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RNAi机制及在植物中应用的研究概述被引量：9: 2013年; RNA干扰即RNAi,通过外源或者是内源的dsRNA在细胞内诱导同源序列基因表达受到抑制的现象。自从RNAi现象在20世纪90年代中期被发现以来,很快就成为生物化学与分子生物学研究的焦点。文中简要介绍了RNAi在不同水平上的主要作用机制、特点和关键因子的结构与作用,以及在植物抗逆、功能基因、植物育种、植物抗病、植物营养、果实保鲜等方面的应用研究,以期为RNAi在植物中的深入研究提供参考。; 崔喜艳孙小杰刘忠野张继伟; 关键词：RNAI 植物育种植物抗病植物营养果实保鲜

植物组织培养的三大难题及解决方法被引量：5: 2012年; 植物组织培养是以细胞全能性为理论基础建立的一种离体培养技术,阐述了植物组织培养快繁中褐变、玻璃化、污染和移栽成活率低等问题出现的原因,提出预防和控制措施。; 韩琳佟珊珊崔喜艳; 关键词：植物组织培养污染玻璃化褐化

玉米MAPK5基因片段的克隆及RNA干扰载体的构建被引量：3: 2012年; 采用RT-PCR方法从玉米品种B73幼苗中克隆出促分裂原活化蛋白激酶基因5(MAPK5)的cDNA部分片段(691 bp),与GenBank已发表的玉米MAPK5(AB016802)同源性达97%。重新设计带酶切位点的引物,克隆出长度为281 bp的正、反向片段。使用DNA重组技术,用pCAMBIA3300质粒构建了玉米MAPK5的RNAi载体。; 崔喜艳刘晶丁志鑫郝东云; 关键词：促分裂原活化蛋白激酶基因克隆

玉米淀粉分支酶SBEⅡb基因片段酵母双杂交诱饵载体的构建及检测: 2012年; 为探寻玉米淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBEⅡb)与其互作蛋白的作用位点,构建了酵母双杂交诱饵载体。根据CDD和NCBI对SBEⅡb蛋白氨基酸序列的分析,确定玉米SBEⅡb的功能域及非功能域,PCR扩增功能域及非功能域基因的目的片段,经回收纯化,用相同的限制性内切酶将其与载体pGBKT7进行双酶切后,分别将目的基因片段与载体pGBKT7进行连接。构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X(X=1,2,3,4,5,6),转化酵母菌AH109的菌液,OD600值在0.8以上,证明诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X对酵母菌AH109没有毒性作用;转化诱饵载体后的酵母菌AH109,在SD/-Trp/X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,排除了pGBKT7-SBEⅡb-X具有自激活宿主菌AH109的作用。构建的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X(X=1,2,3,4,5,6),其表达对酵母细胞无毒性及对报告基因无自激活作用,可为下一步分析SBEⅡb与其互作蛋白的作用位点奠定基础。; 崔喜艳刘晶刘忠野韩琳; 关键词：玉米诱饵载体酵母双杂交

双分子荧光互补技术(BiFC)分析玉米SSⅠ与PPDK1之间的蛋白互作被引量：5: 2013年; 【目的】分析玉米胚乳可溶性淀粉合成酶(SSⅠ)与质体型糖酵解途径关键催化酶丙酮酸磷酸双激酶(PPDK1)的蛋白互作关系,揭示可能发生互作的亚细胞位置。【方法】采用酶切连接的方法构建326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1双分子荧光互补表达载体,转化农杆菌EHA105,瞬时浸染烟草叶片组织,激光共聚焦显微镜下观察SSⅠ和PPDK1相互作用产生的荧光信号。【结果】双酶切试验鉴定表明,326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1重组载体构建正确;PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中;双分子荧光互补试验中,可观测到SSⅠ和PP-DK1相互结合而产生的黄色荧光信号。【结论】证实SSⅠ和PPDK1能够在植物活体细胞内发生真实的蛋白互作。; 崔喜艳张继晓窦瑶孙小杰尹悦佳刘相国

几种玉米叶片总RNA提取方法的比较研究被引量：4: 2012年; 本研究以玉米(B73)叶片为实验材料,比较了Trizol法、CTAB法和改进的SDS酚法提取后RNA的质量。琼脂糖凝胶电泳结果表明,CTAB法和Trizol法提取物中含有大量多糖,RNA质量不足以进行后续的研究工作,而通过加入适量的乙醇等实验步骤改进的SDS酚法,提取的RNA纯度高,电泳效果好。通过特异引物扩增试验发现,利用改进的SDS酚法能扩增出预期的目的基因片段,可很好的应用于基因克隆等后续分子生物学实验。; 刘晶韩琳刘忠野崔喜艳; 关键词：玉米 RNA

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博士后科研启动基金(2009)