福建省科技重大专项(2002Y003)
- 作品数：7 被引量：26H指数：4
- 相关作者：林建银万榕林旭宋军郑海音更多>>
- 相关机构：福建医科大学莆田学院更多>>
- 发文基金：福建省科技重大专项国家自然科学基金福建省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛇毒cystatin基因转染抗人胃腺癌细胞体外侵袭作用的研究被引量：9
- 2005年
- 目的:探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对人胃腺癌细胞SGC7901侵袭转移的抑制作用。方法:采用人工拼接方法合成蛇毒cystatincDNA,构建pcDNA3.1/sv-cystatin真核表达质粒,经脂质体转染将pcDNA3.1/sv-cystatin质粒和pcDNA3.1质粒分别导入胃腺癌细胞系SGC7901;利用RT-PCR和Westernblot检测SGC7901细胞中sv-cystatin基因的表达;应用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验及重建基底膜侵袭实验分析sv-cystatin表达对SGC7901细胞粘附、运动和侵袭能力的影响。结果:转染sv-cystatin基因后,SGC/sv-cystatin细胞克隆中可检测到sv-cystatin的明显表达,SGC/sv-cystatin细胞的运动能力和体外穿越重建基底膜的能力明显低于转染空载体细胞和未转染的SGC7901细胞,但其体外粘附能力未见明显变化。结论:sv-cystatin基因的表达可使胃癌SGC7901细胞体外运动能力及侵袭能力明显减弱,提示sv-cystatin具有抑制胃癌细胞侵袭转移的作用。
- 万榕郑海音宋军林旭林建银
- 关键词：胃肿瘤转染
- 蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法采用ELISA方法检测不同浓度sv-cystatin重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α分泌的影响;实时定量PCR和Western blot法分别分析不同浓度sv-cystatin重组蛋白体外处理人肝癌MHCC97H细胞后TGF-β2、TNF-α的mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,5种浓度的sv-cystatin重组蛋白对MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α的分泌具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);25、50、100、200 mg·L-14种浓度的重组蛋白能够抑制TGF-β2的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);而50、100、200 mg·L-13种浓度的重组蛋白能够抑制TNF-α的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 sv-cystatin重组蛋白可能通过抑制TGF-β2和TNF-α的表达来发挥多方面的抗肿瘤作用。
- 谢群林扬元唐南洪林建银
- 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂肝癌MHCC97H转化生长因子Β2
- 蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂的表达对黑色素瘤B16细胞侵袭与转移的作用被引量：4
- 2006年
- 目的探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin(sv-cystatin)在黑色素瘤细胞侵袭与转移中的作用。方法构建真核表达质粒pcDNA3.1/sv-cystatin,采用脂质体法将重组质粒导入小鼠黑色素瘤B16F1细胞,G418筛选抗性克隆,Western blotting法和RT-PCR鉴定sv-cystatin在黑色素瘤细胞中的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测肿瘤细胞体外生长和黏附能力的变化,体外侵袭、运动实验和小鼠实验性肺转移模型分析sv-cystatin表达对黑色素瘤细胞体内、外侵袭力的影响。结果sv-cystatin基因稳定转染后B16F1细胞体外侵袭与运动能力明显降低,其穿膜的细胞数显著低于B16F1/pcDNA3.1空载体组和未转染细胞组(P<0.01);sv-cystatin的表达可抑制C57BL/6小鼠肺转移瘤灶的形成;其体外增殖及黏附能力未见明显改变。结论sv-cystatin基因转染可抑制黑色素瘤B16细胞的体内、外侵袭与转移能力。
- 万榕郑海音宋军翁绳美林旭林建银
- 关键词：肿瘤侵袭肿瘤转移WESTERNBLOTTING黑色素瘤
- 蛇毒cystatin基因合成及其在大肠杆菌的表达被引量：7
- 2004年
- 目的 研究蛇毒 cystatin基因的合成并在大肠杆菌系统内表达。 方法 根据中华眼镜蛇毒 cystatin蛋白的氨基酸序列合成 cystatin基因的 4个片段 ,通过缓慢退火 PCR方法将其拼接为完整的 cystatin基因 ,经Bam H 及 Sac 双酶切后定向克隆到原核表达载体 p ET- 4 2 a(+)中 ,PCR及测序鉴定 ,转化宿主菌 BL 2 1 (DE3) ,异丙基硫代 -β- D半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,SDS- PAGE凝胶电泳分析表达产物 ,GST· Mag琼脂糖树脂纯化融合蛋白 ,Western- blot鉴定。 结果 成功合成蛇毒 cystatin基因 ,并构建原核表达质粒 p ET- 4 2 a(+) /GST- cystatin,在大肠杆菌 BL 2 1 (DE3)中表达融合蛋白 GST- cystatin,SDS- PAGE凝胶浓度扫描显示表达量占菌体总蛋白的 30 % ,Western- blot证实纯化蛋白为重组 cystatin蛋白。 结论 合成蛇毒 cystatin基因并在大肠杆菌中表达 。
- 宋军万榕翁绳美林旭林建银
- 关键词：蛇毒液类西司他汀类基因克隆分子
- 血管生长素在胃癌血管生成中的作用被引量：1
- 2005年
- 背景与目的:血管生长素(angiogenin,ANG)是一种有效的促血管生成素,资料显示结肠癌、胰腺癌等肿瘤ANG表达增强,但ANG在肿瘤性血管生成中的作用尚不清楚。本研究探讨ANG在胃癌血管生成中的作用。方法:运用免疫组化方法检测68例胃癌组织中ANG、CD34和Ki-67的表达,根据CD34的染色情况计算出胃癌组织的微血管密度(microvesseldensity,MVD),根据Ki-67的染色情况计算出肿瘤细胞Ki-67标记指数。结果:在胃癌组织中,19例ANG强阳性组织中MVD(308.4±25.6)明显高于3例ANG阴性组(196.0±31.3)(P<0.01)。ANG蛋白阳性组的Ki-67标记指数(579.6±31.4)明显高于ANG蛋白阴性组(341.3±84.0)(P<0.01)。结论:癌组织ANG蛋白表达水平与MVD呈正相关,癌组织ANG表达水平与胃癌细胞标记指数正相关。
- 陈瑜张声陈余鹏林建银
- 关键词：胃肿瘤血管生长素血管生成
- 蛇毒cystatin的表达对黑色素瘤B16细胞侵袭与转移的作用
- 目的探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin（snake venom cystatin,sv-cystatin） 在黑色素瘤细胞侵袭与转移中的作用。方法构建真核表达质粒pcDNA3．1／sv-cystatin,采用脂...
- 万榕郑海音翁绳美宋军林旭林建银
- 关键词：黑色素瘤肿瘤侵袭肿瘤转移
- 文献传递
- 蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂的酵母表达及其对B16细胞体外侵袭的抑制作用被引量：4
- 2007年
- 目的:建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin,转化酵母细胞生产重组蛋白,探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对肿瘤侵袭的生物学作用。方法:利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-cystatin电激转化Pichia pastori酵母细胞GS115,经1%甲醇诱导获得稳定表达的重组蛋白,改良Boyden小室分析重组sv-cystatin蛋白处理对B16F1细胞体外侵袭力的影响。结果:SDS-PAGE检测和Western blot分析显示分泌表达的sv-cystatin重组蛋白相对分子量约为14kDa,摇瓶发酵每升发酵培养上清可获得16mg的重组蛋白,经亲和层析纯化获得的sv-cystatin重组蛋白具有抑制木瓜蛋白酶的活性。改良Boyden小室实验结果显示:经0.5mg/ml浓度的重组蛋白处理的B16F1细胞穿过Matrigel的细胞数明显低于对照组(52.60±4.58,106±5.9,P<0.01),抑制率为50%。结论:成功实现sv-cystatin的酵母表达,初步证明sv-cystatin重组蛋白可抑制小鼠B16F1细胞体外侵袭作用。
- 万榕宋军郑海音张晓艳林旭林建银
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- 蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16F1细胞基因表达谱的影响被引量：8
- 2008年
- 背景与目的:本实验室已证明蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)具有抗肿瘤侵袭转移作用,为了进一步阐明其分子机制,本研究利用高通量的基因芯片技术探讨sv-cystatin基因转染对小鼠黑色素瘤细胞(B16F1)基因表达谱的影响。方法:分别将pcDNA3.1/sv-cystatin及空载体pcDNA3.1转染B16F1细胞,建立稳定转染的B16F1/sv-cystatin及B16F1/pcDNA3.1细胞株,提取总mRNA,应用高通量的基因芯片技术检测差异表达基因,半定量RT-PCR法分别验证5个上调和5个下调的差异表达基因。结果:B16F1细胞经转染sv-cystatin后,共检测了1218个基因,其中有45个差异表达基因,21个基因表达上调(Ratio>3),24个基因表达下调(Ratio<0.5),这些基因的功能涉及细胞粘附迁移、细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等方面。10个差异表达基因的RT-PCR验证结果与基因芯片分析结果相符。结论:Sv-cystatin不仅具有抑制细胞外基质的作用,而且还具有细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等多种生物学功能。
- 谢群万榕林旭林建银
- 关键词：基因表达谱黑色素瘤小鼠
