国家自然科学基金(81170860)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 色素上皮衍生因子对高糖环境下视网膜Muller细胞钾离子通道Kir4．1的调控被引量：2
- 2012年
- 目的探讨高糖环境下视网膜Mailer细胞钾离子通道Kir4．1的表达改变及色素上皮衍生因子（PEDF）对Kir4．1的调控及可能机制。方法培养的大鼠Mailer细胞随机分为对照组、高糖组、PEDF干预组和干预对照组。其中，对照组使用5mmol／L葡萄糖的培养液，高糖组使用25mmol／L葡萄糖的培养液，PEDF干预组在25mmol／L葡萄糖的培养液中加入100ng／mlPEDF，干预对照组在25mmol／L葡萄糖的培养液中只加入相同容积的磷酸缓冲盐溶液。通过蛋白免疫印迹法和实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组Maller细胞Kir4．1表达的改变，同时采用二氯二氢荧光素二已酯荧光法检测各组细胞中氧自由基（ROS）生成；实时荧光RT—PCR法检测脂质过氧化物酶（GPx）的表达变化。结果蛋白免疫印迹法和实时荧光RT—PCR法检测结果提示，高糖可以降低视网膜Maller细胞Kir4．1的表达（蛋白免疫印迹法：t=3．53，P〈0．05；实时荧光RT—PCR法：t=4．12，P〈O．05），同时引起ROS生成增多（t=3．76，P〈0．05）以及GPx表达下降（t=3．18，P〈0．05）。PEDF处理后，高糖状态下视网膜Maller细胞的Kir4．1表达显著上升（蛋白免疫印迹法：t=6．43，P〈0．01；实时荧光RT—PCR法：t=3．66，P〈0．05），同时使ROS浓度下降及GPx表达升高（t=4．11，P〈0．05；t=5．12，P〈0．01）。结论高糖可以通过诱发氧化应激从而使Mailer细胞Kir4．1的表达下调，PEDF能改善由高糖诱发的这一变化。
- 沈玺王亚娜
- 关键词：MULLER细胞
- 高糖环境对人脐静脉血管内皮细胞凋亡及Caspase-3表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨高糖环境对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响,及其与Caspase-3表达的相关性。方法将培养成功的HUVEC以不同浓度的葡萄糖培养48 h,TUNEL法观察细胞凋亡情况;流式细胞仪(Annexin V-FITC及PI双荧光)检测细胞存活、凋亡和坏死情况;Western blotting法观察细胞中活性Caspase-3的表达。结果光学显微镜观察高糖组(33 mmol/L)内凋亡细胞明显多于正常糖浓度组(5.5 mmol/L);随机选择3个视野,高糖组TUNEL阳性的细胞数多于正常糖浓度组。流式细胞仪结果显示:正常糖浓度组细胞凋亡率为(4.10±2.16)%,细胞坏死率为(0.47±0.05)%,存活细胞率为(94.44±2.13)%;高糖组细胞凋亡率为(16.13±1.51)%,细胞坏死率为(1.09±0.27)%,存活细胞率为(81.99±1.13)%,凋亡细胞百分率与正常糖浓度组相比差异有统计学意义(P<0.05);Western blotting法显示正常糖浓度组Caspase-3/β-actin为0.062±0.005,高糖组Caspase-3/β-actin为0.125±0.05,差异有统计学意义(P<0.05),高糖组活性Caspase-3表达量增强。结论高糖环境培养下的HUVEC凋亡增加,可能与活性Caspase-3表达增强有关。
- 孙劼沈玺谢冰钟一声陆琼孙悦
- 关键词：高糖人脐静脉血管内皮细胞凋亡
- 色素上皮衍生因子对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用被引量：1
- 2014年
- 目的 观察色素上皮衍生因子（PEDF）对氧诱导视网膜新生血管（OIR）的抑制作用,初步探讨PEDF抑制新生血管形成的可能机制.方法 7日龄C57BL/6J新生小鼠140只,随机数字表法分为正常对照组、OIR模型组、PEDF治疗组、磷酸盐缓冲液（PBS）干预对照组.除正常对照组外,其余各组小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为（75±2）％的氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立OIR模型;正常对照组小鼠始终置于正常氧环境饲养;OIR模型组小鼠出氧箱后不作任何处理.12、14日龄时,PEDF治疗组小鼠玻璃体注射分别注射2 μg/A的PEDF 1 μl;PBS干预对照组小鼠玻璃体腔注射等量PBS.视网膜铺片、冰冻切片荧光染色观察视网膜新生血管生长情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）观察小鼠视网膜白细胞介素（IL）-1β蛋白表达量;实时逆转录-聚合酶链反应（RT-PCT）检测小鼠视网膜IL-1β mRNA相对表达量.结果 视网膜铺片检查结果显示,OIR模型组视网膜新生血管面积较正常对照组明显增大,差异有统计学意义（t=15.02,P＜0.01）;PEDF治疗组视网膜新生血管面积较PBS干预对照组明显减小,差异有统计学意义（t=5.96,P＜0.01）.荧光显微镜观察结果显示,OIR模型组视网膜可见外丛状层（OPL）与神经节细胞层（GCL）之间的新生血管簇较正常对照组明显增多;PEDF治疗组视网膜OPL与GCL之间的新生血管簇较PBS干预对照组明显减少.Western blot检测结果显示,OIR模型组视网膜IL-1β蛋白表达水平较正常对照组显著提高,差异均有统计学意义（t=3.35,P＜0.05）.PEDF治疗组与PBS干预对照组比较,IL-1β蛋白表达水平下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.正常对照组与PEDF治疗组比较,IL-1β蛋白表达水平无显著差异（F=11.764,P＞0.05）.实时RT-PCR检测结果显示,OIR模型组视网膜IL-1βmRNA相对表达量较正常对照组明显增加,差异有统计学意义（t=4.43,P�
- 王亚娜高莎沈玺
- 关键词：视网膜新生血管化白细胞介素1Β动物实验
- 色素上皮衍生因子对氧诱导视网膜神经节细胞凋亡及Bcl-2表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)对氧诱导缺血性视网膜病变(oxygen-induced ischemic retinopathy,OIR)小鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡的抑制作用及其可能的机制。方法选择7 d龄C57BL/6J小鼠140只,随机分为正常对照组、OIR模型组、PBS治疗对照组和PEDF药物治疗组。选择右眼为实验眼,将除正常对照组外的所有小鼠建立OIR模型。PEDF药物治疗组分别于小鼠12 d龄和14 d龄给予两次玻璃体内注射PEDF(2μg·μL-1)各1μL,PBS治疗对照组玻璃体内注射等量的PBS(10 mmol·L-1,pH 7.4)。于17 d龄处死小鼠,各组随机抽取5只,摘除右眼球,采用TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况以及免疫荧光染色法检测Bcl-2蛋白在小鼠视网膜中的表达情况;其余小鼠过量麻醉处死后取出视网膜,采用Western blot检测Bcl-2蛋白以及Real-time RT-PCR检测bcl-2 mRNA的表达。结果视网膜细胞的凋亡主要在RGC层,OIR模型组小鼠RGC层细胞凋亡率为(55.044±14.538)%,明显高于正常对照组的(3.317±1.657)%,差异有统计学意义(P<0.01);PBS治疗对照组细胞凋亡率为(55.852±4.490)%,明显高于PEDF药物治疗组的(5.897±2.079)%,差异有统计学意义(P<0.01);正常对照组与PEDF药物治疗组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光显示,OIR模型组与PBS治疗对照组Bcl-2蛋白阳性染色较正常对照组明显减少,PEDF药物治疗组阳性染色较PBS治疗对照组增多。Western blot以及RT-PCR结果显示,OIR模型组Bcl-2蛋白和mRNA的表达量显著下降,分别为0.386 9±0.071 3和0.694 2±0.235 2,与正常对照组的0.778 7±0.097 4和1.000 0比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PEDF药物治疗组Bcl-2蛋白和mRNA的表达量分别为0.610 1±0.109 5和0.818 3±0.308 0,与PBS治疗对照组的0.284 8±0.153 6和0.481 0±0.100 8比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PEDF药物治疗组Bcl-2蛋白和mRNA的表达量较正常对照�
- 王亚娜高莎沈玺
- 关键词：色素上皮衍生因子视网膜神经节细胞细胞凋亡
- IL-10及Flt3促眼新生血管形成的机制研究
- 第一部分：IL-10调节巨噬细胞及促眼新生血管形成的机制研究 目的： 白细胞介素10(Interieukin-10，IL-10)也曾称为细胞因子合成抑制因子，是一种重要的免疫调节性细胞因子，本研究旨在探讨IL-10与...
- 高誉硕
- 关键词：视网膜病变白细胞介素10缺氧诱导因子-1Α动物模型
- 文献传递
