吉林省青年科研基金(20090154)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- 靶向S基因siRNA抑制猪血凝性脑脊髓炎病毒在N2a细胞中的复制被引量：3
- 2011年
- 以猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)的S糖蛋白基因作为靶基因,设计并体外转录合成2对小干扰RNA(siRNA),分别为SS1和SS2。将SS1和SS2分别转染小鼠成神经瘤细胞(N2a)并在转染后接种HEV,48h后通过间接免疫荧光、血凝试验、TCID_(50)测定以及荧光定量PCR等方法对SS1和SS2抑制HEV在N2a细胞中增殖的效果进行了研究。结果显示,转染细胞感染HEV48 h后,SS1和SS2干扰组细胞出现的绿色荧光明显少于对照组,血凝效价分别是对照组的1/18和1/32,病毒感染滴度分别是对照组的1/28和1/103,两干扰组的HEV基因组的拷贝数分别是对照组的76%和84%。以上结果表明,SS1和SS2均对HEV在N2a细胞中的复制具有不同程度的抑制作用,其中以SS2的抑制作用最为显著。该项试验研究结果不仅为HEV致病机制的研究奠定基础,同时可为抗HEV新型药物及抗病育种新靶点的设计奠定分子生物学基础。
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- 关键词：S基因SIRNA
- 猪血凝性脑脊髓炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 根据GenBank中的猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)S蛋白基因的保守序列设计合成1对特异性引物,经PCR扩增S基因并构建含有该基因片段的重组质粒,将该重组质粒作为阳性标准品,建立了检测HEV的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法。结果显示,该方法线性关系良好,相关系数为0.994;敏感性高,检测下限为1.6×104 copies/μL;特异性强,与牛冠状病毒、伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒不发生交叉反应;并且重复性好,组内、组间的变异系数均小于2%。应用该方法对采集的20份疑似HEV感染病料进行检测,其中16份为阳性,而用常规PCR检测同样的样品,仅8份为阳性。表明建立的SYBRGreen Ⅰ real-time PCR方法具有快速、特异、敏感、重复性好等优点,可用于临床上HEV的检测及定量分析。
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- 关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒荧光定量聚合酶链反应
