国家自然科学基金(30871658)
- 作品数：22 被引量：93H指数：7
- 相关作者：刘贤进沈燕孙星王耘贺江更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学理学轻工技术与工程更多>>
- 时间分辨荧光免疫分析方法检测烟草中菌核净残留被引量：6
- 2012年
- 建立了简便、灵敏地检测烟草中菌核净残留的时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA),及配套的无净化的快速前处理技术。采用镧系元素螯合物Eu-N1标记亲和纯化后的羊抗兔IgG示踪抗体。采用间接竞争TRFIA法建立了菌核净标准抑制曲线,方法的检出限I10为2.0μg/L;抑制终浓度I50为32.00μg/L;检测线性范围为4～128μg/L。考察了丙酮提取后33%,10%和1%的烟草基质对菌核净-TRFIA分析方法的影响,表明在1%烟叶基质条件下,建立的菌核净的抑制曲线的线性范围与标准抑制曲线趋于平行,确定烟草样品的前处理稀释倍数为100倍,计算得到基质影响因子(Im)为17.1。对烟叶样品中添加1,7和24mg/L的菌核净标样,连续3d的添加回收实验表明,方法的回收率为73%～128%,相对标准标准偏差(RSD)在4.3%～13.2%之间;烟草中菌核净的实际最低检出限为1mg/L。本方法可望用于烟草中菌核净残留的快速筛选检测。
- 刘媛刘蓉蓉刘贤金方敦煌宋春满Huovinen TuomasVehniinen MarkusLvgren Timo
- 关键词：菌核净时间分辨荧光免疫分析烟草样品前处理
- 从噬菌体抗体库中筛选抗Cry1Ac蛋白单链抗体被引量：4
- 2009年
- 目的:从Tomlinson J噬菌体抗体库中筛选人源化抗Cry1Ac蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法:以Cry1Ac蛋白为抗原包被固相,经4轮"吸附-洗脱-扩增"过程后,挑取单克隆,用ELISA法测定特异性结合活性,并对其进行基因序列测定。结果:经过4轮筛选,获得了2株能与Cry1Ac蛋白特异性结合的阳性克隆。结论:利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫制备出高特异性的人源化抗Cry1Ac蛋白scFv,为Cry1Ac毒素蛋白检测提供了条件。
- 王耘刘媛王祥钱亚萍刘贤进
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体
- 液质联用法检测小麦粉中毒死蜱、甲氰菊酯和嘧霉胺残留被引量：6
- 2011年
- 为同时定量检测小麦粉中毒死蜱、甲氰菊酯和嘧霉胺的残留,建立了小麦粉中这3种农药的液质联用检测方法。样品采用乙腈提取,氨基柱净化,C18色谱柱分离,电喷雾源离子化和质谱多反应方式检测。结果表明,使用外标法定量,农药在一定范围内浓度与响应值呈显著线性关系,R2>0.99。毒死蜱、甲氰菊酯和嘧霉胺在液质联用仪上的检测限均为1.5μg/kg,定量限均为5.0μg/kg。添加不同水平毒死蜱、甲氰菊酯和嘧霉胺,3种农药在全麦粉中的添加回收率均大于80%,RSD均小于20%。该方法具有回收率高、精密度好、分析效率高和节省成本等特点,能满足小麦粉中毒死蜱、甲氰菊酯和嘧霉胺同时检测的需要。
- 沈燕刘贤进孙星刘美娟潘冬马尧瑶田甜
- 关键词：液质联用仪
- 伊维菌素单链抗体结构和功能分析
- 2009年
- 以伊维菌素单链抗体cDNA为材料,利用相关计算机软件对编码的蛋白质氨基酸序列及其二级结构进行分析和预测。结果表明,该cDNA序列由798个核苷酸组成,编码266个氨基酸。表达的抗体是一种分泌蛋白,有多个磷酸化位点和蛋白酶切位点,为不稳定蛋白,不稳定系数为49.57,疏水性值为-0.419。
- 温爽王耘刘贤进梁建生
- 关键词：伊维菌素单链抗体
- 氨基甲酸酯类农药适体筛选技术的建立被引量：8
- 2011年
- 体外构建1个长度为91个核苷酸、内含30个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库,运用指数富集的配基系统进化技术(SELEX),以氨基甲酸酯类农药的混合药剂作为靶分子,基于核酸分子与靶分子结合时构象会发生改变的原理,分离与靶分子结合的适体,并利用碱裂解法制备ssDNA次级文库。此方法优点在于不需要对农药小分子进行改造。经过9轮循环筛选,对氨基甲酸酯类混合农药的筛选效率从0.70上升到13.32,获得了有特异性的适体。本研究建立了一种非改造型农药小分子适体筛选的新方法,为农药残留快速检测提供条件。
- 王耘贺江王丽刘贤进
- 关键词：适体荧光氨基甲酸酯类农药
- LC-MS-MS法检测小麦粉中12种农药的残留被引量：10
- 2011年
- 【目的】建立吡蚜酮、氧乐果、敌百虫、啶虫脒、乐果、甲磺隆、氯磺隆、多效唑、嘧菌环胺、烯唑醇、喹硫磷、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐12种农药在小麦中的液相色谱-三重串联质谱同时检测和确证方法。【方法】小麦样品经粉碎后，0．1％（体积分数）冰醋酸-乙腈提取，NH：氨基柱填料和石墨化炭黑固相分散净化，含0．1％甲酸的乙腈水混合液定容过微孔滤膜后用液相色谱串联四级杆质谱联用仪LC—MS—MS检测和确证。【结果】方法在10—1000gg／L范围内保持良好的线性关系，相关系数大于0．99。12种农药在10、50、100μg／kg添加水平的回收率和相对标准偏差的数据表明：12种农药的回收率均为72％-107％，RSD为1．5％-13．3％，回收率和相对标准偏差达到相应标准的要求。【结论】该方法快速、灵敏、适用广泛、操作简便及污染小，适用于小麦籽粒中农药残留的定性定量分析。
- 沈燕刘贤进徐敦明孙星
- 关键词：小麦农药
- 抗独特型抗体在小分子物质免疫检测中的应用被引量：7
- 2010年
- 抗独特型抗体是机体针对抗体可变区所产生的特异性抗体。基于其独有的性质,它在小分子物质免疫检测中可以替代有毒标准品建立无毒化检测技术;也可以用来建立新的免疫检测模式,特别是非竞争模式,从而提高传统免疫检测技术的特性;还能够在多残留检测中发挥优势。抗独特型抗体制备困难是制约其应用的瓶颈,但噬菌体展示库技术为解决此问题提供了一条有效途径。
- 贺江樊明涛梁颖刘贤金
- 关键词：抗独特型抗体免疫分析多残留检测噬菌体展示
- 噬菌体展示技术制备甲氧基有机磷农药抗独特型抗体被引量：10
- 2011年
- 抗独特性抗体可用于建立针对农药等小分子物质的非竞争免疫检测模式。本研究将甲氧基有机磷农药通用半抗原(S-羧甲基O-,O-二甲基二硫代磷酸酯,CMP)连接至琼脂糖凝胶,进而对甲氧基有机磷农药广谱特异性抗体进行纯化;以纯化抗体为固相抗原,以人源scFv抗体库(Tomlinson I+J)为抗体源,进行抗独特型抗体的筛选;利用所筛选到的抗独特型抗体建立非竞争免疫检测技术。经过鉴定,共筛选出12个阳性克隆,其中D11和B9分别属于β型和α型抗独特型抗体。利用D11和B9建立的非竞争免疫分析法对马拉硫磷的IC50为(113.7±34.2)μg/L,检出限为10.5μg/L。
- 贺江梁颖樊明涛刘贤金
- 关键词：抗独特型抗体有机磷农药噬菌体展示技术
- 常见叶菜类蔬菜中丙森锌的气相色谱检测被引量：3
- 2012年
- [目的]建立了气相色谱检测常见叶菜类蔬菜中丙森锌的残留分析方法。[方法]样品中丙森锌的酸解产物邻丙二胺（PDA）经离子交换树脂净化后,与五氟苯甲酰氯进行衍生化,衍生物用硅胶柱净化后以配有电子捕获检测器的气相色谱仪进行测定。[结果]在添加质量分数（以PDA量计）为0.02、0.05、0.50 mg/kg时,回收率达到81.4%~93.9%,变异系数为2.0%~6.1%,最低检测质量分数为0.02 mg/kg。[结论]该方法灵敏度高,净化效果好,能够满足常见叶菜类蔬菜中丙森锌的残留检测。
- 朱宏余向阳王冬兰沈燕刘贤进
- 关键词：丙森锌叶菜类蔬菜气相色谱
- 微囊藻毒素多克隆抗体的纯化及F(ab′)_2片段的制备被引量：2
- 2010年
- 为制备微囊藻毒素(MCYST-LR)多克隆抗体F(ab′)2片段的方法。采用Protein G亲和柱纯化微囊藻毒素多克隆抗体,经木瓜蛋白酶在温和条件下酶切抗体,利用DEAE-52离子交换树脂柱分离抗体酶切片段,获得F(ab′)2片段。SDS-PAGE分析表明,MCYST-LR多克隆抗体得到有效纯化,木瓜蛋白酶酶切后出现明显F(ab′)2片段的对应谱带;利用紫外分光光度计法测得F(ab′)2片段的产率为30.6%。采用木瓜蛋白酶法成功制备了MCYST-LR多克隆抗体的F(ab′)2片段。
- 纪炜刘媛刘贤进
- 关键词：多克隆抗体木瓜蛋白酶离子交换色谱
