中央高校基本科研业务费专项资金(11610407)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：罗羽宏张嫚嫚张良鹏周鸿科王旷靖更多>>
- 相关机构：暨南大学附属第一医院更多>>
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- 乙型肝炎病毒X蛋白通过降低P4启动子甲基化水平上调人IGF-Ⅱ基因的转录被引量：2
- 2012年
- 目的:构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝癌细胞株HepG2-HBx,探讨HBx对胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P4启动子甲基化水平及转录表达的影响。方法:应用基因重组技术,构建含HBx基因的重组逆转录病毒载体pBABE-puro-HBx,采用磷酸钙共沉淀法将其转染293FT包装细胞产生逆转录病毒,感染HepG2肝癌细胞,采用嘌呤霉素进行阳性克隆筛选,Western blotting鉴定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx。采用亚硫酸氢盐测序法及实时荧光定量RT-PCR检测HepG2-HBx细胞中P4启动子甲基化水平及P4mRNA表达水平变化。进一步将体外甲基化的人IGF-Ⅱ基因P4启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P4及含HBx基因的pCMV-tag2B-X质粒共转染HepG2肝癌细胞,采用亚硫酸氢盐测序法及双萤光素酶实验检测pGL3-P4载体上P4启动子甲基化水平及转录调控活性变化。结果:(1)经Western blotting鉴定,成功构建了稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx;(2)表达HBx蛋白的HepG2-HBx细胞中P4启动子甲基化CpG位点的比例(9.0%)明显低于对照细胞HepG2-control(25.0%)(P<0.01),而其P4 mRNA表达水平则为对照细胞HepG2-control的2.8倍;(3)共转染pCMV-tag2B-X质粒的HepG2细胞中pGL3-P4载体上P4启动子甲基化CpG位点的比例(60.8%)明显低于共转染对照质粒pCMV-tag2B的HepG2细胞(84.1%)(P<0.01),而前者P4启动子相对萤光素酶活性(14.12±0.89)则明显高于后者(4.61±0.76)(P<0.01)。结论:HBx蛋白可降低IGF-Ⅱ基因P4启动子甲基化水平,进而上调其转录表达。
- 汤绍辉张良鹏吴小娟张嫚嫚王旷靖周鸿科罗羽宏曹明溶
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白DNA甲基化
