国家自然科学基金(30270298)
- 作品数：12 被引量：17H指数：3
- 相关作者：刘景晶李泰明吴洁金亮唐松山更多>>
- 相关机构：中国药科大学广东药学院武警广东总队医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 重组人胰高血糖素样肽-1类似物的制备及活性分析
- 2011年
- 通过重叠PCR的方法获得重组人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物PP-h[Gly8]GLP-1的目的基因片段,将该基因与融合表达载体pED连接,并在融合伴侣的N末端插入6×His标签,转入E.coli BL21(DE3),构建出重组GLP-1类似物融合表达菌。PP-h[Gly8]GLP-1通过Ni离子亲和色谱和酸水解等步骤分离纯化得到,其纯度大于90%,用电喷雾质谱法测定其相对分子质量与理论分析结果一致。ICR小鼠经口给予耐血糖及血浆胰岛素测定的结果表明,PP-h[Gly8]GLP-1具有明显的降血糖活性和促胰岛分泌作用(P<0.01),为开发潜在的治疗糖尿病药物提供了理论基础。
- 李泰明马艳红徐舒刘涛谷春娇徐辰刘景晶
- 关键词：分离纯化生物活性2型糖尿病
- 抗阿尔茨海默病重组蛋白疫苗的克隆、表达和免疫学鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:制备抗阿尔茨海默病的重组蛋白疫苗。方法:将β淀粉样蛋白42肽N端表位Aβ1-15基因,通过来源于破伤风毒素的辅助性T细胞表位多肽TTP基因片段,与大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(AnsB)基因的C末端融合,构建表达质粒pET28 a-AnsB-TTP-Aβ1-15。转化至E.coliBL-21,TBYE培养基(Kanr)培养,乳糖诱导表达,通过渗透休克、DEAE52-cellu lose和Sepha-dex G-100柱层析制备融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15,通过酶活力和抗原性测定鉴定融合蛋白。结果:获得的融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15保留了AnsB 71%的催化活力,具有与抗Aβ1-42抗体特异性结合的能力。结论:获得了在AnsB多聚酶分子表面呈现有Aβ1-15表位的融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15,为抗阿尔茨海默病疫苗研究奠定了基础。
- 林洁刘景晶陈庆梅施小明
- 关键词：阿尔茨海默病重组疫苗表位抗原性
- 胃泌素释放肽DNA疫苗抑制EMT6乳腺癌生长的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的:观察胃泌素释放肽(GRP)DNA疫苗对EMT6小鼠乳腺癌生长的抑制作用。方法:将构建的GRPDNA疫苗pCR3.1-VS-HSP65-TP-GRP6-M2肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,2周1次,共5次。采用ELISA法对小鼠的血清中抗GRP-IgG类抗体进行检测。最后一次免疫后第2周,接种EMT6小鼠乳腺癌细胞。于肿瘤细胞接种后d14,处死全部动物,称量肿瘤的质量和测量肿瘤的体积。并对瘤组织进行常规HE染色。结果:pCR3.1-VS-HSP65-TP-GRP6-M2免疫BALB/c小鼠,可诱导抗GRP-IgG类抗体的产生。并对随后的EMT6肿瘤细胞攻击有显著的抑制作用(P<0.01),抑瘤率为46.53%。病理学检查结果显示,GRPDNA疫苗成功地激发了宿主的抗肿瘤免疫反应;与pCR3.1-VS-HSP65-TP对照组相比,GRPDNA疫苗免疫组小鼠EMT6肿瘤组织浸润性下降。结论:GRPDNA疫苗显著抑制EMT6乳腺癌生长,为此类疫苗应用研究奠定了基础。
- 欧阳可栋过为吴国君张舒亚刘景晶
- 关键词：胃泌素释放肽DNA疫苗乳腺癌抑瘤率
- 人甲状旁腺素活性片段前体物Pro-Pro-hPTH(1-34)的制备及活性研究
- 2006年
- 目的制备出具有生物活性的人甲状旁腺素活性片段类似物,并对其活性进行考察。方法采用基因工程方法:大肠杆菌BL 21为宿主菌,pET 28a为表达载体,天门冬酰胺酶Ⅱ切除信号肽的C末端片段为融合伙伴,在融合伙伴和目的肽结合处引入Asp Pro酸敏感位点及二肽酶Ⅳ识别的N端Pro Pro位点,之后经诱导表达,酸水解使融合伙伴和目的肽分离。结果成功构建了hPTH(1 34)的融合表达体系,它能高效表达含hPTH(1 34)的融合蛋白,经纯化,得到多肽纯品,经鉴定,该多肽的分子量、氨基酸组成均与设计的分子相符,工程菌中用于编码该多肽的DNA片段其测序结果也与原设计相符,是表达该多肽的正确模板。该多肽在Parsons雏鸡分析及卵巢摘除大鼠模型试验中均显示显著活性。结论用基因工程方法成功地制备出人甲状旁腺素活性片段类似物,该产物具有显著生物活性及潜在的药用价值。
- 王春晓金亮陆毅康永锋刘景晶
- 关键词：活性片段
- 鼻粘膜免疫融合蛋白Hsp65-6×p277预防NOD小鼠1型糖尿病的发生(英文)被引量：1
- 2006年
- 目的提高多肽p277的免疫原性,从而提高其对自身免疫性糖尿病的预防作用。方法将p2776次重复与Hsp65融合置于pET28a中构建重组Hsp65-6×p277表达质粒。该重组质粒在大肠杆菌BL21中以高效可溶形式表达。依次通过细胞裂解、硫酸铵沉淀、双蒸水透析、DEAE纤维素52柱层析纯化获得目的蛋白。用纯化后的融合蛋白Hsp65-6×p277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠。每月眼角取血,检测抗体和血糖浓度。结果初步药效学实验表明融合蛋白Hsp65-6×p277可抑制NOD小鼠中1型糖尿病的发生。结论融合蛋白Hsp65-6×p277有可能发展成为一种具有防治胰岛素依赖性糖尿病作用的疫苗。
- 金亮王宇朱爱华刘景晶
- 关键词：热休克蛋白65胰岛素依赖性糖尿病
- 新的生长激素释放激素类似肽Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys的重组和比较活性(英文)被引量：1
- 2009年
- 目的:为了寻找高活性和长半衰期生的GHRH类似肽。方法:通过使用独特的酸敏感水解位点Asp-Pro的原核表达系统,构建了新的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys类似肽。通过重组细菌裂解、包含体洗涤、乙醇分级沉淀、酸水解、SP-SephadexC-25和SephadexG-10柱层析等技术,纯化了高纯度的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽。通过使用SDS-PAGE、离子化质谱、雌大鼠垂体和人流产胎儿垂体,测定了多肽的纯度、分子量、生长激素释放活性。结果:Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽分子量5373Da与实际值吻合,0.1～10μg/ml的肽剂量不论是对人垂体还是大鼠垂体都增加了垂体生长激素的释放,大鼠垂体生长激素的释放具有剂量依赖性。与标准的hGHRH(1-40)肽比较,新的类似肽有较高的GH释放活性。结果也显示了,Pro-GHRH(1-44)Gly-Gly-Cys与Pro-hGHRH(1-44)肽的GH释放活性无统计学差异。结论:新的类似肽有较好的生长激素释放活性、功能选择性和种属特异性。
- 唐松山张娟辉孔欣唐柏山刘景晶
- 两种生长激素类似肽对大鼠和人流产胎儿垂体激素分泌的影响研究
- 2005年
- 目的研究ProProhGHRH(144)OH和ProProhGHRH(144)GlyGlyCys两种神经肽对大鼠垂体或人流产胎儿垂体激素分泌的影响。方法将神经肽加入KrebsRinger缓冲液内,在不同保温时间内测定大鼠垂体GH或人流产胎儿垂体的hGH、hTSH、hFSH、hLH和hPRL在体外的释放值。GH浓度用人GH放射免疫多抗试剂盒测定,其他垂体激素浓度用顺磁性粒子化学发光免疫测试试剂盒确定。结果鼠垂体活性结果显示,ProProhGHRH(144)OH组(0.1～10μg/mL)和ProProhGHRH(140)GlyGlyCys组(0.01～1μg/mL)的GH刺激值,与刺激前的空白对照值相比有明显的提高,而且随肽浓度的增加,GH的释放量明显提高。在相同浓度下,ProProhGHRH(144)GlyGlyCys肽释放的GH值远大于ProProhGHRH(144)OH肽释放的GH值,即使ProProhGHRH(144)GlyGlyCys的剂量0.01μg/mL,仍有较好的活性。流产胎儿垂体的体外测试结果显示,在5μg/mL剂量下,3种多肽都产生很好的活性,ProProhGHRH(144)GlyGlyCys的平均活性是ProProhGHRH(144)OH的1.71倍,但3种活性多肽间差异没有显著性(P>0.05)。对hTSH、hFSH、hLH和hPRL垂体激素的测试结果显示,这两种神经肽对它们没有刺激作用。结论ProProhGHRH(144)GlyGlyCys和ProProhGHRH(144)OH有很好的GH释放活性和功能特异性。测试结果表明,GHRH的C端改构可调节垂体释放生长激素的活性。
- 唐松山张娟辉刘景晶
- 关键词：神经肽垂体垂体激素
- 新型抗β-hCG基因疫苗的构建及其协同GM-CSF佐剂的抗肿瘤作用被引量：4
- 2006年
- 目的:提高以-βhCG为靶抗原的癌症基因疫苗的免疫原性及抗肿瘤效果。方法:构建基因疫苗pCR-HSP65-X10-βhCGCTP37,并将之与细胞因子佐剂GM-CSF合用。通过对其免疫原性和体内抗肿瘤效果的评价来验证方法的可行性。结果:pCR-HSP65-X10-βhCGCTP37基因疫苗能够成功地诱发机体产生抗-βhCG的特异性抗体,并能在体内起到抗肿瘤作用;GM-CSF能有效提高疫苗的免疫原性和抗肿瘤效果。结论:pCR-HSP65-X10-βhCGCTP37有望成为有效的抗肿瘤基因疫苗,GM-CSF可作为抗肿瘤基因疫苗的理想佐剂。
- 张彦凯严荣严明何毅吴洁曹荣月刘景晶
- 关键词：异位HCG肿瘤
- 大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ作为多肽呈现载体的可行性研究
- 2006年
- 为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体。选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主菌E.coliBL-21,LB培养基(Kanr)培养,乳糖诱导高效表达,通过渗透休克,DEAE 52-cellulose柱层析纯化获得了在AnsB C端融合有线状和环状模型多肽的嵌合酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2C,两种嵌合酶分别保留了AnsB 81%、25%的催化活力,两者的pH稳定性均与AnsB相符。ELISA检测结果显示AnsB-preS2L与抗preS2抗体的结合能力较AnsB-preS2C强。证明AnsB确实能够作为一种表面呈现载体将线性外源多肽以融合表达的方式呈现在酶分子的表面,最终形成一种在每个亚基表面呈现有多肽的嵌合酶。最后,用富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)替换核心抗原表位区作为模型多肽,进一步验证了AnsB作为多肽呈现载体的可行性和通用性。
- 林洁黄永城王学军吴洁刘景晶
- 关键词：外源多肽抗原表位
- Exendin-4类似物的克隆、表达与体内生物活性检测
- 2012年
- 为研究Exendin-4类似物的克隆,融合表达及在体内的生物活性,在pED载体融合伴侣序列中插入利于下游分离纯化的序列成为5#载体,将Exendin-4类似物基因与5#载体中的融合伴侣基因通过酸水解位点连接,转化至E.coli BL21中并诱导表达融合蛋白,酸水解将目的肽与融合伴侣分开后,经阴离子交换树脂分离得到目的肽。6周～8周正常雄性ICR小鼠皮下注射Exendin-4类似物后,口服糖耐量实验检测在不同时间段小鼠血液中葡萄糖及胰岛素含量的变化。结果表明:融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,Exendin-4类似物纯度达91.8%。Exendin-4类似物的活性与对照组相比,具有显著的降低血糖和显著促进胰岛素分泌的活性(P<0.01)。
- 李泰明谷春娇葛晓宇李哲哲王丹马艳红刘涛张美由李丽刘景晶
- 关键词：生物活性血糖胰岛素
