国家自然科学基金(30270294)
- 作品数：8 被引量：33H指数：3
- 相关作者：詹金彪刘琼邹立波冯微宏邹媛更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江大学医学院附属第二医院宁波大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 内质网区蓖麻毒素的逆向转运
- 2007年
- 蓖麻毒素是植物来源的核糖体失活蛋白。蓖麻毒素必须通过细胞的内膜系统到达内质网,然后转位至胞质,才能作用于胞质内的核糖体。在内质网中毒素的两条链分离,具有催化活性的A链被内质网上的蛋白质识别,并被转位到胞质内催化核糖体失活。现对内质网在参与蓖麻毒素胞内转运过程中的作用进行综述。
- 刘琼詹金彪
- 关键词：蓖麻毒素内质网逆向转运转位
- 美洲商陆抗病毒蛋白-Ⅱ基因的克隆和表达被引量：6
- 2006年
- 根据报道的cDNA序列,用RT-PCR的方法从美洲商陆夏季的叶片中克隆美洲商陆抗病毒蛋白-Ⅱ(pokeweedantiviralproteinⅡ,PAP-Ⅱ)基因。将PAP-Ⅱ基因克隆至表达载体pET-28a(+)并在大肠杆菌中表达,SDS-PAGE电泳分析结果表明,PAP-Ⅱ蛋白在BL21(DE3)菌中获得表达,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体、复性和BBSTNTA树脂柱亲和层析纯化,获得高纯度的PAP-Ⅱ蛋白。用非放射性基于ELISA方法检测经过复性纯化后PAP-Ⅱ蛋白和蓖麻毒素A链(RTA)在体外对HIV-1整合酶有较强的抑制活性,其IC50分别约为303μg/mL,220μg/mL。用MTT法分析PAP-Ⅱ蛋白的生物学活性,复性纯化后蛋白对HEP-G2和Hela细胞有细胞毒作用,IC50分别为93μg/mL,102μg/mL,说明了PAP-Ⅱ蛋白能抑制肿瘤细胞的生长。构建的PAP-Ⅱ表达系统所表达的蛋白经复性后具有生物学活性,为进一步研究PAP-Ⅱ的抗HIV-1机制和抗肿瘤作用奠定了基础。
- 黄建松詹金彪邹媛冯微宏
- 关键词：核糖体失活蛋白HIV-1整合酶细胞毒性
- 蓖麻毒素的提取及其抗肿瘤作用研究被引量：15
- 2005年
- 目的:研究蓖麻毒素的提取方法和对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:根据Nicolson和Blaustein的方法稍加改良,通过PBS提取、硫酸铵分段盐析、Sephrose4B亲和层析和SephadexG100凝胶过滤等步骤,从去壳蓖麻籽中提取天然蓖麻毒素;采用细胞培养,以MTT法分析不同浓度蓖麻毒素对肿瘤细胞的杀伤作用。结果:用亲和层析和凝胶过滤等步骤提纯的蓖麻毒素,分子量为63kD,由2个亚基组成。细胞毒性分析:蓖麻毒素在高浓度下(5×10-8mol/L～5×10-10mol/L)对正常细胞和结肠癌细胞的杀伤效率无差异(P>0.05),而在低浓度下(5×10-11mol/L～5×10-13mol/L)两者有显著性差异(P<0.01);各种浓度蓖麻毒素对白血病细胞K562和大肠癌细胞SW480的杀伤作用无统计学上的差别(P>0.05)。结论:蓖麻毒素在低浓度下对肿瘤细胞的杀伤有选择性,对白血病细胞K562和大肠癌细胞SW480的杀伤作用在各种浓度下无选择性。
- 邹立波詹金彪
- 核糖体失活蛋白在细胞内的转运途径被引量：3
- 2005年
- 核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingproteins,RIPs是)一类抑制蛋白质生物合成的毒蛋白,现已成为研究细胞生物学的重要工具并在临床抗肿瘤和抗病毒治疗上得到了广泛应用。现结合国内外近几年的研究进展就核糖体失活蛋白在细胞内的转运途径作一综述。
- 王峰詹金彪
- 关键词：核糖体失活蛋白逆向转运转位
- 天然蛋白毒素的研究和临床应用展望被引量：2
- 2005年
- 天然蛋白毒素根据其来源可分为植物、细菌和真菌蛋白毒素等家族。其中,植物蛋白毒素包括有双链结构的毒素和单链核糖体失活蛋白,一般具有N-糖苷酶的活性,可催化核糖体28SRNA的保守位点脱嘌呤,从而失活核糖体60S亚基。细菌蛋白毒素具有结构的多样性,可以失活延长因子2(EF-2)或激活G蛋白,引起细胞功能障碍。毒素一般通过受体介导的内吞作用进入细胞,逆分泌途径进行运输和转位。天然蛋白毒素具有抗肿瘤和抗病毒作用,有良好的临床应用前景。
- 詹金彪郑树
- 关键词：毒素类蛋白类
- 蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定被引量：3
- 2005年
- 目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性。结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性。结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究。
- 陈欣虹刘琼詹金彪
- 关键词：蓖麻蛋白蓖麻毒素A链发光蛋白质类
- 丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-a基因的克隆和表达被引量：4
- 2005年
- 目的:从丝瓜籽中克隆HIV整合酶抑制剂luffin-a基因,并构建其表达载体。方法:根据报道的cDNA序列,用RT-PCR的方法从未成熟的丝瓜籽中克隆luffin-a基因,T-A克隆后鉴定核苷酸序列。构建表达载体pET-44a(+)-luffin-a,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达。用透析法对包含体复性;SDS-PAGE鉴定luffin-a表达产物,用MTT法分析其生物学活性。结果:克隆的luffin-a基因与国外报道的核苷酸序列同源性为99.73%,其所编码的氨基酸序列完全一致。经SDS-PAGE分析:luffin-a主要存在于包含体中。MTT法测定:复性后蛋白具有与蓖麻毒素A链相似的细胞毒性。结论:本研究成功地构建了luffin-a的表达系统,所表达蛋白经复性后具有生物学活性。
- 徐小蓉詹金彪夏铮
- 关键词：细胞毒性HIV整合酶聚合酶链反应
- 溶酶体参与蓖麻毒素A链降解途径的研究被引量：1
- 2005年
- 目的:研究溶酶体在蓖麻毒素A链(RTA)细胞内转运过程中的作用。方法:用DNA重组技术,将溶酶体的靶向信号肽KFERQ连接在RTA的羧基端;将构建好的重组质粒pKK223.3-RTA和pKK223.3-RTA-KFERQ转化感受态大肠杆菌JM109,经IPTG诱导表达RTA和RTA-KFERQ蛋白;重组蛋白质用Blue-Sepharose6B亲和柱纯化,以MTT法分别测定纯化后的RTA与RTA-KFERQ蛋白对体外培养的HEPG2(人肝癌细胞)、Hela(人宫颈癌细胞)、A549(人肺癌细胞)3种细胞的毒性作用。结果:在大肠杆菌中成功表达了RTA和RTA-KFERQ。与RTA相比较,纯化的重组蛋白在体外有相似的蛋白质合成抑制活性,RTA-KFERQ对HEPG2、Hela和A549细胞的毒性分别减少了约49.87%、54.18%、88.68%。结论:RTA不能完全被溶酶体灭活,RTA可能存在溶酶体外的降解途径。
- 陈春詹金彪沈芬平沈建根
- 关键词：蓖麻蛋白蓖麻毒素A链溶酶体
