教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0906)
- 作品数：56 被引量：341H指数：11
- 相关作者：汪铭书程安春陈孝跃郭宇飞朱德康更多>>
- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室河南科技大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”四川省重点科学建设项目国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 基因枪轰击注射鸭α-干扰素基因疫苗对免疫鸭抗鸭瘟强毒感染的影响
- 2007年
- 将鸭α-干扰素基因疫苗pcDNA-SDIFN-α分别按每只1、3和6μg剂量采用基因枪轰击方式免疫樱桃谷鸭,以PBS、空载体质粒pcDNA 3.1(+)和鸭瘟弱毒疫苗为对照,注射后第15 d给每只鸭人工感染鸭瘟强毒。结果显示,1μg pcDNA-SDIFN-α免疫鸭有3/12死亡,PBS和空载体注射鸭分别有5/12和4/12死亡;3μg和6μg pcDNA-SDIFN-α免疫鸭以及鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭100%受到保护。3个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量显著低于PBS和空载体对照组,而3个pcDNA-SDIFN-α免疫组之间差异不显著。表明,基因枪轰击pcDNA-SDIFN-α免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用。
- 周雪程安春汪铭书杨梅段坤卢菲程志萍刘闯陈孝跃陈斌
- 关键词：基因枪鸭瘟病毒
- 鸭α干扰素基因疫苗对DVH弱毒苗免疫鸭的细胞免疫调节作用研究
- 将鸭α干扰素(IFN-α)基因疫苗(pcDNA-DuIFN-α)以50、100、200μg三个剂量分别肌注免疫28日龄樱桃谷鸭,15天后免疫鸭病毒性肝炎(DVH)弱毒疫苗;同时设空载体+DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱...
- 刘闯程安春汪铭书陈斌程志萍段坤杨梅周雪陈孝跃
- 关键词：细胞免疫调节
- 文献传递
- 沙门菌质粒的研究进展被引量：1
- 2008年
- 曹平汪铭书程安春邓树轩
- 关键词：沙门菌质粒DNA分子人畜共患病血清型
- 鸭源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛pilA基因的原核表达及重组蛋白对强毒攻击的免疫保护作用被引量：9
- 2007年
- 根据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列,用OLIGO6.0设计PCR引物,从鸭源致病性大肠杆菌GH1.2中扩增到pilA基因并将其克隆至pMD18-T载体,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后,将鸭源致病性大肠杆菌pilA基因正向插入原核表达载体pET-32a(+)的BamHⅠ和HindⅢ位点间,成功构建了重组表达质粒pET-32a-pilA。重组表达质粒pET-32a-pilA转化表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导,表达出了大小约为36kD的pilA重组蛋白。表达产物用镍柱亲和层析纯化,与等量弗氏佐剂混合制备pilA重组蛋白疫苗,分别在1日龄、8日龄时两次对雏鸭进行免疫,二免后2周测定鸭血清中的ELISA抗体效价,并以109PFU同源菌株GH1.2攻毒,根据攻毒后鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变等级来判定pilA重组蛋白的免疫保护效果。结果pilA重组蛋白免疫鸭的血清中ELISA抗体效价为1∶12800,全菌灭活苗免疫组的血清ELISA抗体效价为1∶200;同源菌株攻毒后,pilA重组蛋白免疫保护组鸭的死亡率、E.coli分离率和各组织器官的病变程度均比攻毒对照组下降且差异显著或极显著,与全菌灭活苗免组比较差异不显著。表明pilA重组蛋白对同源菌株GH1.2的感染具有一定的保护效果。
- 程安春于小娜汪铭书朱德康李玲孙磊陈孝跃
- 关键词：PILA基因原核表达
- 鸭病毒性肠炎病毒致鸭胚成纤维细胞发生凋亡作用的研究被引量：1
- 2007年
- 研究通过HE染色镜检发现,鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)可致鸭胚成纤维细胞(DEF)出现染色质颗粒化、细胞核变形等显著凋亡特征;TUNEL试验显示,接毒组细胞核内有多量棕黄色DAB显色颗粒,表明细胞出现了凋亡现象;DNALadder检测表明,接毒组细胞具有分子量分别为180～200bp及其整数倍的凋亡梯带电泳图谱特征;电镜观察发现,接毒组细胞具有染色质浓缩、边移,胞浆严重空泡化,细胞核严重变形,形成凋亡小体等典型凋亡特征。上述研究结果表明鸭病毒性肠炎病毒具有显著的致鸭胚成纤维细胞发生凋亡的作用。
- 郭宇飞程安春汪铭书贾仁勇文明周伟光陈孝跃
- 关键词：鸭病毒性肠炎病毒鸭胚成纤维细胞细胞凋亡
- TUNEL法检测PRRSV感染Marc-145细胞凋亡的研究被引量：4
- 2007年
- 为了研究PRRSV诱导Marc-145细胞凋亡的动态变化规律,收集PRRSV-SC1株感染Marc-145细胞后0h、24h、48h、72h、96h、120h、144h和相同时间点未接种病毒的细胞样品,采用TUNEL法进行细胞凋亡的检测。结果表明,PRRSV能诱导Marc-145细胞发生凋亡;在PRRSV感染后24h开始出现凋亡,48h凋亡更加明显,72h达到高峰,随后细胞凋亡水平又有所下降,在感染后144h,细胞的凋亡水平低于正常组。
- 汪铭书程安春刘伍梅刘芳李雪梅张平英周毅陈孝跃
- 关键词：细胞凋亡TUNEL法
- 鸭源致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛pilA基因序列测定及生物信息学分析被引量：4
- 2006年
- 据GenBank中人源大肠杆菌pilA基因序列，由Oligo 6．0设计一对引物，以提取的鸭源致病性大肠杆菌基因组为模板，进行PCR扩增，获得了5株鸭源致病性大肠杆菌的pilA基因，序列测定和生物信息学分析表明：鸭源致病性大肠杆菌pilA基因核苷酸序列长度为549bp，编码182aa，与人源、鸡源及猪源大肠杆菌pilA基因之间核苷酸同源性为87．3％～100．0％，氨基酸同源性为87．5％～100．0％。对不同宿主来源大肠杆菌pilA基因所编码蛋白的二级结构、亲水性、抗原性、抗原表位进行预测分析比较，结果显示Ⅰ型菌毛间具有一定的结构相似性，并存在一定的共同抗原位点；系统进化分析表明，各菌株之间的pilA基因遗传相关性与其宿主来源及血清型之间没有严格的相关性。
- 于小娜汪铭书程安春李玲段泽钟传德陈孝跃
- 关键词：大肠杆菌PILA基因PCR
- 16SrDNA实时荧光定量PCR检测DPV强毒感染鸭气管及消化道大肠杆菌动力学被引量：4
- 2006年
- 参照Genebank大肠埃希氏菌属(E.coli)16SrDNA保守基因序列设计并合成定量PCR引物及针对大肠杆菌属的Taqman探针,以E.coli标准菌株的PCR扩增产物作为阳性模板制作标准曲线,建立检测E.coli的定量PCR方法。该法Mg2+最佳工作浓度5 mmol/L,能够定量和特异检测E.coli而对肠道优势菌群的代表种葡萄球菌、双歧杆菌呈阴性。检测E.coli的灵敏度可达3个/mL。利用该法对DPV强毒感染鸭急性病例的气管和消化道E.coli检测,结果表明:气管E.coli数量普遍低于对照。食道波动巨大,普遍高于对照;十二指肠、空肠变化不明显;回肠波动巨大,总体高于对照;盲肠显著低于对照;直肠与对照差异不显著。DPV感染致死鸭的气管E.coli数量显著低于对照;食道和十二指肠极显著高于对照;空肠、回肠和盲肠均略高于对照;直肠略低于对照。
- 胡骑程安春汪铭书刘艳丽葛忠源黄永成张素辉杨晓燕齐雪峰陈孝跃
- 关键词：气管消化道大肠杆菌
- 致羔羊脑炎粪肠球菌分离鉴定及毒力因子基因的PCR检测被引量：21
- 2008年
- 从新疆部分地区羊场近年来发生的以脑炎为主要临床特征的病死羔羊体内分离出2株细菌,经鉴定为粪肠球菌。经链球菌A-G乳胶分型诊断液检测后确定为D群链球菌。该菌对小鼠和羔羊有较强的致病性,人工感染可引起小鼠的死亡,感染羔羊能够复制出与自然感染相同的临床症状和病理变化,并从感染发病和死亡羊的脑、心血、肝脏中再分离到相同细菌,分离菌对万古霉素、氟苯尼考、头孢噻肟钠、诺氟沙星和恩诺沙星敏感,根据GenBank中粪肠球菌主要毒力因子的基因序列设计引物进行PCR检测,结果显示,1株细菌明胶酶(GelE)、聚合物质(Asa1)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(Ace)、新的表面蛋白1(EF3314)等毒力因子基因阳性;另1株细菌溶血素激活因子(CylA)、表面蛋白(esp)、聚合物质(Asa1)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(Ace)、2种新的表面蛋白1和2(EF0591和EF3314)等毒力因子基因为阳性。
- 周霞程安春汪铭书剡根强马勋韩素娟
- 关键词：羔羊粪肠球菌PCR
- 基因枪轰击和肌肉注射不同剂量PRRSV ORF5基因疫苗诱导仔猪细胞免疫的比较研究
- 目的:研究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF5)经基因枪和肌肉注射免疫对诱导仔猪产生细胞免疫应答的影响。方法:用pcDNA-PRRSV-ORF5经基因枪和肌注分别免疫两组仔...
- 希尼尼根程安春汪铭书陈希文豆文波李雪梅刘伍梅张平英刘菲陈孝跃
- 关键词：PRRS
- 文献传递
