江苏省“135”重点人才基金(LJ200626)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 相关作者：吴德沛陈广华王易朱子玲常惠荣更多>>
- 相关机构：苏州大学河北医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：江苏省“135”重点人才基金卫生部科学研究基金河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠胸腺输出功能及免疫重建的研究方法被引量：1
- 2009年
- 目的建立实时定量PCR检测小鼠T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTREC)水平和T细胞受体β链可变区(TRBV)CDR3的方法,推测其中的初始T细胞的数目和克隆性,评价胸腺输出功能及免疫重建,从而为胸腺输出功能及移植后T细胞免疫提供可靠的研究方法。方法分别提取小鼠脾脏细胞基因组DNA和总RNA。PCR方法扩增DNA标本目的片段。纯化鉴定并构建含sjTREC片段的质粒标准品。建立稳定的实时定量PCR反应检测小鼠脾脏淋巴细胞sjTREC含量的方法。采用半巢式PCR扩增TRBV基因产物,采用ABI3700分析TRBV谱型。结果构建了可靠的sjTREC和TCRα质粒标准品。在实时定量PCR中建立了可靠的标准曲线。建立的定量PCR方法分析可成功用于脾细胞的sjTREC含量的检测。8周龄BALB/c小鼠脾细胞sjTREC含量为(626±115)拷贝/105个脾细胞。结论建立了可靠的定量检测小鼠T淋巴细胞中sjTREC含量的方法,建立了分析T细胞谱型的方法,为研究生理和病理条件下胸腺输出功能及T细胞免疫重建改变提供了可靠的方法。
- 陈广华吴德沛王易常惠荣朱子玲冯宇锋
- 关键词：实时定量PCR
- 恶性血液病间充质干细胞改变的研究进展被引量：2
- 2011年
- 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)因其来源广泛、多分化潜能、支持造血、免疫调节等多个特性而受到人们高度关注,在组织工程和细胞治疗等方面显示出巨大的应用潜能。骨髓微环境在许多恶性血液病的发病机制中发挥了作用,MSC作为造血微环境的重要组成部分,它与肿瘤微环境间存在着复杂的联系。最近研究发现,AML、MDS、ALL、MM等血液病部分患者的MSC存在细胞遗传学异常,病理状态下MSC的表型、分化能力、免疫调节功能也存在不同程度的改变,提示MSC在恶性血液系统疾病病理生理机制中发挥了一定作用。此外,还有实验证实,MSC参与了白血病细胞化疗耐药的过程。由于MSC支持造血和免疫调节等独特优点,近年来MSC被应用于造血干细胞移植术后支持造血及防治GVHD。本文就MSC在恶性血液系统疾病中的改变及其作为临床细胞治疗手段的研究进展作一综述。
- 田竑吴德沛陈广华
- 关键词：恶性血液病间充质干细胞细胞遗传学化疗耐药造血干细胞移植
- 小鼠脐血移植模型的建立及角质细胞生长因子增强移植后免疫重建的机制研究
- 2010年
- 目的探讨角质细胞生长因子（KGF）在小鼠异基因脐血移植（UCBT）后免疫重建中的作用及其机制。方法取孕19．5d胎鼠外周血作为脐血移植物。第1批UCBT实验中32只BALB／c小鼠随机分为4组，每组8只，分别输注PBS、1×10^6、2×10^6、3×10^6个脐血单个核细胞（MNC）。第2批UCBT实验中24只BALB／c小鼠随机分为3组，每组8只，分别输注1×10^6、2×10^6、3×10^6个脐血MNC，所有小鼠＋8d输注1×10^6个血小板支持。第3批UCBT实验中16只BALB／c小鼠随机分为2组，每组8只，KGF组小鼠TBI前注射KGF，对照组注射PBS，两组都输注2×10^6个脐血MNC，＋8d输注血小板支持。以生存期、脾脏淋巴细胞亚群、胸腺输出功能为观察指标。结果第1批UCBT实验中PBS组小鼠＋13．5d内全部死亡，输注1×10^6、2×10^6、3×10^6个MNC三组小鼠＋100d分别生存2只、3只、3只。第2批UCBT中输注1×10^6、2×10^6、3×10^6个MNC三组小鼠＋100d分别生存7只、8只、8只。第3批UCBT实验中，移植后对照组小鼠脾T细胞、NKT细胞、NK细胞和B细胞数分别为（9．57±0．74）×10^6、（0．64±0．06）×10^6、（1．43±0．10）×10^6、（19．13±1．50）×10^6个。KGF输注组分另0为（13．47±0．74）×10^6、（0．89±0．03）×10^6、（1．79±0．04）×10^6、（20．50±0．91）×10^6个。KGF输注组T细胞、NKT细胞、NK细胞较对照组高（P〈0．05）；对照组小鼠~jTREC水平为（182．2±10．7）拷贝／10^5个细胞；KGF输注组为（224．2±9．6）拷贝／10^5个细胞，KGF输注组明显高于PBS对照组（P=0．019）。结论孕19．5d胎鼠外周血富含造血干细胞，＋8d输注血小板浓缩物可建立异基因UCBT小鼠模型。KGF具有增强小鼠异基因UCBT后胸腺输出功能及促进T细胞免疫重建作用。
- 王易陈广华吴德沛黄海雯王莹徐杨马骁孙爱宁常惠荣
- 关键词：角质细胞生长因子免疫重建小鼠
- 自然杀伤细胞过继性免疫治疗研究进展被引量：6
- 2010年
- NK细胞属于固有免疫效应细胞,无需致敏即可杀伤多种肿瘤细胞。对NK细胞激活性和抑制性受体及下游信号的研究增进了对NK细胞杀伤肿瘤细胞机制的认识。近年来在NK细胞分选纯化及体外短期扩增方面取得了一定进展。NK细胞可单独或与其它治疗联合用于造血干细胞移植及非造血干细胞移植患者免疫治疗。为提高NK细胞免疫治疗疗效,本文就近年来NK细胞生物学及NK细胞治疗中需要考虑的重要方面的研究进展进行综述。
- 陈广华吴德沛
- 关键词：自然杀伤细胞过继免疫治疗异基因造血干细胞移植
- 5-氮杂胞苷对骨髓瘤细胞增殖抑制作用及对XAF1基因表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨5-氮杂胞苷处理对骨髓瘤细胞系RPMI 8226和XG-7细胞中XAF1基因表达的影响及体外抗骨髓瘤作用的机制。方法采用逆转录PCR和Western blot方法检测骨髓瘤细胞系RPMI 8226和XG-7细胞中XAF1基因和蛋白的表达。采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测XAF1基因启动子CpG岛甲基化状态。采用0～5μmol／L 5-氮杂胞苷处理骨髓瘤细胞株。采用CCK-8比色法检测5-氮杂胞苷处理对骨髓瘤细胞增殖抑制作用。采用Annexin V／7-AAD染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果XG-7细胞不表达XAF1 mRNA及蛋白，RPMI 8226细胞表达XAF1 mRNA转录本1和2。XG-7和RPMI 8226细胞XAF1基因启动子CpG岛均存在过甲基化。XG-7和RPMI 8226细胞经2．5μmol／L 5-氮杂胞苷处理72h后仅表达XAF1 mRNA转录本1并表达XAF1蛋白，并且XAF1基因启动子CpG岛甲基化程度降低。5-氮杂胞苷抗骨髓瘤作用呈时间和浓度依赖性。5-氮杂胞苷处理RPMI 8226和XG-7细胞48h的，氏值分别为2．4μmol／L和2．6μmol／L。结论骨髓瘤细胞中抑癌基因XAF1表达缺失或表达异常与XAF1基因启动子CpG岛过甲基化有关。5-氮杂胞苷处理可以诱导XAF1 mRNA及蛋白表达。5-氮杂胞苷在临床上能达到的药物浓度下具有抗骨髓瘤作用，其作用机制是诱导骨髓瘤细胞凋亡。
- 陈广华林凤茹吴德沛王易黄海雯唐晓文朱子玲冯宇锋常伟荣
- 关键词：5-氮杂胞苷甲基化遗传学
- IL-2和IL-15激活供者自然杀伤细胞在异基因造血干细胞移植应用的实验研究被引量：5
- 2008年
- 目的探讨IL-2和IL-15激活的供者自然杀伤（NK）细胞在异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）中减轻移植物抗宿主病（GVHD）发挥移植物抗白血病效应方面的作用。方法采用免疫磁珠分选小鼠脾NK细胞，采用添加IL-2和IL-15的培养基扩增NK细胞并测定NK细胞杀伤活力。C57BL／6小鼠作为供鼠，BALB／c小鼠作为受鼠，部分小鼠移植前8天静脉接种EL9611白血病细胞。异基因移植小鼠输注骨髓细胞5×10^6和脾细胞5×10^6。NK细胞治疗组输注骨髓细胞和脾细胞各5×10^6以及激活的NK细胞1×10^7，并且给予腹腔注射IL-2和IL-15。移植后观察GVHD发生、生存期、嵌合度、免疫重建。结果分选NK细胞纯度为95．7％～97．1％。培养后NK细胞杀伤活力较静息时增加3倍。单纯异基因骨髓细胞输注组小鼠未见GVHD发生，异基因骨髓及脾细胞移植对照组移植后1周起开始出现GVHD表现。实验组小鼠发生GVHD的严重程度明显低于脾细胞输注小鼠（P〈0．05）。单纯全身照射预处理小鼠生存期9．5～14．0d。白血病模型中对照组移植后100d生存率10％，其余死于白血病；实验组80％生存期超过100d，实验组生存期明显长于对照组（P〈0．01）。实验组小鼠移植后2周外周血NK细胞占4．8％，对照组外周血NK细胞占2．8％，实验组NK细胞恢复早于对照组（P〈0．05）。实验组TRBV基因重建比对照组快，而且TRBV家族基因表达数比对照组多，对照组小鼠多见单克隆及寡克隆表达。结论IL-2和IL-15在体外可以有效促进NK细胞增殖与激活。allo—HSCT时给予激活的供者NK细胞输注以及相关细胞因子处理可以促进免疫重建、减轻GVHD发生、降低白血病复发。
- 陈广华吴德沛孙爱宁杨明珍王易唐晓文常惠荣冯宇峰朱子玲
- 关键词：白细胞介素15自然杀伤细胞移植物抗宿主病
