国家自然科学基金(31000830) 作品数:8 被引量:39 H指数:4 相关作者: 赵元晖 董士远 曾名湧 刘尊英 毛相朝 更多>> 相关机构: 中国海洋大学 中国水产科学研究院南海水产研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山东省自然科学基金 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 理学 医药卫生 轻工技术与工程 化学工程 更多>>
类蛋白反应修饰海地瓜酶解物及ACE抑制肽的制备 被引量:10 2014年 采用类蛋白反应修饰海地瓜体壁蛋白酶解物,制得修饰肽的血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性与原酶解液的活性相比显著提高;模拟消化实验结果表明,修饰肽与胃肠蛋白酶作用后可增强其降压活性;细胞毒性实验结果表明,样品浓度在低于10 mg/mL时对犬肾细胞(MDCK)无毒性,且低浓度可以促进细胞生长.采用超滤、Sephadex G-15凝胶柱层析和RP-HPLC等分离技术纯化修饰产物,得到高活性ACE抑制肽(IC50值为3.67μmol/L),序列结构为NQNFVQYTTNT.紫外光谱分析结果表明,修饰肽与ACE结合可引起吸光度变化.用SYBYL软件对抑制肽与ACE活性位点进行模拟对接,发现该抑制肽能与ACE很好地结合. 沈晴晴 曾名湧 赵元晖关键词:海地瓜 分离纯化 ACE抑制肽 米曲霉发酵鳕鱼皮制取低分子肽条件的优化及活性研究 被引量:4 2011年 将鳕鱼皮打浆后利用米曲霉进行液态发酵以制取有较高价值的低分子量多肽,从碳氮比、装液量、底物浓度、转速、碳源、表面活性剂、不同起始pH、接种量8个方面进行了单因子实验。进而采用响应面法(Response Surface Methodology,简称RSM)进一步优化影响发酵的最重要因素:碳氮比、底物浓度、接种量,得到发酵的最优条件,即发酵中碳氮比应控制在0.29,底物浓度为7.0%,接种量为4×107孢子/100 mL,此时发酵水解度可以达到36%,对发酵肽的分子量进行测定,发现分子量1 000 u以下小肽占到71.5%。同时测定了多肽产物的抗氧化能力和降血压活性,其DPPH抑制的IC50值为1.3 mg/mL,其血管紧张素转化酶抑制的IC50值为2.53 mg/mL,因此证明所得发酵肽不仅分子量低,且具有良好的抗氧化能力和降血压活性。 吴海滨 刘尊英 曾名湧 赵元晖 董士远关键词:米曲霉 鳕鱼皮 响应面 降血压 不同水产原料中抑制流感病毒神经氨酸酶活性多肽的研究 2013年 目的选用不同种类的水产原料用胰蛋白酶酶解,制备出具有抑制神经氨酸酶(NA)活性的多肽。方法选用中国毛虾、鲢鱼、鳀鱼、鳕鱼皮4种原料采用胰蛋白酶酶解,通过体外检测抑制NA活性和MDCK细胞感染H1N1病毒实验,得到能够抑制NA活性的多肽,考察了酶的种类、酶解时间、加酶量、料液比对活性的影响。结果与结论筛选出中国毛虾为原料,通过单因素实验确定酶解时间为5.5h,加酶量为2000U/g,料液比为1∶7(质量浓度)是胰蛋白酶酶解中国毛虾的最优条件。测得IC50值为1.32mg/mL。MDCK细胞感染H1N1病毒实验显示,浓度为250ug/mL的中国毛虾多肽的抑制效果较为明显。通过氨基酸分析推测多肽中高含量极性氨基酸能提高NA抑制活性。 王海涛 李英放 王伟 陈铭 苑宁 赵元晖 毛相朝关键词:中国毛虾 神经氨酸酶 氨基酸分析 自鳕鱼皮中制备流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽 被引量:2 2012年 目的自鳕鱼皮中制备流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽。方法选用9种蛋白酶对鳕鱼皮胶原蛋白进行酶解,以神经氨酸酶抑制率为指标进行比较,选择最佳水解蛋白酶,用响应面法对酶解条件进行优化。结果与结论胃蛋白酶水解产物的抑制活性最高,且呈剂量依赖性,IC50值为8.86mg.mL-1。响应面分析确定最佳酶解条件为加酶量1600U.g-1,底物浓度22mg.mL-1,酶解时间6.8h。在此最佳条件下,胃蛋白酶水解产物IC50值为7.95mg.mL-1。抗H1N1流感病毒活性的细胞实验结果显示,10mg.mL-1的胃蛋白酶酶解物病毒抑制率可达66.6%。 苑宁 曾名湧 高风正 郭晓敏 王海涛 赵元晖 王伟关键词:鳕鱼皮 酶解 抗病毒 中国毛虾流感病毒神经氨酸酶抑制活性肽的研究 被引量:2 2013年 以中国毛虾为原料,以抑制流感病毒神经氨酸酶(NA)活性为初筛指标,通过控制酶切位点制备了具有抑制NA活性的酶解液.利用凝胶层析和高效液相色谱等技术分离纯化出高活性的抑制肽,其IC50值为96.1μmol/L.经串联质谱测定该抑制肽序列为EISYIHAEAYRRGELK,紫外光谱分析结果证明该抑制肽能与NA结合.基于反向对接,应用SYBYL软件模拟抑制肽与NA活性区域结合,确定了抑制肽与NA的结合位点.细胞毒性实验测得该抑制肽对细胞的最大无毒浓度(TC0)为1.26 mg/mL.在红细胞凝集实验中,随着抑制肽浓度增大,病毒的凝集价显著降低,证明抑制肽的抗病毒作用具有多靶点. 王海涛 王伟 陈铭 苑宁 赵元晖 毛相朝关键词:中国毛虾 神经氨酸酶 锌离子结合类蛋白反应修饰肽的稳定性研究 被引量:11 2015年 以牡蛎为原料制备锌离子结合类蛋白反应修饰肽,重点以锌保留率为指标,研究了p H,胃肠道消化酶,热处理,储存时间等因素对锌离子结合类蛋白反应修饰肽的稳定性的影响,并与锌离子结合多肽和锌离子结合谷氨酸的稳定性进行了比较。结果表明,红外光谱分析发现类蛋白反应后有新的物质生成;锌离子结合物在p H 2.0下都易于解离,在p H 9.0下都比较稳定,且锌离子结合肽类的稳定性明显强于锌离子结合谷氨酸的稳定性(P<0.05);锌离子结合物对消化酶都具有一定的抗消化性,且锌离子结合肽类的稳定性明显强于锌离子结合谷氨酸的稳定性(P<0.05);锌离子结合类蛋白反应修饰肽和锌离子结合多肽对热处理较为敏感,其稳定性明显低于锌离子结合谷氨酸的稳定性(P<0.05);随着储存时间的延长,锌离子结合物都保持较高的稳定性,锌保留率可达95.50%左右。 张娟娟 刘尊英 董士远 毛相朝 赵元晖关键词:牡蛎 类蛋白反应 稳定性 肠膜明串珠菌发酵草鱼骨酶解液工艺条件的优化 被引量:1 2015年 目的采用乳酸菌发酵的方法对鱼骨中的钙进行转化,并优化出最优发酵工艺。方法采用泡菜汤汁中分离出的肠膜明串珠菌对草鱼骨风味蛋白酶酶解液进行发酵,以发酵液游离钙含量为筛选指标,对鱼骨含量、碳源种类、碳源含量、发酵起始pH、不同无机盐种类进行单因素实验,初步确定了各因素最优水平,在鱼骨含量、碳源含量、发酵起始pH单因素结果为零水平的基础上,零水平重复实验3次,进行三因素三水平响应面实验。结果与结论响应面实验确定肠膜明串珠菌发酵草鱼骨酶解液的最优工艺条件为鱼骨含量81.25mg/mL,碳源含量7mg/mL,发酵初始pH=5.75,预测发酵液中游离钙含量为5.56mg/g鱼骨,在优化出的条件下进行验证实验,得到的游离钙含量为5.57±0.13mg/g鱼骨。 陈铭 陈胜军 陈坤 刘尊英 董士远 孙博文 毛相朝 赵元晖关键词:肠膜明串珠菌 发酵 游离钙含量 单因素 海地瓜蛋白水解物中ACE抑制肽的分离纯化及合成 被引量:13 2012年 采用Sephadex G-25凝胶柱层析、SP Sephadex C-25阳离子交换层析和反相高效液相色谱等方法对海地瓜水解产物进行分离纯化,得到了一种新的强活性ACE抑制肽,其氨基酸序列为MEGAQEAQGD,IC50值为15.9μmol/L.采用逐步缩合和片段缩合的方法对该抑制肽进行了设计合成.合成肽的纯度为99.72%,分子量与序列结构均与理论值相符.研究发现,抑制肽与胃蛋白酶和糜蛋白酶水解反应后,活性增强了3.5倍.动物实验结果表明,剂量为3μmol/kg的抑制肽对大鼠自发性高血压具有明显的降压效果. 赵元晖 李八方 马敬军 董士远 刘尊英 曾名湧关键词:海地瓜 ACE抑制肽 分离纯化