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国家自然科学基金(30070686)

作品数：11 被引量：24H指数：4
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相关机构：第四军医大学西安联合大学更多>>
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相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 8篇医药卫生
  • 5篇生物学

主题

  • 10篇病毒
  • 9篇汉滩病毒
  • 5篇昆虫细胞
  • 5篇基因
  • 4篇嵌合
  • 4篇嵌合基因
  • 4篇免疫
  • 4篇M基因
  • 4篇S基因
  • 3篇蛋白
  • 3篇肾综合征
  • 3篇肾综合征出血...
  • 3篇综合征
  • 3篇综合征出血热
  • 3篇出血热
  • 2篇原核表达
  • 2篇糖蛋白
  • 2篇片段
  • 2篇免疫学
  • 2篇核蛋白

机构

  • 10篇第四军医大学
  • 1篇西安联合大学

作者

  • 10篇吴兴安
  • 10篇张芳琳
  • 10篇徐志凯
  • 10篇白文涛
  • 10篇刘勇
  • 9篇王海涛
  • 9篇罗雯
  • 7篇阎岩
  • 3篇胡刚
  • 2篇赵茜
  • 1篇薛小平
  • 1篇于澜
  • 1篇史梦远
  • 1篇闫岩

传媒

  • 2篇中国人兽共患...
  • 2篇中国病毒学
  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇西北大学学报...
  • 1篇免疫学杂志
  • 1篇西安联合大学...
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇科学技术与工...
  • 1篇Journa...

年份

  • 6篇2003
  • 5篇2002
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
Expression of Hantaan virus 26 kD fragment of nucleocapsid protein in insect cells and prelimimary study on its immunogenicity
2003年
Objective: To express the 26 kD fragment of Hantaan virus nucleocapsid protein that contains the major antigenic epitopes in insect cells, and make a preliminary analysis of its immunological characteristics. Methods: The recombinant baculovirus bac-S0.7 with the 700 bp fragment of S gene 5' terminal of Hantaan virus was constructed, and the antigenicity of the expression product was tested. Mice were injected with Sf9 cells infected by the recombinant baculovirus. The humoral and cellular immunological effects were identified by indirect immunofluorescence assay, micro-cell culture neutralization test and T lymphocytes stimulation test. Results: Immunized by bac-S0.7 infecting insect cells, specific antibody with the highest titer of 1∶1 600 was observed. The stimulation indexes of splenocytes of immunized mice to nucleocapsid protein of Hantaan virus was higher than the negative control. Conclusion: The expression product of S0.7 gene fragment in insect cells is immunogenic.
罗雯张芳琳阎岩吴兴安刘勇白文涛王海涛徐志凯
关键词：IMMUNOGENICITY
汉坦病毒嵌合基因G2S0.7在昆虫细胞中融合表达产物的免疫学研究被引量：5
2003年
在前期工作基础上,对汉坦病毒糖蛋白(GP)和核蛋白(NP)的嵌合基因G2S0.7表达产物的免疫学特性进行进一步的研究。将汉坦病毒含有G2S0.7嵌合基因的重组杆状病毒在昆虫细胞中融合表达并免疫BALB/c小鼠,用ELISA、微量细胞培养中和实验及淋巴细胞增殖实验检测免疫应答效果,以研究嵌合基因的免疫效果。结果表明,用该融合蛋白免疫小鼠,可诱导产生抗汉坦病毒NP及GP特异性的抗体,抗体效价分别为1∶3200及1∶200;同时融合蛋白还可刺激机体产生低水平的中和抗体和明确的淋巴细胞增殖反应。说明汉坦病毒G2S0.7嵌合基因表达的融合蛋白既可刺激机体产生特异性的抗汉坦病毒体液免疫应答,也可刺激机体产生特异性的细胞免疫应答,为进一步进行汉坦病毒基因工程疫苗的研究奠定了实验基础。
张芳琳刘勇白文涛吴兴安于澜史梦远胡刚王海涛徐志凯
关键词：汉坦病毒昆虫细胞
汉滩病毒结构蛋白昆虫细胞融合表达产物的免疫原性评价被引量：4
2002年
目的　研究汉滩病毒 (HTNV)囊膜糖蛋白G1与核蛋白 (NP)部分片段在昆虫细胞中融合表达产物的免疫学特性 ,为HTNV基因工程疫苗的研制提供依据。方法　构建含有HTNVG1S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒Bac G1S0 .7,用其感染的Sf9细胞免疫Balb c小鼠。用间接免疫荧光法、ELISA法、微量细胞培养中和试验及T淋巴细胞增殖试验对被免疫小鼠的体液免疫及细胞免疫应答效果进行检测。结果　Bac G1S0 .7感染的昆虫细胞免疫小鼠后 ,测得免疫鼠血清抗HTNV抗体滴度最高达 1∶3 2 0 0 ,含有特异性抗HTNVNP及抗HTNV糖蛋白G1的抗体 ,被免疫小鼠中有部分产生了较低滴度的中和抗体 ,免疫鼠脾细胞对HTNVNP或糖蛋白的增殖反应指数均高于阴性对照组。结论　G1S0 .7嵌合基因的昆虫细胞表达产物具有较好的免疫原性 。
罗雯徐志凯张芳琳阎岩吴兴安刘勇白文涛王海涛
关键词：汉滩病毒结构蛋白免疫原性肾综合征出血热
汉滩病毒核蛋白部分片段与囊膜糖蛋白G1在昆虫细胞中的融合表达被引量：1
2002年
目的　应用Bac -to -Bac杆状病毒表达系统融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白部分片段。方法　构建含有汉滩病毒G1S0 7嵌合基因的杆状病毒表达载体 pFBD -G1S0 7,转化DH10Bac致敏菌 ,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上 ,快速筛选出含有G1S0 7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白 ,利用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果　构建的含G1S0 7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表达出融合蛋白 ,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别 ,表达产物主要集中在细胞内。结论　在昆虫细胞中表达出具有生物学活性的G1S0 7融合蛋白 。
罗雯徐志凯阎岩吴兴安张芳琳刘勇白文涛王海涛
关键词：汉滩病毒杆状病毒昆虫细胞肾综合征出血热HFRS免疫学
大肠杆菌中融合表达汉滩病毒S,M基因片段的研究被引量：1
2002年
为在大肠杆菌中融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP含主要抗原位点的片段 .将汉滩病毒 76 118株S基因编码区 5′端约 0 .7kb的片段与M基因编码G1的片段连接 ,克隆入 pGEX 4T2 ,构建嵌合基因原核表达载体 pGEX 4T2 S 0 .7G1,在大肠杆菌XL1 Blue中诱导GST S0 .7G1融合蛋白的表达 .表达产物用ELISA和Westernblot进行鉴定 .限制性内切酶酶切鉴定证明 ,成功构建了嵌合原核表达载体 pGEX 4T2 S0 .7G1.经IPTG诱导后 ,ELISA活性测定结果表明 ,该融合蛋白可与抗汉坦病毒NPmAb特异性结合 .Westernblot结果显示 ,诱导出相对分子质量 (Mr)大于 1× 10 5的S0 .7G1与GST的融合蛋白 ,并有一系列大小不等的可与抗汉坦病毒NPmAb特异性结合的蛋白带 .获得具有特异性结合活性的融合蛋白GST S0 .7G1。
罗雯徐志凯张芳琳阎岩吴兴安刘勇白文涛王海涛
关键词：大肠杆菌汉滩病毒基因片段
汉滩病毒M、S基因不同拼接方式在昆虫细胞中融合表达效果比较被引量：4
2002年
将汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白 (NP)部分片段以不同方式拼接 ,构建G1S0 .7或S0 .7G1嵌合基因 ,分别插入杆状病毒表达载体 pFBD ,转化DH10Bac致敏菌 ,获得含有嵌合基因的重组穿梭质粒Bacmid ,用其转染Sf9细胞 ,快速筛选出含有G1S0 .7或S0 .7G1嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达外源融合蛋白。利用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果表明 ,含G1S0 .7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表达出融合蛋白 ,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别 ,其分子量约 97kD ;含S0 .7G1嵌合基因之重组杆状病毒在昆虫细胞中表达的融合蛋白 ,只能被抗汉滩病毒核蛋白特异性单抗所识别 ,其分子量约 4 3kD。上述结果提示 ,G1S0 .7嵌合基因可能在昆虫细胞中表达出完整的具有生物学活性的融合蛋白 ,S0 .7G1嵌和基因的昆虫细胞表达产物不完整 ,且生物学活性不如G1S0 .
罗雯徐志凯张芳琳阎岩吴兴安刘勇白文涛王海涛
关键词：汉滩病毒S基因M基因昆虫细胞
汉滩病毒S基因0.7kb片段与M基因G2片段不同拼接方式嵌合基因原核表达产物的初步比较被引量：1
2002年
比较汉滩病毒S、M基因部分片段的嵌合基因不同拼接方式表达产物的活性。构建了嵌合基因原核表达载体pGEX-4T-1-S0.7G2,并与已构建的pGEX-4T-1-G2S0.7的诱导表达产物进行了比较。结果表明,融合蛋白同时保持亲本蛋白的结合活性,且前者表达产物的结合活性始终比后者低。研究表明,嵌合基因的不同拼接方式对融合蛋白的活性可能有一定的影响。
张芳琳徐志凯罗雯阎岩吴兴安刘勇白文涛胡刚王海涛
关键词：汉滩病毒S基因M基因肾综合征出血热嵌合基因
汉滩病毒M,S基因不同拼接方式原核表达效果比较研究被引量：3
2003年
为了比较汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白(NP)主要抗原位点片段不同拼接方式的原核表达效果,将汉滩病毒76-118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5′端约0.7kb的片段连接,克隆入pGEX-4T2,构建嵌合基因原核表达载体pGEX-4T2-G1S0.7,pGEX-4T2-S0.7G1,在大肠杆菌XL1-Blue中诱导表达GST-G1S0.7或GST-S0.7G1融合蛋白。经IPTG诱导后,ELISA活性测定结果表明,两种融合蛋白均可与抗汉坦病毒NP的mAb特异性结合,融合蛋白GST-G1S0.7还可与抗汉滩病毒糖蛋白的mAb特异性结合。Westernblot结果显示,诱导出G1S0.7或S0.7G1与GST的融合蛋白,其中G1S0.7嵌合基因的表达产物降解较少。研究证明:两种拼接方式的嵌合基因均可在大肠杆菌中表达出有生物学活性的融合蛋白,但表达效果不同,为汉滩病毒基因工程疫苗的研究奠定了基础。
罗雯徐志凯张芳琳阎岩吴兴安刘勇白文涛王海涛
关键词：汉滩病毒原核表达融合蛋白
汉滩病毒囊膜糖蛋白G2与核蛋白氨基端在昆虫细胞中的融合表达被引量：5
2003年
目的 :在Bac to Bac杆状病毒表达系统中 ,融合表达汉滩病毒的囊膜糖蛋白G2与核蛋白氨基端。方法 :构建含有汉滩病毒G2S0 .7嵌合基因的表达载体 pFBDHTa G2S0 .7,并转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统 ,将嵌合基因重组至杆状病毒穿梭质粒bacmid中 ,并筛选含有G2S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白。对表达产物用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹进行检测。结果 :构建了的含G2S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒 ,感染昆虫细胞后 ,可表达相应大小的融合蛋白。该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G2的特异性单克隆抗体 (mAb)所识别。结论 :利用杆状病毒表达系统 ,成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G2生物学活性的融合蛋白G2S0 .7。
刘勇徐志凯张芳琳罗雯吴兴安白文涛胡刚
关键词：汉滩病毒杆状病毒昆虫细胞核蛋白糖蛋白
汉滩病毒M和S基因不同拼接方式嵌合基因免疫效果的研究被引量：4
2003年
本文在前期工作的基础上,构建了汉滩病毒76-118株M基因G2片段与S基因5'端0.7Kb片段的嵌合基因真核表达载体pcDNA3.1-G2S0.7及pcDNA3.1-S0.7G2;用该质粒免疫BALB/c小鼠。结果表明两种质粒免疫小鼠可同时诱导产生抗汉滩病毒核蛋白(NP)及糖蛋白(GP)特异性的抗体,且前者刺激产生的抗体效价明显高于后者。淋巴细胞增殖实验表明,pcDNA3.1-G2S0.7组免疫小鼠脾细胞时NP及GP的增殖指数均明显高于空载体对照组,而pcDNA3.1-S0.7G2组未检测到其淋巴细胞有明显的增殖。这说明汉滩病毒M基因G2片段及S基因0.7Kb片段的嵌合基因既可刺激机体产生特异的抗汉滩病毒体液免疫应答,也可刺激机体产生特异的细胞免疫应答。不同拼接方式对嵌合基因免疫效果有很大影响,嵌合基因G2S0.7这种拼接方式明显优于S0.7G2。
张芳琳徐志凯罗雯阎岩吴兴安刘勇白文涛赵茜王海涛
关键词：汉滩病毒M基因S基因嵌合基因基因免疫
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