广东省教育厅科研项目(2003-1009)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：安立龙窦忠英效梅杨学义马霄飞更多>>
- 相关机构：广东海洋大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：广东省教育厅科研项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 人胰腺干细胞建系及移植诱导胰岛治疗大鼠糖尿病被引量：7
- 2008年
- 供体不足已成为移植胰岛治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的主要障碍,分离克隆胰腺干细胞作为种子细胞并诱导其分化为功能性胰岛可提供丰富的移植资源.本研究从人流产胎儿胰腺组织分离获得1例单克隆胰腺干细胞系.无菌取流产胎儿胰腺组织,0.1%Ⅳ型胶原酶消化分离为单个细胞和细胞团.低糖DMEM+10%FBS培养,单个细胞和细胞团贴壁,原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长.0.25%胰蛋白酶+0.04%已二胺四乙酸(EDTA)消化传代,成纤维样细胞和其他细胞逐渐被消除,上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化.克隆环筛选,获得单克隆人胰腺干细胞.在培养液中添加10ng/mL表皮生长因子(EGF),单克隆人胰腺干细胞快速生长至单层,呈铺路石样.继续传代培养,1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺干细胞已传50代.液氮冷冻保存细胞1×109个以上.染色体核型分析,该干细胞系为正常的二倍体细胞.免疫组织化学反应,共表达pdx1,glucagon,nestin及CK19蛋白,不表达insulin,CD34,CD44及CD45.RT-PCR检测,转录pdx1,glucagon,nestin及CK19的mRNA,不转录insulin.β-巯基乙醇诱导,分化为神经细胞,免疫组织化学反应表达NF蛋白.烟酰胺诱导,分化为DTZ染色阳性,转录表达insulin,分泌insulin和C肽的功能性类胰岛.将单克隆人胰腺干细胞体外诱导胰岛移植在STZ制备的糖尿病大鼠肾囊内,能降低糖尿病大鼠血糖水平,延长寿命.
- 效梅安立龙杨学义葛昕乔海赵婷马霄飞樊敬庄朱梦漾窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆分化
- 单克隆人胰腺干细胞的形态和蛋白表达特征被引量：3
- 2009年
- 目的研究1例单克隆人胰腺干细胞系的细胞形态和表达特性。方法10例4～5月龄流产胎儿胰腺组织,胶原酶消化。原代细胞DMEM培养,胰蛋白酶消化传代。在传代中逐渐纯化胰腺干细胞。克隆环筛选单克隆人胰腺干细胞,扩增培养。活力较好的细胞液氮冷冻保存。采用HE和Giemsa染色,观察单克隆人胰腺干细胞的形态特征;通过透射电镜分析其超微结构。用免疫组织化学反应和RT-PCR方法,检测其蛋白水平和mRNA水平的表达特征。结果1例来源于4月龄男性胎儿的单克隆人胰腺干细胞建系,传50代。液氮保存细胞1×109个以上。单克隆人胰腺干细胞完全贴璧时呈多角形上皮样,单核,圆形或椭圆形,单、双或多核仁。细胞核质比大,线粒体、内质网等细胞器均不发达,胞质内无分泌颗粒,属于发育早期的胰腺上皮样细胞。共表达胰肠同源域因子1（pdx1）、胰高血糖素、巢蛋白及角蛋白19（CK19）,不表达胰岛素、周期蛋白34（CD34）、CD44及CD45。转录表达pdx1、胰高血糖素及巢蛋白的mRNA,不转录表达胰岛素。结论首次证实1例共表达pdx1、胰高血糖素、巢蛋白及CK19蛋白的单克隆人胰腺干细胞系。
- 效梅安立龙窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆免疫组织化学反转录-聚合酶链式反应
- 胰腺干细胞生物学特性研究进展被引量：1
- 2008年
- 胰腺干细胞是一类来源于胎儿或成年胰腺组织中的成体干细胞。多数研究认为胰腺干细胞体外培养时,贴壁生长,呈多角形上皮样,具有较高的扩增性;表达胰腺发育过程中的一些决定因子Pdx1、HNF3β、Ngn3、Th及Isll等,还共表达胰腺终末细胞释放的激素glucagon、insulin等,甚至共表达来源于其它胚层细胞的表达物CK19、nestin等;具有多分化潜能,其特点是在自然分化过程中,优先分化为胰腺组织细胞,在特定的条件下,也可转分化为其它组织细胞。胰腺干细胞生物学的不断深入研究,为分离、克隆胰腺干细胞及定向诱导其分化为功能性胰岛移植治疗人类糖尿病奠定了基础。
- 效梅安立龙窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞分化
- 移植源于人单克隆胰腺干细胞的胰岛治疗大鼠糖尿病被引量：5
- 2009年
- 将人单克隆胰腺干细胞（1．0×10^4个／孔）接种在铺有明胶的6孔板内，体外定向诱导其分化为包含大量β细胞的类胰岛。双硫腙染色呈阳性。RTPCR检测，转录表达胰岛素。Sprague-Dawley成年大鼠30只，6只腹腔注射缓冲液作正常对照，24只腹腔注射2％链脲菌素制备糖尿病模型。注射后48h及5、8d，断尾采血，测定全血血糖。随机取3次血糖均〉16．65mmol／L的糖尿病大鼠用于移植试验。DMEM稀释每个阳性孔诱导胰岛细胞至100μL，分别移植在12只糖尿病大鼠左侧肾囊内。6只糖尿病模型对照大鼠左侧肾囊内分别注射100μL DMEM。实验大鼠每10d断尾测全血血糖1次。在为期67d的移植试验中，12只诱导胰岛移植大鼠血糖水平从18．93～25．78mmol／L降至6．32～11．47mmol／L。除2只死于移植感染外，其余存活了54～67d。6只糖尿病对照大鼠血糖水平持续在18．73～25．96mmol／L。1只感染死亡，5只存活了16～42d。6只正常对照大鼠血糖基本保持在3．56～5．83mmol／L，死亡率为0。结果表明，人单克隆胰腺干细胞体外定向诱导能分化为包含大量β细胞的功能性胰岛，移植这些诱导胰岛能降低糖尿病大鼠血糖水平，延长其寿命。
- 效梅安立龙杨学义窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆诱导胰岛糖尿病
- 单克隆人胰腺干细胞分离培养体系的建立被引量：3
- 2008年
- 本研究探讨了建立单克隆人胰腺干细胞分离培养体系及单克隆人胰腺干细胞系,对一些影响干细胞增殖的因素进行了分析。无菌取人流产胎儿胰腺组织。切碎至1 mm^3,0.1%Ⅳ型胶原酶消化。低糖DMEM、10%FBS、3.7g/L NaHCO_3、0.08 g/L青霉素及0.1 g/L链霉素培养液贴壁培养细胞。2.5 g/L胰蛋白酶+0.4g/L EDTA消化传代。克隆环筛选单克隆干细胞,培养液中添加10 ng/mL EGF,扩增单克隆干细胞。采用核型分析法检测干细胞染色体,MTT法测定干细胞生长曲线。胶原酶消化胰腺组织.获得单个细胞和细胞团。贴壁培养,原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长。胰蛋白酶消化传代,上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化。克隆环筛选,获得单克隆人胰腺干细胞。扩增培养。1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺组织干细胞建系,传50代。染色体核型分析,该干细胞系为正常的二倍体细胞。细胞生长曲线显示培养1-4 d,干细胞生长缓慢,5-6 d,进入倍增期。培养液中添加15%FBS,干细胞增殖较快,再添加15 ng/mL EGF或10 ng/mL IGF-Ⅱ,干细胞增殖更快。研究结果表明应用本实验建立的细胞分离培养体系获得了单克隆人胰腺干细胞系。
- 效梅安立龙葛欣窦忠英
- 关键词：EGF
- 单克隆人胰腺干细胞分化特性的研究被引量：1
- 2008年
- 研究1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺组织的单克隆人胰腺干细胞(monoclonal hu- man pancreatic stem cell,mhPSC)系的体内外分化特性。将mhPSCs接种在铺有0.1%明胶的培养皿内,扩增培养3 d后,加高糖DMEM诱导液诱导培养25 d。相差显微镜下,观察细胞生长状况。采用双硫腙染色法、RT-PCR及葡萄糖刺激释放胰岛素和C肽实验.对体外定向诱导mhPSCs分化为功能性胰岛进行检测。将mhPSCs悬液注射在成年雄性裸鼠腹股沟皮下。注射30 d时。取出移植物,采用SP法进行免疫组织化学反应。以检测mhPSCs的体内自然分化潜能。体外扩增培养。mhPSCs贴壁生长,呈多角形上皮样。生长至单层,呈"铺路石"状。体外定向诱导,细胞逐渐由多角形变成圆形,并聚集成类胰岛。诱导培养15 d时。形成的类胰岛中少数细胞分化为β细胞,双硫腙染色阳性。诱导培养25 d时,多数细胞分化为β细胞。双硫腙染色阳性,转录表达胰岛素的mRNA。用不同浓度葡萄糖刺激,诱导胰岛不仅释放胰岛素和C肽。而且其释放量随糖刺激浓度升高显著增加(0.01
- 效梅安立龙窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆分化
