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生防菌Pseudomonas fluorescens 2P24对甜瓜根围土壤微生物的影响被引量：32: 2010年; 【目的】探讨生防假单胞菌2P24对根围土壤微生物的影响,为生防菌的安全应用提供基础。【方法】利用平板培养计数与末端标记限制性片段长度多态性分析(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)相结合的方法研究施用生防假单胞菌2P24后不同生育期甜瓜根围土壤微生物多样性的变化。【结果】在甜瓜定植后,生防菌2P24对土壤中细菌和真菌均有较强的抑制作用,对放线菌却具有促进作用。在收获期,2P24对土壤中细菌和放线菌的影响逐渐减弱,而对真菌表现了一定的促进作用。获得了41个细菌菌群的TRF片段,其中,2P24对优势菌群TRF213、TRF240、TRF513无明显影响,而对TRF61、TRF348、TRF365等菌群影响显著,土壤微生物Shannon-Wiener多样性指数有所提高。【结论】将传统培养法和T-RFLP分析技术相结合,是分析土壤微生物种群变化较为理想的方法。生防菌2P24对甜瓜根围土壤微生物的生态系统影响不显著。; 朱伟杰王楠郁雪平王伟; 关键词：T-RFLP

生防菌哈茨木霉Trichoderma harzianum T4对西瓜根围土壤细菌群落的影响被引量：6: 2013年; 采用平板培养、末端限制性片段长度多态性(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)以及变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)的方法相结合探讨生防菌哈茨木霉Trichoderma harzianum T4对大棚西瓜根围土壤细菌群落及氨氧化细菌群落的影响,为其在田间应用的生态安全性的评估提供支撑。末端限制性片段长度多态性以及变性梯度凝胶电泳的结果均表明哈茨木霉T4施入田间约四周内对根围土壤细菌群落产生明显的影响,随后这种扰动现象逐渐减小。对DGGE中受影响条带的测序结果表明,生防菌T4促进了假单胞菌Pseudomonas,芽孢杆菌Bacillus,苍白杆菌Ochrobactrum以及中慢生根瘤菌Mesorhizobium等细菌类群的生长,对短杆菌Brevibacterium,克雷白氏肺炎杆菌Klebsiella pneumoniae,根瘤菌Rhizobium sp等表现出抑制作用。生防菌T4对根围土壤中氨氧化细菌群落并没有产生明显的影响。可见,生防菌木霉T4引入初期对根围土壤中细菌群落产生明显的扰动,但这种干扰是短暂的,并没有对根围土壤细菌群落形成持续的影响。; 夏飞张于旭热王伟; 关键词：生防菌 T-RFLP 土壤细菌群落生态安全性

生防荧光假单胞菌CPF-10对西瓜根围土壤真菌群落的影响被引量：2: 2013年; 探讨了生防菌荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens CPF-10对西瓜根围土壤真菌群落结构的影响。采用传统分离培养法,结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析,研究了施用CPF-10后不同生育期西瓜根围土壤真菌群落结构的变化。结果表明:施入生防菌CPF-10后2周,其对土壤真菌有一定的促进作用;第3～7周时,CPF-10对土壤真菌尤其是部分病原菌有较强的抑制作用;CPF-10对丛枝菌根真菌(AMF)有一定的促进作用,可维持3周左右;收获期后则检测不到CPF-10对土壤真菌群落的影响。生防菌CPF-10对西瓜根围土壤真菌群落产生的短暂影响不会对土壤生态系统构成长期威胁。对比土著真菌及丛枝菌根真菌的DGGE图谱和切胶条带测序结果,发现DGGE技术更适用于分析小范围特定菌属如丛枝菌根真菌的变化。; 陈胜菊杨洁旭热王伟; 关键词：荧光假单胞菌土壤真菌丛枝菌根真菌变性梯度凝胶电泳

三重PCR检测草莓灰霉病菌、炭疽病菌和黄萎病菌被引量：18: 2010年; 【目的】探索和优化检测条件,建立同时检测草莓灰霉病菌Botrytiscinerea,炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides和黄萎病菌Verticillium dahliae的三重PCR检测体系,为3种病害的早期快速诊断和鉴定提供技术和方法。【方法】选择可以组合的3种病原菌特异引物,研究多重PCR的影响因素,优化PCR退火温度,采用正交试验方法,以3个引物组、TaqDNA聚合酶、dNTP和Mg2+六因素三水平优化多重PCR体系。【结果】建立并验证适合上述草莓主要病原菌的三重PCR最佳检测体系,可分别扩增出729、539和450bp的特异条带,最适退火温度为50℃,25μL的反应体系中含有0.32μmol·L-1C729+/-、0.032μmol·L-1DB19/DB22、0.32μmol·L-1CgInt/ITS4、1.5UTaq聚合酶、0.15mmol·L-1dNTP、1.6mmol·L-1MgCl2。【结论】利用上述引物组合和反应体系进行三重PCR检测,能够快速从田间发病植株和土壤中将草莓灰霉病菌、草莓炭疽病菌和草莓黄萎病菌检测出来,灵敏度可以达到10pg菌丝DNA。; 王楠王剑尹丹韩高观朋王伟; 关键词：草莓灰霉病菌炭疽病菌黄萎病菌分子检测三重PCR

生防木霉菌Th2和T4对甜瓜根围土壤微生态的影响被引量：8: 2009年; 利用平板计数、微生物量碳和末端标记限制性片段长度多态性分析(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)相结合的方法研究了2株生防菌哈茨木霉Th2和T4对甜瓜根围土壤微生态的影响。结果表明,生防菌Th2和T4对根围土壤细菌有明显的促生作用,而对真菌和放线菌有明显的抑制作用。T-RFLP数据统计学分析表明,Th2和T4的引入可以增加土壤细菌的多样性。其中对开花期土壤细菌菌群影响最显著,Th2对TRF251和TRF513菌群有显著的促生作用,含量是对照的3.7倍和4.5倍,T4对TRF251和TRF513菌群含量也比对照高4倍和5.6倍,而2株生防菌对TRF60菌群均有显著的抑制作用,其含量分别为对照的51.6%和64.3%。在果熟期生防菌对土壤细菌菌群的影响减弱,表明土壤的缓冲功能发挥了作用。研究结果还表明,Th2和T4对土壤细菌菌群有着相似的促生和抑制作用,且不会破坏土壤微生态的稳定性。; 郁雪平朱伟杰高观朋王伟; 关键词：生防木霉菌土壤微生物土壤微生物量碳

黄瓜细菌性萎蔫病菌分子诊断研究被引量：1: 2013年; 从田间黄瓜细菌性萎蔫病植株分离获得病原菌,比对其近源种的16S rDNA序列,确定该病原菌为嗜维管束欧文氏菌(Erwinia tracheiphila),并设计出特异引物ET-P1/ET-P2.经过对该引物的PCR扩增条件优化,扩增出一条794 bp的黄瓜细菌性萎蔫病菌特异条带,检测灵敏度达100 fg/μL,可准确扩增出黄瓜发病植株和根围土壤中的DNA片段.; 王楠张改红王伟; 关键词：特异性引物分子诊断技术

三重PCR检测黄瓜炭疽病菌、菌核病菌和细菌性萎蔫病菌被引量：4: 2014年; 本试验建立一种可同时检测黄瓜炭疽病(Colletotrichum orbiculare)、黄瓜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)和黄瓜细菌性萎蔫病(Erwinia tracheiphila)等黄瓜主要病害病原菌的三重PCR检测体系。采用正交试验设计方法,对三重PCR的影响因素分析研究,进行退火温度优化,并以3个引物组、Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg2+共6因素3水平进行多重PCR体系优化,成功建立了适合黄瓜主要病害的三重PCR最佳检测体系,即25μL的反应体系中含有0.24μmol·L-1CY1/CY2;0.72μmol·L-1SSFWD/SSREV;0.336μmol·L-1ET-P1/ET-P2;1 U Taq聚合酶;0.15 mmol·L-1dNTP;1 mmol·L-1MgCl2,最适退火温度为63℃。该方法能够快速从田间黄瓜发病植株和根围土壤中将黄瓜炭疽病菌、黄瓜菌核病菌和黄瓜细菌性萎蔫病菌检测出来,灵敏度可以达到10 pg·μL-1。; 王楠王伟; 关键词：黄瓜炭疽病菌分子检测三重PCR

黄瓜黑星病菌核糖体基因ITS区段的克隆及序列分析被引量：2: 2009年; 为了探讨枝孢霉属的系统发育情况,采用真菌核糖体基因转录间隔区域(ITS)通用引物,PCR扩增3株来自不同地方的黄瓜黑星病菌核糖体基因的ITS序列,并对PCR产物进行测序和序列分析。结果表明:3株黄瓜黑星病菌之间同源性为100%,ITS全长463bp,其中ITS1长154bp,5.8S rDNA长159bp,ITS2长150bp,各碱基的个数分别为G 119个、C 118个、A 120个、T 106个,GC含量为51.2%。利用MEGA4软件中的NJ法和ME法,对3个样品序列以及GenBank中登陆的枝孢霉属其他25个种构建ITS聚类分析树状图,NJ法和ME法构建的结果基本相同,枝孢霉属可以分为5个聚类组,所测的3个样品和Cladosporium cucumerinum在一个聚类组中。; 高永洋高观朋王倩倩王伟; 关键词：黄瓜黑星病菌

生防菌哈茨木霉T4对黄瓜根围土壤细菌群落的影响被引量：21: 2012年; 【目的】评价生防菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)T4对根围土壤细菌群落的影响,为生防菌田间应用的生态安全提供依据。【方法】结合DGGE技术与T-RFLP方法,综合考察引入生防菌哈茨木霉T4后黄瓜根围土壤细菌群落变化。【结果】在引入生防菌的14—56 d内(黄瓜整个生育期),木霉对根围土壤细菌群落可产生显著影响,并持续一段的时间,随后逐渐减弱。表现为对蓝细菌、β-变形细菌、葡萄球菌、伯克霍尔德菌、沙雷氏菌、酸杆菌和一些不可培养细菌的有效抑制作用,对芽孢杆菌、土壤杆菌、芽单胞菌的明显促进作用。但到70 d时,即收获后2周,检测不到木霉对细菌群落影响。【结论】DGGE和T-RFLP序列分析技术相结合研究生防菌对土壤细菌群落的影响,既能全面描述土壤细菌群落结构变化,还可以初步定性描述变化细菌的种类信息。生防菌哈茨木霉T4的引入对土壤细菌群落产生短期影响,不会长期对土壤细菌群落稳定构成威胁。; 尹丹韩高观朋夏飞王伟; 关键词：土壤细菌群落 T-RFLP DGGE

瓜黑星病菌、枯萎病菌和蔓枯病菌的三重PCR检测被引量：9: 2010年; 通过测定黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)rDNA的ITS序列,比对近缘种及瓜类几种重要病原菌的ITS序列,设计出特异性引物HX-1/HX-2,经过对引物HX-1/HX-2PCR条件的优化,可以扩增出1条190bp的黄瓜黑星病菌特异性DNA条带,灵敏度达到1pg/μL。进一步将引物HX-1/HX-2和瓜类枯萎病菌、瓜类蔓枯病菌特异检测引物Fn-1/Fn-2、Mn-1/Mn-2组合,建立三重PCR体系,可一次检测出瓜类黑星病菌、瓜类枯萎病菌、瓜类蔓枯病菌3种瓜类植物重要的病原菌。建立了可以应用于田间瓜类黑星病菌PCR检测技术和瓜类主要病害三重PCR检测技术,对瓜类病害的诊断和防治具有重要的指导作用。; 高永洋王楠高观朋王伟; 关键词：分子检测三重PCR

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