国家高技术研究发展计划(2002AA223061)
- 作品数：13 被引量：28H指数：4
- 相关作者：周建光黄翠芬王健张惠梁瑞霞更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国人民解放军总医院厦门大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 与人PC-1同源的鼠PC-1基因的启动子的分子克隆和特性分析(英文)被引量：1
- 2006年
- 为了鉴定鼠mPC-1基因表达的调控元件,克隆并分析了该基因的启动子.构建了一系列mPC-1基因启动子的截短序列.通过荧光素酶报道基因,分析了它们在前列腺癌细胞和其它细胞中的表达.结果表明,在AR阳性细胞系中,mPC-1基因启动子活性远远高于SV40和p61-PSA启动子,mPC-1基因启动子599bp至449bp可能含有一个负调控元件;mPC-11.1kb启动子控制的表达主要在前列腺癌细胞系中;雄激素可调控mPC-11.1kb启动子表达.mPC-11.1kb序列是一个有前列腺癌细胞特异性和较强的启动子,经过进一步的修饰有可能作为一种有用的前列腺癌基因治疗元件.
- 梁瑞霞涂智杰王健张惠姜飞庞博郑斌李素萍施庆国黄翠芬周建光
- 关键词：启动子LNCAP细胞
- PC-1分子在细胞内定位的深入探讨被引量：1
- 2004年
- 为了寻找影响PC 1分子进入细胞核的序列 ,将该分子不同区段分别与EGFP融合表达 ,通过观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布 ,发现PC 1分子的第 112～ 190区段是一独立的功能区 ,缺失这一区段后 ,分子的其余部分能够进入细胞核并在其中积累 ,这一区段使PC 1分子被排斥于细胞核之外 ,并在细胞质中浓缩成许多点状结构 .运用以SOS恢复系统为基础的酵母双杂交方法 ,发现PC 1分子能够定位于细胞膜上 ,通过缺失突变发现该分子的第 112～ 190区段是一独立的细胞膜定位信号序列 ,这一序列将其定位于细胞的胞膜上 .
- 张浩周建光李杰之黄翠芬
- 关键词：分子细胞核亚细胞定位基因
- RNA干涉抑制NIH3T3细胞中外源PC-1基因表达
- 2005年
- 目的:获得能有效抑制PC 1基因表达的RNAi靶标,用RNAi技术研究PC- 1基因表达在前列腺癌中的作用。方法:用DNA重组技术构建了可表达短发夹RNA的重组质粒,将重组质粒与表达PC-1- EGFP融合蛋白的质粒共转染NIH3T3细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达差异,从 5个候选靶标中初筛出最合适的RNAi靶标,再通过RT- PCR和Western印迹从mRNA水平和蛋白质水平检测该RNAi靶标抑制PC- 1基因表达的效果。结果:利用RNA干涉有效靶点抑制了NIH3T3细胞中外源PC -1基因表达。结论:这一策略适合大量筛选RNAi有效靶标序列,其结果为研究RNAi技术降低PC 1基因的表达对前列腺癌细胞的影响奠定了基础。
- 周立权张惠高雪松王健梁瑞霞洪宝发周建光
- 关键词：RNA干涉基因表达前列腺肿瘤
- 人前列腺癌cDNA文库的构建和筛选被引量：2
- 2005年
- 目的:PC1基因是与前列腺癌相关的新基因,在雄激素非依赖和转移的前列腺癌晚期细胞系C42中高表达。为了进一步研究PC1基因的功能及作用机制,构建C42细胞的cDNA文库,寻找与前列腺癌相关基因PC1相互作用的蛋白。方法:从前列腺癌细胞系C42中提取总RNA,进而分离poly(A)+RNA,用poly(A)+RNA进行反转录并以SMARTⅢTM和CDSⅢoligo(dT)为引物进行PCR扩增,得到两端具有同源臂的PCR片段,以此同源臂为基础在酵母中实现同源重组。通过文库片段、线性化的pGADT7Rec和诱饵质粒pGBKT7PC1C共转化酵母AH109菌株,在文库构建的同时进行与PC1相互作用蛋白的筛选;或先将文库片段,线性化的pGADT7Rec转化AH109,再利用AH109和Y187两种酵母菌株的接合生殖进行筛选。最后用Far Western印迹方法进一步从体外论证了PC1蛋白可与自身相互作用形成二聚体。结果:构建了具有基因多样性和库容量足够大的人前列腺癌cDNA文库,双链cDNA片段的长度大小范围为250～5000bp。共转化的效率为4.3×105,重组效率为1.9×106,筛选的克隆数为4.3×105。接合法筛选时的接合效率为32%,筛选的克隆数为1.0×106。筛选到4个与PC1蛋白相互作用的阳性克隆。从体外证明了PC1蛋白可形成二聚体。结论:此文库的多样性和库容量均符合筛选需求。可用于前列腺癌相关基因?
- 张惠庞博王健周建光李杰之黄翠芬
- 关键词：前列腺肿瘤基因文库酵母双杂交
- 前列腺癌转移细胞模型——LNCaP细胞模型被引量：5
- 2005年
- 前列腺癌是严重威胁欧美国家男性健康的恶性肿瘤。研究前列腺癌发生与发展的分子机制，尤其是从雄激素依赖性向雄激素非依赖性转化的分子机制对该病的诊断和治疗极为重要。前列腺癌转移LNCaP细胞模型包括LNCaP、C4、C4-2和C4-2B等一系列的遗传背景相同的细胞系，成功模拟前列腺癌细胞从雄激素依赖性发展到雄激素非依赖性，从不转移到转移各个阶段的基本生物行为学的特征，已成为当前应用最为广泛的前列腺癌细胞模型之一。
- 张惠周建光黄翠芬
- 关键词：前列腺肿瘤细胞系雄激素类
- PSA启动子结构和表达调控研究进展被引量：5
- 2004年
- 作为前列腺肿瘤标志物的前列腺特异性抗原(prostate specificantigen,PSA)是一种类丝氨酸蛋白酶的激肽释放酶,主要在前列腺上皮细胞和大部分的前列腺癌细胞中表达。雄激素通过雄激素受体而严格调控该基因的表达,当前列腺癌发展为雄激素非依赖型的同时也伴随有血清中的PSA水平的提高,这预示着有其他因素在不依赖雄激素的条件下调控PSA的表达。就目前对PSA基因表达调控的机制,以及在调控中发挥重要作用的启动子和增强子区结构的研究进展做一综述。
- 王健周建光黄翠芬
- 关键词：前列腺特异性抗原雄激素受体
- DNA微阵列技术及其在肿瘤生物学中的应用被引量：1
- 2006年
- 人类基因组测序工作的完成使人们可以方便地调用任何基因序列,但仅有基因序列并不能解释众多的生物学问题,这要求发展一种高通量的技术用于研究基因的生物学功能以及基因的相互作用。DNA微阵列技术以其高通量的特点,已经在肿瘤生物学的研究中逐渐被采用。由于癌症是源于基因表达谱改变的基因疾病,通过DNA微阵列技术研究癌症细胞和对应的正常细胞的基因表达差异,将会使人们更好地了解肿瘤的形成和发展过程。
- 涂智杰周建光陈亮
- 关键词：功能基因组微阵列表达谱肿瘤
- 前列腺特异启动子和部分靶基因在转基因模型中的应用进展
- 2006年
- 遗传工程小鼠模型已被大量用于前列腺癌发生、发展、恶化和转移的研究。构建小鼠模型的途径主要包括转基因的过表达、基因敲除或敲入,以及使用Cre/lox技术进行条件调控。本文综述了目前构建的有明显遗传表型的转基因小鼠模型所用到的前列腺特异的启动子,以及所用到的靶基因。
- 梁瑞霞姜飞周建光黄翠芬
- 关键词：前列腺癌启动子靶基因
- 双向凝胶电泳技术在前列腺癌研究中的应用被引量：1
- 2006年
- 双向凝胶电泳是目前蛋白质组学研究最常用的技术之一,近年来,在前列腺癌的研究中也有很多实际应用,取得了一些成果。本文按照双向电泳的样品来源,分类综述了目前基于双向电泳的蛋白质组学技术在寻找前列腺癌肿瘤标记物、药物靶标和阐明其发生发展机理研究中的应用。
- 庞博周建光
- 关键词：双向电泳前列腺癌蛋白质组学肿瘤标记物
- RNA干涉技术稳定抑制PC-1基因表达对前列腺癌细胞C4-2的影响被引量：4
- 2005年
- 目的:研究用RNA干涉技术(RNAi)稳定抑制PC-1基因表达对前列腺癌细胞C4-2生物学行为的影响。方法:用DNA重组技术构建携带与短的发夹结构的干涉RNA相对应DNA序列的重组质粒pSC394-414,采用脂质体将pSC394-414重组质粒稳定转染C4-2细胞,PCR分析外源DNA序列的整合情况,RTPCR及Western印迹鉴定RNAi抑制PC1基因表达的细胞株,MTT试验分析该细胞的生长速度,软琼脂克隆形成实验检测其非锚着依赖性生长能力。结果:获得了用RNAi稳定抑制PC-1基因表达的细胞株C4-2-pSC394-414,该细胞株中的PC-1mRNA及PC1蛋白的表达均显著降低,细胞生长速度显著减慢,软琼脂克隆形成能力显著下降。结论:抑制PC-1基因表达,可降低C4-2细胞生长速度及非锚着依赖性生长能力。
- 周立权张惠高雪松王健梁瑞霞洪宝发周建光
- 关键词：前列腺癌RNA干涉基因表达
