国家自然科学基金(30871659)
- 作品数：6 被引量：13H指数：1
- 相关作者：张友军王少丽吴青君徐宝云文礼章更多>>
- 相关机构：中国农业科学院蔬菜花卉研究所湖南农业大学华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- Cry1Ac敏感和抗性小菜蛾bre-3和bre-5基因mRNA的表达差异研究
- 2011年
- 在室内选用Cry1Ac对小菜蛾Plutella xylostella 3龄幼虫进行抗性选育,获得相对抗性为356倍的抗性种群DBM1Ac-R品系。应用实时定量基因扩增荧光检测(real time quantitative PCR,real-time qPCR)技术检测敏感小菜蛾DBM1Ac-S和抗性小菜蛾DBM1Ac-R品系鞘糖脂(Glycosphingolipids,GSLs)合成酶基因bre-3和bre-5 mRNA在2龄、3龄、4龄和老熟幼虫、蛹及4龄中肠的表达情况。结果显示:bre-3和bre-5在两个品系的5个时期和4龄中肠均有表达,其中DBM1Ac-S品系的bre-3 mRNA在3龄、4龄和老熟幼虫的相对表达量显著高于DBM1Ac-R品系(P<0.05),分别为DBM1Ac-R品系的2.36、5.54和2.68倍;DBM1Ac-S品系的bre-5 mRNA在2龄至蛹期的相对表达量分别为DBM1Ac-R品系的1.19、3.13、1.78、1.75和1.65倍,其中由3龄到蛹期差异显著(P<0.05)。DBM1Ac-R品系3龄至老熟幼虫的bre-3和bre-5 mRNA相对表达量降低可能与小菜蛾长期的Cry1Ac汰选有一定的关系。比较同一种群、同一龄期(包括4龄中肠)的bre-3和bre-5 mRNA相对表达量差异时,发现bre-5相对表达量均高于bre-3。研究结果为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白受体之一GSLs的进一步研究提供了一定的基础。
- 李拓张友军王少丽吴青君徐宝云杨中侠王沫
- 关键词：鞘糖脂苏云金芽孢杆菌受体
- 小菜蛾中肠氨肽酶N3基因片断克隆技巧及其表达量
- 2011年
- 本研究通过设计简并引物,并且进行温度梯度PCR和二次PCR,最终筛选出适合扩增小菜蛾Plutella xylostella(L.)中肠APN3(氨肽酶N3,Aminopeptidase N3)片段的引物和温度,这为研究APN3的基因功能、APN3同APN其他同工酶之间的亲缘关系奠定了基础。通过比较电泳图谱,发现APN3在小菜蛾中肠中的表达量远远低于APN1、APN2和APN5的表达量。小菜蛾中肠APN同工酶氨基酸序列分析发现,APN3同APN1的亲缘关系最近,同APN2的亲缘关系最远。以上结果对于揭示Bt毒素作用于小菜蛾的机理以及小菜蛾对Bt毒素的抗性分子机制具有重要理论意义。
- 常晓丽吴青君王少丽徐宝云张友军
- 关键词：小菜蛾表达量亲缘关系
- 小菜蛾碱性磷酸酶基因cDNA片段的克隆及其序列分析被引量：1
- 2010年
- 利用DNAman设计简并引物,通过反转录一多聚酶链式反应(RT-PCR)克隆小菜蛾Plutella xylostella(L.)抗性、敏感种群中可能与苏云金芽孢杆菌(Bt)抗性相关的碱性磷酸酶基因。琼脂糖电泳结果显示扩增条带与预期片段长度一致,阳性克隆经测序获得了403bp的基因片断。经blast比较得出所克隆基因属于碱性磷酸酶基因。与敏感种群相比,抗性种群中该基因片段有18个碱基发生变化,有1个氨基酸发生替换(缬氨酸转变为苏氨酸)。研究结果对于进一步研究小菜蛾全基因结构、功能有重要的意义。
- 刘洁文礼章王少丽吴青君张友军
- 关键词：小菜蛾克隆
- 近等基因系Cry1Ac抗性和敏感小菜蛾中肠蛋白酶的测量及部分生物学参数比较
- 2014年
- 比较了近等基因系Cry1Ac抗性(NIL-R)和敏感(DBM1Ac-S)小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫中肠蛋白酶的活性,测量了NIL-R和DBM1Ac-S的卵宽、卵长和蛹重,并对其卵的孵化率、化蛹率、雌雄比等参数进行了统计。结果表明,抗、敏种群中肠类胰凝乳蛋白酶的活力差异不显著,而敏感种群中肠的总蛋白酶、类胰蛋白酶的活力显著高于抗性品系。这两个种群卵的大小和孵化率、蛹重和化蛹率、雌雄比在统计上没有显著性差异,说明就以上生物学参数来看,NIL-R对Cry1Ac的抗性并没有引起抗性的适合度代价。
- 杨艳菊朱勋向文胜王少丽吴青君徐宝云谢文张友军
- 关键词：近等基因系CRY1AC小菜蛾
- 苏云金芽孢杆菌毒素受体鞘糖脂的研究进展被引量：1
- 2010年
- 鞘糖脂(Glycosphingolipids,GSLs)是一类以神经酰胺为母体,由神经酰胺的1-位羟基被糖基化而成的糖苷化合物,参与细胞膜脂筏的构成,影响脂筏结构致密,保证细胞膜结构的稳定性和强度,同时GSLs还参与细胞膜上信号转导,启动信号传递。GSLs作为苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白受体之一,影响靶标生物对Bt毒素的敏感性。GSLs首先通过特异糖基结构被Bt毒素识别,然后引导毒素插入靶标生物细胞膜,导致靶标生物中肠穿孔,最终死亡。综述了GSLs的分类及其在生物体内的分布与功能、GSLs结构的分析方法、GSLs与Bt毒素的关系以及参与GSLs合成的相关糖基转移酶等相关研究进展。
- 李拓王沫王少丽吴青君徐宝云张友军
- 关键词：苏云金芽孢杆菌受体鞘糖脂抗性糖基转移酶
- 利用RNAi技术沉默小菜蛾类钙粘蛋白基因被引量：11
- 2009年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种调控基因表达的方法,其通过体外合成一段与内源靶基因同源的双链RNA(dsRNA)或siRNA,导入生物体内,使内源靶基因中同源mRNA降解,从而达到阻抑基因表达的目的。类钙粘蛋白(cadherin-likeprotein)是位于昆虫中肠刷状缘膜囊(brush border membrane vesicles,BBMV)上与钙粘蛋白(cadherin)结构相似的物质,是多种昆虫体内Bt杀虫蛋白的受体。本研究利用基因特异引物通过RT-PCR扩增了小菜蛾类钙粘蛋白基因的2个片段(CAD1和CAD2),合成相对应的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA);并将dsRNA通过显微注射导入小菜蛾3龄幼虫体内,测定了不同靶位点、不同剂量、不同检测时间对目的基因mRNA表达量的影响。结果表明:将70nLCAD1对应的dsRNA注射到幼虫体内48h后,基因表达量显著下降,72h后恢复。免疫印迹检测结果表明,类钙粘蛋白在注射dsRNA48h后幼虫BBMV中的含量明显下降。本实验成功实现了小菜蛾类钙粘蛋白基因的沉默,该体系的成功建立为利用RNAi技术分析小菜蛾及其他鳞翅目昆虫基因的功能提供了参考。
- 杨中侠吴青君王少丽文礼章徐宝云张杰张友军
- 关键词：小菜蛾苏云金芽胞杆菌RNA干扰基因沉默
