国家自然科学基金(81101666)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：徐彬林嘉麟施静雯杨清松毛建文更多>>
- 相关机构：广东药学院广东药科大学中国科学院大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- ClC-3荧光真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建表达ClC-3的荧光真核表达载体,为研究其在肿瘤细胞中的作用提供分子工具。方法将ClC-3的编码序列亚克隆到pEGFP-N1质粒,构建荧光真核表达载体pEGFP-N1/ClC-3,利用脂质体介导将ClC-3基因导入人乳腺癌细胞MCF-7内,通过绿色荧光观察检测基因的表达。结果成功构建荧光真核表达载体pEGFP-N1/ClC-3,该载体转染MCF-7细胞后,可观察到绿色荧光。结论表达ClC-3的荧光真核表达载体构建成功,并在乳腺癌细胞中得到正确表达,为进一步研究ClC-3在乳腺癌中的作用奠定了基础。
- 杨清松张守盼林卓华毛建文徐彬
- 关键词：CLC-3MCF-7细胞转染
- 耐药肿瘤细胞中ClC-3、P-gp的表达变化及相关性被引量：4
- 2016年
- 目的观察电压门控氯通道3(Cl C-3)、P-糖蛋白(P-gp)在耐药肿瘤细胞中的表达变化,并探讨其相关性。方法提取人肝癌细胞株BEL-7402及其氟尿嘧啶耐药株BEL-7402/FU、人结肠癌细胞株HCT-8及其紫杉醇耐药株HCT-8/T的总RNA和蛋白,用荧光定量PCR法检测细胞Cl C-3和多药耐药基因1(MDR1)mRNA的表达,Western blotting法检测细胞Cl C-3蛋白和P-gp的表达,采用线性相关分析Cl C-3蛋白和P-gp表达的相关性。结果耐药细胞BEL-7402/FU和HCT-8/T中Cl C-3、P-gp的mRNA和蛋白水平都高于相对应的非耐药细胞BEL-7402和HCT-8(P均<0.05),在耐药肿瘤细胞中,Cl C-3蛋白与P-gp表达呈正相关(r=0.98,P<0.05)。结论 Cl C-3、P-gp在耐药肿瘤细胞中呈高表达,二者表达水平呈正相关关系。
- 林嘉麟施静雯刘学强余杰徐彬
- 关键词：肝肿瘤结肠肿瘤P-糖蛋白肿瘤细胞
- 稳定表达ClC-3对宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响及其机制被引量：4
- 2014年
- 目的 :探讨稳定表达电压门控氯通道3(voltage-gated chloride channel 3,ClC-3)的宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的变化及其可能的机制。方法 :通过脂质体介导的方法将重组载体质粒pcDNA3.1/ClC-3转染至HeLa细胞中。pcDNA3.1/ClC-3转染后,蛋白质印迹法检测细胞中ClC-3蛋白和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达水平,实时荧光定量PCR法检测细胞中ClC-3和多药耐药基因1(multi-drug resistance gene 1,MDR1)mRNA的表达水平,MTT法检测顺铂对细胞增殖的影响,免疫荧光法检测细胞中ClC-3蛋白和P-gp的表达及定位。结果 :成功获得稳定表达ClC-3的HeLa/ClC-3细胞。HeLa/ClC-3细胞中ClC-3蛋白和P-gp的表达水平以及MDR1和ClC-3 mRNA的表达水平均明显高于转染空载体pcDNA3.1的HeLa/mock细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。与转染空载体pcDNA3.1的HeLa/mock细胞比较,顺铂对HeLa/ClC-3细胞增殖的抑制作用明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),顺铂对HeLa/ClC-3细胞的半数抑制浓度(half inhititory concentration,IC50)为71μmol/L,明显高于HeLa/mock细胞的32μmol/L(P<0.05)。ClC-3蛋白和P-gp共同定位于HeLa/ClC-3和HeLa/mock细胞的细胞膜。结论 :ClC-3可降低HeLa细胞对顺铂的敏感性,可能与ClC-3上调P-gp的表达水平有关。
- 王施思杨清松施静雯林嘉麟徐彬
- 关键词：宫颈肿瘤P糖蛋白顺铂CLC-3HELA细胞
- Thoc1真核表达载体构建及其与ClC-3蛋白在人宫颈癌细胞HeLa中的共定位观察
- 2018年
- 目的克隆Thoc1基因并构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体,观察Thoc1和氯离子通道3(ClC-3)在人宫颈癌细胞HeLa中的共定位情况,分析ClC-3是否参与细胞转录过程。方法采用RT-PCR法扩增获得Thoc1基因的编码序列,将其克隆到p DsRed2-N1载体中,构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体,经PCR、SacⅠ和Bam HⅠ双酶切、基因测序进行鉴定。将对数生长期HeLa细胞随机分为转染组、空转染组及空白对照组,分别采用Lipofectamine 2000转染pThoc1-DsRed2-N1质粒、p DsRed2-N1质粒及脂质体,转染48 h倒置荧光显微镜下观察红色荧光蛋白表达情况。取转染组细胞,采用免疫荧光技术观察Thoc1和ClC-3的共定位情况。结果 PCR鉴定结果显示在约2.1 kb处有一亮带;双酶切得到约4.7 kb和2.1 kb的两个片段,符合预期大小;基因测序结果显示与Genebank中Thoc1基因序列完全一致;证实成功构建pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体。空转染组可观察到较强的红色荧光,空白对照组没有观察到红色荧光,转染组红色荧光强度介于空转染组与空白对照组之间;证实HeLa细胞中存在Thoc1表达。ClC-3分布于细胞核和细胞质中,主要是细胞核中;Thoc1只分布于细胞核中;两者叠加后在细胞核呈黄色荧光,证实ClC-3和Thoc1在HeLa细胞核上存在共同定位。结论成功构建了pThoc1-DsRed2-N1真核表达载体;Thoc1与ClC-3共定位于HeLa细胞核,提示ClC-3可能参与细胞转录过程。
- 刘学强郑兆广王汝上钟杰何桂芳徐彬
- 关键词：真核表达载体共定位
- ClC-3高表达对MMTV-PyMT转基因鼠乳腺肿瘤生长的影响
- 2015年
- 目的:探讨Cl C-3高表达对MMTV-Py MT转基因鼠乳腺肿瘤生长的影响。方法:通过MMTVPy MT转基因鼠与CLCN3转基因鼠交配,构建MMTV-Py MT/CLCN3双转基因鼠,用DNA电泳和免疫组织化学的方法确定MMTV-Py MT转基因鼠及MMTV-Py MT/CLCN3双转基因鼠,观察和测量两种转基因鼠不同周数的自发乳腺肿瘤数目及体积。结果:成功构建MMTV-Py MT/CLCN3转基因鼠。每周对两种转基因鼠进行肿瘤观察及测量,结果显示MMTV-Py MT/CLCN3双转基因鼠比MMTV-Py MT转基因鼠的肿瘤生长快。结论:Cl C-3高表达能促进MMTV-Py MT鼠自发性乳腺肿瘤的生长。
- 吴慧李琴邓璐璐毛建文徐彬李红枝
- 关键词：CLC肿瘤生长转基因鼠
