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天津市应用基础与前沿技术研究计划(10JCZDJC19900)
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3
被引量:6
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张雅静
张宏
赵伟
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促甲状腺激素受体对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运体4表达的抑制作用
被引量:4
2013年
目的探讨促甲状腺激素(TSH)是否通过激活环腺苷酸蛋白激酶A(cAMPPKA)通路,促进3T3-I,1脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α),进一步影响脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GI。UT4)的基因及蛋白的表达和转位,参与脂肪细胞胰岛素抵抗发生的慢性非特异性炎症过程。方法体外诱导3T3-L1前脂肪细胞成为成熟脂肪细胞。采用牛促甲状腺素(TSH)刺激脂肪细胞,并分别予以腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)、蛋白激酶A抑制剂(H89)、雷帕霉素(Rapamycin)干预,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养基TNF-a水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RealtimePCR)法检测细胞GI。UT4mRNA表达水平,Westernblotting方法检测细胞GLUT4总蛋白及膜蛋白表达变化。结果随着TSH刺激时间的延长和刺激浓度的增加,3T3-I。1脂肪细胞培养基内TNF—a浓度呈上升趋势(P〈O.05);Forskolin组与牛TSH组(0.04μmmol/L。)比较,TNF-a水平变化差异无统计学意义[(481.9±28.4)ng/I。比(522.7±36.2)ng/L,P〉0.05);与空白对照组比较,H89干预组(10μmmol/L)TNF—a水平无明显升高[(326.7±43.2)ng/L比(341.9±12.0)ng/L,P〉0.05];随着TSH刺激浓度的增加(0.0004、0.0040和0.0400/,mol/L),与对照组比较GLUT4mRNA表达(0.25±0.11、0.10±0.03、0.04±0.02比0.40±0.13)、总蛋白(1.37±0.19、1.01_--4-0.05、0.46±0.11比1.79+0.22)表达及膜蛋白的相对表达水平呈下降趋势,差异有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01),Rapamycin可以逆转TSH对GLUT4的下调作用。结论TSH与3T3-L1脂肪细胞表面TSH受体结合后,可能通过激活cAMPPKA途径,促进TNFα分泌,进一步下调GLUT4的表达并抑制其转位,并有可能参与胰岛素抵抗的发生。
张雅静
赵伟
张宏
吴晓明
刘佳
关键词:
脂肪细胞
促甲状腺素
肿瘤坏死因子A
葡萄糖转运蛋白4
促甲状腺素通过促进TNF—α分泌下调3T3-L1脂肪细胞的IRS-1表达
被引量:2
2014年
转染促甲状腺素受体(TSHR)shRNA的333-L1脂肪细胞以牛促甲状腺素(TSH)刺激,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western印迹法检测胰岛素受体底物1(IRS-1)的蛋白表达,免疫沉淀法检测IRS-1酪氨酸磷酸化。结果显示,1mIU/mlTSH明显增加333-L1脂肪细胞TNF-01分泌[(341.85±12.00对522.67±36.22)ng/L,P〈0.01];随着TSH刺激浓度的增加,IRS-1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化明显降低(均P〈0.01),而以RNA干扰下调TSHR后上述作用消失。另外,TNF—α拈抗剂WP9QY也可逆转TSH对IRS-1的下调作用。这些结果提示TSH与333-L1脂肪细胞表面TSHR结合后,可能通过促进TNF-α分泌进而下调IRS-1的表达及其酪氨酸磷酸化,而参与胰岛素抵抗的发生。
张雅静
冯玲
赵伟
汤莎莎
张宏
关键词:
促甲状腺素
肿瘤坏死因子Α
胰岛素受体底物1
小发夹RNA
促甲状腺激素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响
2011年
目的 探讨促甲状腺激素(TSH)对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响。方法体外诱导3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞。以不同浓度牛TSH(0.01IU/L、0.1IU/L、1IU/L)刺激成熟脂肪细胞,蛋白质印迹法分别检测48h后成熟脂肪细胞GLUT4蛋白表达水平,ELISA方法检测细胞培养液中白细胞介素6(IL-6)水平。结果与空白对照组相比,以不同浓度(0.01、0.1、1IU/L)牛TSH刺激成熟脂肪细胞48h后GLUT4蛋白表达呈下降趋势,分别下降约23%、44%、74%(均P〈0.05),细胞培养液中IL-6水平明显增加[(101.9300±6.8396)、(104.1533±5.9619)、(129.01674-6.4232)μg/L比(93.2500±2.6695)μg/L,P〈0.05]。结论TSH可下调3T3-L1脂肪细胞GLUT4蛋白的表达。
朱梦瑜
张雅静
常柏
崔姗姗
宋旭臣
张宏
关键词:
促甲状腺激素
脂肪细胞
白细胞介素6
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