“重大新药创制”科技重大专项(2008ZXJ09003-014)
- 作品数：1 被引量：7H指数：1
- 相关作者：贾鹏高鹏陈漉金宁一李霄更多>>
- 相关机构：吉林农业大学吉林大学第一医院吉林大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析被引量：7
- 2009年
- 结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments,scdsFv)基因片段.将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游,并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a,转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明,目的蛋白得到良好表达,经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L.融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后,利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示,所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合,并对其具有明显的杀伤活性,表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂.
- 李霄金宁一李昌田明尧陈漉贾鹏刘立明刘妍高鹏
- 关键词：癌胚抗原凋亡素基因原核表达
