陕西省科技攻关计划(2007K01-12)
- 作品数：10 被引量：38H指数：4
- 相关作者：樊明涛何鸿举焦凌霞吕丽娟刘晓娇更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学河南科技学院兰州理工大学更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家教育部博士点基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学更多>>
- 改进的QuEChERS-GC-ECD法测定苹果中4种拟除虫菊酯农药残留被引量：16
- 2009年
- 采用QuEChERS样品处理方法处理苹果样品,GC-ECD检测苹果中甲氰菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯4种拟除虫菊酯农药,用匀浆法代替震荡,1%HAc的乙腈溶液提取,PSA净化,正己烷取代乙腈进样,研究了该方法的提取效果。结果表明,该方法提取效果很好,没有明显的基质效应,在添加浓度0.05~1.0 mg/kg时,其平均回收率（n=6）在81.07%~107.23%,RSDs为0.23%~10.5%,检出限均〈0.003 mg/kg,完全能够满足这几种农药残留的检测要求。
- 刘玉波樊明涛梁俊赵政阳袁晖
- 关键词：苹果
- 用于PCR检测的扩展青霉基因组DNA提取方法比较被引量：4
- 2011年
- 为寻找一种经济、简便、高效的基因组DNA提取方法,进一步开展扩展青霉的分子生物学研究,采用氯化苄法、玻璃珠法、玻璃珠+氯化苄法、试剂盒法4种方法提取扩展青霉的基因组DNA,并测定DNA质量浓度以及进行PCR和电泳分析,比较不同提取方法的效果。结果表明,4种方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为试剂盒法、玻璃珠+氯化苄法、玻璃珠法、氯化苄法。其中玻璃珠+氯化苄法提取效率接近试剂盒法,效果良好,并且此法成本低廉、操作简单、结果稳定,可代替昂贵的试剂盒法用于扩展青霉基因组DNA的提取。
- 何鸿举焦凌霞樊明涛刘晓娇吕丽娟魏新元
- 关键词：DNA提取PCR
- 应用PCR技术快速检测腐烂苹果中扩展青霉菌被引量：5
- 2011年
- 利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶基因序列,设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)反应快速检测腐烂苹果中的扩展青霉。反应的特异性和敏感性以及反应的最适条件等试验的结果表明:该引物具有很高的特异性和灵敏性,只扩增扩展青霉DNA,而不扩增其他真菌DNA;菌体的检测限为1.34×103个孢子/mL,DNA的检测限为2.40×10-2μg/mL;反应的最适退火温度范围为54～59℃,最适模板浓度范围为2.40～5.28μmol/L。该方法具有简单、快速、特异性好和灵敏性高等特点,可为快速检测腐烂苹果中扩展青霉的实际应用提供借鉴。
- 何鸿举焦凌霞樊明涛张建兵吕丽娟刘晓娇李亚菲
- 关键词：扩展青霉DNA模板
- 浓缩苹果汁中扩展青霉菌实时PCR快速检测条件的优化被引量：1
- 2007年
- 为了研究苹果汁生产中棒曲霉素产生菌的快速检测,利用实时PCR方法快速检测扩展青霉的可能性,对扩增条件进行优化。在polygatacturonase基因引物设计和传统PCR扩增扩展青霉DNA的基础上,研究实时PCR扩增时退火温度、引物浓度以及底物质量浓度对扩增效果的影响,以获得最佳的参数。结果表明,用Lightercy-cler实时PCR扩增扩展青霉DNA的最佳退火温度为61℃,最佳引物浓度为0.20-0.40μmol/L,底物质量浓度对实时PCR扩增的影响较小。在以上参数下,可以获得良好的PCR扩增曲线、产物溶解曲线以及清晰的产物条带。研究获得的快速检测扩展青霉的实时PCR参数,可用于浓缩苹果汁工业化生产中扩展青霉的快速检测,也可作为其他微生物实时PCR检测时的方法学参考。
- 樊明涛毕静莹刘邻渭Mansel W GraffithHaifeng Wang
- 关键词：苹果汁扩展青霉PCR检测
- PCR法快速检测扩张青霉被引量：2
- 2008年
- 【目的】研究棒曲霉素扩张青霉菌(Penicillium expansum)的快速和特异性PCR检测方法。【方法】通过P.expansum的纯菌平板和液体培养以及纯菌接种于苹果、苹果果肉和苹果汁,用Cenis改良方法提取DNA,以基于isoepoxydon dehydrogenase和polygatacturonase编码基因的两对引物扩增P.expansum DNA,建立特异和快速的检测P.expansum的方法。【结果】基于polygatacturonase基因的引物具有很强的特异性,只有目标DNA片段被扩增,而基于isoepoxydon dehydrogenase基因的引物扩增特异性较差。纯培养可以检测到5×10-6μgDNA/每反应体系,整个检测时间约为5h,比传统培养法(4～6d)时间大大缩短。苹果、苹果果肉和果汁接种纯P.expansum后所提DNA都得到了很好的扩增,具有很高的特异性,不受苹果样品DNA的干扰。【结论】本研究建立的P.expansum的PCR检测方法特异、快速、灵敏,可用于商品果汁和苹果汁工业化生产中P.expansum的快速检测和质量控制,也可用于工艺过程对P.expansum污染的快速溯源。
- 樊明涛毕静莹Mansel W GraffithWang Haifeng
- 关键词：苹果PCR
- 陕西省苹果汁中脂环酸芽孢杆菌的分离与鉴定被引量：1
- 2008年
- 【目的】明确陕西省生产苹果汁中脂环酸芽孢杆菌（Alicyclobacillus）的分布情况。【方法】对健康苹果苹果汁和软腐苹果腐烂部位中的嗜酸耐热菌进行了分离、纯化，并以1株酸土脂环酸芽孢杆菌（A．acidoterrestris）DSM3922为标准菌株，对分离菌株进行了个体形态、菌落形态观察和嗜酸性、耐热性、生理生化特性试验，最后用表型聚类法分析了供试菌株的亲缘关系。【结果】分别从苹果汁、腐烂苹果中分离到50和5个疑似菌落，嗜酸耐热特性试验表明，其中有14株属嗜酸耐热菌，且均是芽孢杆菌，大小为2．0～5．0μm；其菌落表面湿润，中心突起，有同心圆，半透明，不易挑起，形状圆形，直径为1．5～5mm；接触酶、脲酶检验结果均呈阳性，都可利用肌醇、甘油、L-山梨糖为惟一碳源，且利用葡萄糖均不能产酸产气。鉴定结果确定分离菌株均属于脂环酸芽孢杆菌属的不同种，其中TAB-3号菌与标准菌株最为接近。【结论】陕西省苹果汁中的耐热菌，除酸土脂环酸芽孢杆菌以外，还有脂环酸芽孢杆菌属的其他菌，其主要分属于A．acidoterrestris、A．acidocaldarius、A．pomorum3个种。
- 朱小翠樊明涛
- 关键词：脂环酸芽孢杆菌苹果汁嗜酸耐热菌
- 基于PCR法快速检测扩展青霉被引量：1
- 2009年
- 对PCR快速检测扩展青霉的方法进行了研究,重点考察了退火温度对检测结果的影响,评价了该方法的灵敏度,并考察了该法在苹果样品检测中的应用效果。结果表明,退火温度为51~61℃,扩展青霉3.5425 DNA扩增效果良好,纯菌培养所得菌体的DNA质量浓度的检测限为2.9×10^-3μg/mL,菌液的检测限低于15 cfu/mL,苹果样品对菌体DNA检测结果无影响。
- 袁晖樊明涛刘玉波杨永恒李瑜焦凌霞
- 关键词：苹果扩展青霉PCR
- 扩展青霉DNA提取及PCR检测条件的优化被引量：1
- 2011年
- 研究扩展青霉DNA的提取及其聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测条件的优化。分别采用玻璃珠法、氯化苄法、玻璃珠+氯化苄法提取扩展青霉菌及对照菌株的基因组DNA,经紫外测定和电泳检测实验,分析提取DNA的质量浓度和纯度;同时,根据扩展青霉多聚半乳糖醛酸酶基因内一段保守序列设计合成一对288bp的扩增引物,并对PCR检测条件进行优化。结果表明:玻璃珠+氯化苄法提取到的DNA质量浓度和纯度较理想,扩展青霉DNA可获得良好的特异性扩增,PCR扩增的最适退火温度为53～59℃,最适引物浓度为0.04～0.16μmol/L,最适模板质量浓度为2.40～5.28μg/mL,dNTPs浓度对PCR扩增影响不大。运用实验所得优化参数检测扩展青霉菌,整个过程仅需3～4h,和传统的培养检测法相比,该方法可有效提高检测效率,可进一步将该方法应用于实践。
- 何鸿举樊明涛刘晓娇吕丽娟焦凌霞
- 关键词：扩展青霉基因组DNA
- 扩展青霉基因组DNA五种提取方法比较被引量：2
- 2011年
- 为寻找一种适合于扩展青霉基因组DNA的提取方法,比较了固体培养、液体静置培养和液体振荡培养3种培养方式的提取效果,分别采用氯化苄法、蜗牛酶法、CTAB法、SDS法及异硫氰酸胍法提取扩展青霉菌基因组DNA,经DNA质量浓度测定及电泳分析,比较5种方法的差异,并利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase)基因内一段保守序列,设计PCR引物,扩增大小为288bp的特异目的基因,检测其灵敏性。结果表明:固体培养的方式较适合扩展青霉基因组DNA的提取,另外5种提取方法均能提取出扩展青霉菌基因组DNA,扩增出目的条带,其中氯化苄法和蜗牛酶法所提DNA的纯度均较好,但蜗牛酶法所提DNA量较少。因此,氯化苄法是5种提取方法中最可靠的DNA提取方法,所提DNA浓度高、纯度好、结果稳定,可作为PCR反应的模板进行特异性扩增,且该方法的最低检测限大约为1.01×10-1μg/mL。
- 李亚菲何鸿举吕茜樊明涛
- 关键词：DNA提取SDS法异硫氰酸胍法
- 苹果中霉菌的分离及初步鉴定被引量：7
- 2009年
- 对苹果中的霉菌进行了分离、纯化与初步鉴定。结果表明:从苹果中初步分离出3株霉菌,通过对其形态、培养特征及生物学特性的研究,初步鉴定3株菌株分别为青霉属(Penicillium)、黑曲霉属(Aspergillus niger)、米曲霉属(Aspergillus oryzae)。
- 王雅樊明涛赵萍张轶王玉丽王家利
- 关键词：苹果霉菌
