别为6．91、8．54、7．53，均P〈0．01）。结论XPB基因能抑制VSMC增殖并促进其凋亡，并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用，有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。
- 丁浩李菊香洪葵孙国芳张南吴延庆吴清华程晓曙
- 关键词：增殖
- 干细胞治疗心血管疾病现状及展望被引量：3
- 2010年
- 心脏仅有有限的自我再生能力,因此,心肌受损或梗死后的治疗需要外源性的细胞加以修复,目前研究最多的是干细胞治疗。干细胞按来源不同分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞研究由于伦理学上的争议,其研究受到困扰,成体干细胞移植成为研究热点。研究表明干细胞移植后,心脏的功能有改善,但其具体机制是移植细胞自身作用,还是细胞旁分泌作用或其他,各研究提供的证据不一。移植本身亦带来了许多问题,如移植手段,移植细胞的纯度、移植后细胞的协调性、机体的排斥、致心律失常作用等,这些都引发了进一步的研究。
- 曹青洪葵
- 关键词：心血管病学干细胞细胞治疗
- ShRNA对大鼠心肌细胞ROCK1和ROCK2表达的沉默作用被引量：1
- 2011年
- 背景:已有研究发现,ROCK1和ROCK2参与了细胞的凋亡过程,由此假设下调ROCK1和ROCK2表达能抑制心肌细胞凋亡。目的:验证ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能否有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选沉默效率最高的shRNA。方法:以ROCK1和ROCK2为靶基因,分别构建了3个特异性shRNA重组质粒,转染这些shRNA后观察其对SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的沉默作用,并筛选出沉默效率最佳的shRNA。结果与结论:WesternBlot结果显示,与对照组相比,3个重组质粒ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染均能明显降低SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达(P<0.05或P<0.01),其中ROCK1-shRNA1和ROCK2-shRNA2的沉默效率最高(P<0.05),分别为(82.15±7.53)%和(89.42±5.81)%。这表明ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选出了沉默效率最高的shRNA。
- 丁浩李菊香孙国芳洪葵程晓曙
- 关键词：短发夹RNAROCK2心肌细胞
- 致心律失常右心室心肌病心电图特征波新认识——附罕见粗大Epsilon波二例被引量：3
- 2011年
- 致心律失常性右心室心肌病（ARVD）是主要累及右心室的非缺血性心肌病。90％的ARVD患者存在心电图异常，其中最常见的心电图改变为V1～V3导联T波倒置，大约25％-35％的患者存在特征性的Epsilon波。随着临床医生对该疾病的认识和心电图特征的识别，
- 陈静俞建华邬涛杨人强李菊香黄慧萍胡金柱胡建新吴延庆吴清华程晓曙洪葵
- 关键词：EPSILON波心电图特征致心律失常性右心室心肌病非缺血性心肌病ARVDT波倒置
- 心肌营养素1对心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及信号机制的研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨心肌营养素1(CT-1)对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及信号通路所起的作用。方法用改良的方法培养出生1～3天的SD乳鼠心肌细胞,分为对照组、缺氧复氧组、阻断剂组、营养素组和助溶剂组。后4组进行缺氧3 h,加不同药物处理后,复氧3 h,MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物检测心肌细胞线粒体膜电位,二氯荧光黄双乙酸盐检测细胞内活性氧(ROS),用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。采用RT-PCR法检测心肌细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达,Western blot检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)蛋白水平。结果与对照组比较,缺氧复氧组心肌细胞凋亡率及ROS明显增加,而心肌细胞存活率明显降低,线粒体膜电位下降,eNOS mRNA表达明显下调(P<0.05);与缺氧复氧组比较,营养素组心肌细胞存活率明显升高,心肌细胞凋亡率及细胞内ROS明显减少,线粒体膜电位水平更高,磷酸化PI3K蛋白水平增加,eNOS mRNA表达上调。与营养素组比较,阻断剂组抑制上述指标表达。结论 CT-1能减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤,其作用部分依赖PI3K/蛋白激酶B/eNOS信号通路的激活。
- 李菊香万磊洪葵夏子荣苏海颜素娟吴延庆吴清华程晓曙
- 关键词：心肌再灌注损伤缺氧信号传导
- ROCK抑制剂治疗心血管疾病的研究进展被引量：1
- 2011年
- ROCK为Rho相关的卷曲蛋白激酶，其表达上调常引起平滑肌细胞收缩异常，导致冠状动脉痉挛、动脉粥样硬化、心肌肥厚和肺动脉高压等，因此ROCK抑制剂对这些心血管疾病的发生发展有一定抑制作用，但临床应用尚需更多的研究来证实，本文就ROCK抑制剂在心血管疾病的应用作一综述。
- 孙国芳李菊香
- 关键词：心血管疾病
