北京市科技新星计划(XX2013099)
- 作品数：8 被引量：32H指数：4
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- 相关机构：中国兽医药品监察所山东农业大学北京中海生物科技有限公司更多>>
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- 2308、M28、S1330、16M四株布鲁氏菌灭活参数研究被引量：2
- 2015年
- 【目的】比较不同灭活方法对布鲁氏菌灭活的效果,确定灭活参数,为制备布鲁氏菌灭活抗原提供参考。【方法】将4株布鲁氏菌参考强毒株2308(牛种)、M28(羊种)、S1330(猪种)以及16M(羊种)分别经大豆酶消化蛋白胨(TSA)培养基培养繁殖后,用生理盐水制成(4-8)×1010 CFU/m L的菌悬液,分成等份于80 oC灭活不同时间,另将同样浓度的菌悬液分别用不同浓度甲醛于37 oC灭活不同时间,通过灭活检验,确定灭活效果。取经甲醛和热灭活的16M抗原,分别以1×1010 CFU/只剂量皮下注射1.5-2.0 kg家兔2只,免疫6周内,每周采血用虎红平板凝集试验(RBT)和试管凝集试验(SAT)测定抗体效价。【结果】80 oC、5 min可灭活2308、S1330和16M三种菌株,80 oC、10 min可灭活全部4种菌株。0.2%甲醛灭活7 d,4种试验菌株均不能被彻底灭活;0.4%甲醛在12 h内只能灭活16M,72 h可灭活M28;0.4%甲醛灭活2308和S1330两次试验结果差异较大。0.6%甲醛可在72 h内灭活4种试验菌。不同方法灭活的16M抗原免疫家兔后,其血清抗体虎红平板凝集和试管凝集效价消长趋势基本一致,甲醛灭活的抗原免疫原性略高于热灭活抗原。【结论】80 oC热灭活和0.6%甲醛灭活均可用于对布鲁氏菌的灭活,且不影响布鲁氏菌的免疫原性。
- 朱良全王芳吴竞冯宇张金亚王楠朱鸿飞丁家波
- 关键词：布鲁氏菌灭活甲醛
- 牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：16
- 2016年
- 【目的】建立高通量牛布鲁氏菌间接ELISA诊断方法,为科学高效诊断牛布鲁氏菌病提供技术手段。【方法】以提纯的猪布鲁氏菌S2株脂多糖(LPS)作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原包被浓度、包被液、抗原包被时间、封闭液、样品稀释液、血清稀释倍数、兔抗牛酶标抗体稀释液、兔抗牛酶标抗体稀释浓度、最佳TMB底物反应时间等参数,初步建立了牛布鲁氏菌间接ELSIA方法。并用上述条件初步建立的方法对176份牛布鲁氏菌病阳性血清和132份牛布鲁氏菌病阴性血清进行检测。检测结果经SPSS17.0软件分析,构建受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积,确定敏感性和特异性;通过Youden指数确定阴阳性判定的临界点。使用质控阴、阳性血清评价试剂盒的批内和批间重复性。用本研究建立的ELISA试剂盒及商品化试剂盒同时对临床上1 200份牛血清样本进行比对检测,比较其符合率。【结果】通过棋盘法确定的试剂盒中各组分的最佳条件为:抗原包被浓度为10μg·m L-1,最适包被液为碳酸盐缓冲液,最佳包被时间为2—8℃、16 h,最适血清稀释度为1﹕50,最佳封闭液为含有3%明胶的PBST,最佳样品稀释液为含有0.5%蔗糖的PBST,最佳兔抗牛酶标抗体稀释液为含有5%马血清的PBST,最佳兔抗牛酶标抗体工作浓度为1﹕20 000,最佳TMB底物反应时间为15 min。按上述条件建立的间接ELISA方法检测176份牛布鲁氏菌病阳性血清和132份牛布鲁氏菌阴性血清,并统计结果后使用SPSS17.0软件分析该方法受试者工作特征曲线(ROC)线下面积为0.98。最佳判定临界点为样本OD值/阳性OD值(S/P)×100%=20%。在此临界值上时,敏感性为97.7%,特异性为95.5%。对1 200份临床样本的比对检测显示,本研究建立的间接ELISA方法与进口商品化试剂盒的总符合率为96.25%。【结论】建立了特异性和敏感性良好的牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测�
- 王芳冯宇张阁蒋卉朱良全丁家波
- 关键词：布鲁氏菌间接ELISA特异性敏感性
- 减毒沙门氏菌载体构建策略研究进展
- 2014年
- 减毒沙门氏菌能诱导粘膜、体液及细胞免疫,不仅其自身能够产生免疫效应,而且还能携带外源基因诱导宿主特异性应答,是具有广泛应用前景的疫苗载体。本文从减毒致弱菌株构建、外源基因高效表达等方面综述了减毒沙门氏菌载体构建策略的新进展,进而对减毒沙门氏菌活载体应用中待解决的科学问题进行了归纳。
- 刘明荣朱良全
- 关键词：减毒沙门氏菌
- 绵羊红细胞敏感性对补体结合试验的最佳反应时间被引量：2
- 2016年
- 补体结合试验（CFT）是一种经典的抗原、抗体检测方法,其敏感性、特异性均较高,不仅可用于诊断各种传染病,也可用于鉴定病原体,是免疫学上一个应用较广泛的重要试验[1]。在布鲁氏菌病（布病）的血清学诊断方法中,CFT被世界动物卫生组织（OIE）认可为布病血清学确诊的经典标准方法[2]。在CFT实际操作中经常发现,使用不同保存时间的绵羊红细胞（SRBC）滴定同一批次溶血素和补体时,结果存在较大差异,
- 蒋卉彭小薇张阁冯宇张振孙翠丽朱良全丁家波
- 关键词：绵羊红细胞敏感性布鲁氏菌补体结合试验
- 布鲁氏菌A、M因子血清的研制
- 2014年
- 研制牛种布鲁氏菌A因子血清和羊种布鲁氏菌M因子血清，用于光滑型布鲁氏菌特异性种属鉴定。将灭活牛种布鲁氏菌2308株及羊种布鲁氏菌16M株免疫1．5～2 kg家兔各5只制备高免血清。对高免血清采用抗原交叉吸附的方法，制得A、M因子血清，分装冻干后置-20℃保存。微量试管凝集试验结果显示：研制的A因子血清对16M抗原在1∶2．5时无凝集现象，对2308抗原凝集价为1∶320；研制的M因子血清对2308抗原在1∶2．5时无凝集现象，对16M抗原凝集价为1∶160。玻片凝集试验结果显示：研制的A、M因子血清对异种抗原无凝集现象。试验表明，研制的A、M因子血清具有特异性强、效价高的特点，可辅助光滑型布鲁氏菌特异性种属鉴定。
- 张金亚程君生冯宇丁家波王楠皮向成吴竞张东东朱良全毛开荣
- 关键词：布鲁氏菌
- 仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用被引量：4
- 2016年
- 建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌（CVCC79500株）运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18-24 h,37℃、200 r/min振荡培养8-24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108-31×108、33×108-41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108-66×108、78×108-88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5-5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。
- 朱良全孙晔李聪研蒋卉彭小薇陈祥丁家波
- 关键词：合成培养基
- 仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵工艺应用研究被引量：4
- 2016年
- 为确定仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵参数,根据发酵过程中的关键技术,设计3种不同工艺,分别发酵培养21 h,每隔3 h取样进行活菌计数表明,培养15~21 h均可达细菌稳定期,工艺3培养菌数高于其余2种,其最适培养时间为18 h;将合成培养基以1%、2%和3%的接菌量按工艺3分别发酵18 h,发现3者培养菌数基本一致。进一步比较4批合成培养基和普通肉汤发酵18 h的培养效果,期间15、18 h抽样的合成培养基培养菌数分别比普通肉汤高12%和25%;发酵18h的菌液对小鼠安全性及对兔的免疫原性,两者基本一致,接种小鼠均10/10健活,免疫攻毒兔均达4/5~5/5保护,对照攻毒兔5/5死亡。结果表明,发酵培养工艺3可行,可实现仔猪副伤寒活疫苗合成培养基高密度培养,且发酵菌体安全性及免疫原性良好。
- 朱良全孙晔刘延亭蒋卉彭小薇陈祥丁家波
- 关键词：合成培养基发酵工艺安全性免疫原性
- 动物布鲁菌病补体结合试验诊断方法比较研究被引量：12
- 2016年
- 布鲁菌病是造成严重公共卫生安全和经济损失的人畜共患病,目前对该病的血清学诊断方法主要有凝集试验、ELISA、补体结合试验等,其中补体结合试验(CFT)是世界动物卫生组织(OIE)认可的布病血清学确诊的经典标准方法。但在实际布病检验中,由于其原理复杂、操作繁琐、影响因素多、耗时长等原因而未能被广泛应用。为了进一步明晰其原理,提高CFT的可操作性及准确性,本文比较了我国动物布鲁菌病标准和OIE手册中CFT的差异,并结合本实验室应用情况,对CFT在布鲁菌病诊断中常见的问题和注意事项进行了阐述,为布鲁菌病补体结合试验的科学应用及诊断提供了参考。
- 朱良全王芳蒋卉冯宇张金亚张阁张振皮向成王楠毛开荣丁家波
- 关键词：布鲁菌病补体结合试验
