国家自然科学基金(30871734)
- 作品数：8 被引量：53H指数：4
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- 矮牵牛编码F3′5′H的蓝色基因表达载体构建及转化被引量：4
- 2011年
- 类黄酮3′,5′羟基化酶(Flavonoid-3′,5-′hydroxylase,F3′5′H)是花色苷代谢途径中的一个关键酶,能使花色素合成趋向于形成蓝色的飞燕草色素,从而使花色向蓝紫色偏移。本研究从蓝紫色矮牵牛(Petunia hybrida)花瓣中克隆了编码F3′5’H的蓝色基因Hf1,并通过PCR技术获得百合花特异表达启动子(PchsA),将百合PchsA与Hf1基因融合,构建了百合花特异表达启动子调控的Hf1基因植物表达载体,通过农杆菌介导的叶盘法转化粉红色矮牵牛。抗性筛选和PCR检测鉴定转基因植株,结果表明,成功地获得了转基因阳性植株。
- 李莉祁银燕解燕刘雅莉娄倩
- 关键词：矮牵牛
- 利用灰色关联分析法选择适宜转蓝色基因的百合品种被引量：9
- 2010年
- 通过测定不同百合品种的花青素和黄酮醇的成分组成及含量,测量其液泡pH值,确定适宜转蓝色基因的百合品种。首先外部观察选择花色为粉色至紫红色的10个百合品种,用高效液相色谱(HPLC)分析花瓣中花色素和黄酮醇的组成和含量,pH计测量液泡pH值,利用灰色关联分析法对供试品种的测量指标进行综合评价。结果表明:供试品种中的花青素为矢车菊素,黄酮醇为山奈酚和槲皮素;最终选择花瓣中矢车菊色素含量少,黄酮醇含量高,液泡pH值高的OT杂种百合‘罗宾娜’和东方百合‘贝尼尼’为适宜转蓝色基因品种。
- 张萍刘雅莉祁银燕化占勇
- 关键词：百合灰色关联分析花青素黄酮醇蓝色基因
- 两种单子叶植物蓝色花相关基因的功能验证和转化百合的研究
- 颜色是决定花的观赏价值的最重要因素之一,得到广谱的花色是观赏类花卉育种的一个重要目标。百合由于缺乏F3′5′H基因而缺乏飞燕草素,所以自然界中没有紫色或蓝色的百合花。本研究中以蓝色百合分子育种为长期目标,启动了相关研究。...
- 祁银燕娄倩刘雅莉王跃进
- 关键词：单子叶植物百合
- 风信子DFR基因全长cDNA的克隆及序列分析被引量：6
- 2009年
- 以蓝色风信子完全露出蓝色的花蕾为材料,利用RT-PCR和RACE技术,获得风信子DFR基因的全长cDNA。该cDNA全长1252bp,开放阅读框为1098bp,编码366个氨基酸。Blast搜索结果显示,风信子DFR基因核苷酸序列与其它植物已报道的DFR基因具有66%～77%的相似性,氨基酸序列有62%～73%的相似性。聚类分析表明,最先与风信子聚类合并的是鸢尾,其次与其它单子叶植物聚类,最后与双子叶植物聚类。
- 祁银燕刘雅莉李莉王跃进
- 关键词：DFRCDNA克隆风信子基因
- 百合花药和雌蕊特异启动子功能分析
- 2010年
- 【目的】从"索邦"百合(Lilium orential"Sorbonne")中克隆查尔酮合成酶基因启动子相似序列PCHS2,并对其进行表达模式分析。【方法】从"索邦"百合中PCR扩增PCHS2启动子序列,与GUS报告基因融合,构建植物表达载体,通过农杆菌介导法转化模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana var.Columbia)和矮牵牛(Petuniahybrida "Dreams Midnight"),抗性筛选和PCR检测鉴定转基因植株,GUS组织化学检测分析启动子在转基因植株中的表达模式。【结果】转基因拟南芥和矮牵牛的抗性筛选和PCR检测结果显示,成功地获得了转基因阳性植株。GUS活性分析表明,在PCHS2的驱动下,仅能在花药和雌蕊中检测到GUS活性,茎、叶和其他花组织中都没有发现GUS活性的表达。【结论】PCHS2启动子具有花药专一性。
- 娄倩刘雅莉辛轶李莉
- 关键词：查尔酮合成酶基因矮牵牛
- 通过重叠PCR构建2个增强型植物花特异双向启动子被引量：1
- 2013年
- 基于植物基因工程要求精确调控的目标,为转基因提供更多可供选择的启动子,使用重叠延伸PCR的方法设计并人工构建了2个增强型植物花特异双向启动子pPCHS-35Senhancer-pLCHS和pPCHS-OCS enhancer-pLCHS。实验中,用本实验室保存的矮牵牛花特异启动子核心序列pPCHS、百合花特异启动子核心序列pLCHS、CaMV 35S增强子序列(35Senhancer)、OCS增强子序列(OCS enhancer)为模板,根据重叠延伸PCR原理,设计并合成了10条引物,进行两轮PCR,产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定,成功拼接出了与设计的双向启动子大小一致的2段序列。使用DAN回收试剂盒回收两段序列,克隆到pGEM-T Easy载体中并导入大肠埃希菌TOP10进行扩繁和保存,扩繁菌液进行测序分析,测序证实得到的两段序列与设计的双向启动子序列完全一致,成功获得2个增强型植物花特异双向启动子。本研究的结果能为今后利用多基因共转化的方法精确调控矮牵牛、百合等重要花卉的观赏性状提供有用的启动子。
- 张雄飞刘雅莉娄倩祁银燕杜灵娟
- 关键词：启动子增强子重叠延伸PCR
- 同源重组快速构建百合LCHS2基因RNAi表达载体及其鉴定被引量：4
- 2010年
- 为探讨CHS基因的下调表达对花朵着色的影响以及为百合观赏性状遗传改良提供技术支持,利用基于同源重组原理的Gateway技术,根据课题组从东方百合‘索邦’分离的LCHS2基因序列(Genbank登录号:GQ483376)和pENTR/D-TOPO载体要求,设计上游5'端添加'CACC'的一对特异引物,PCR扩增获得636 bp的干扰片段。通过TOPO克隆,将该片段克隆入载体pENTR/D-TOPO构建入门克隆载体pENTR/D-CHS,测序结果显示,与原序列同源性为100%。再经过LR反应使pENTR/D-CHS上的干扰片段替换掉目标载体pHellsgate12上的ccdB片段,快速构建了包含LCHS2基因干扰片段的RNAi表达载体pH12-CHSi,经限制性内切酶XhoI、XbaI酶切鉴定获得724 bp和722 bp的片段,与预期结果一致。pH12-CHSi电击法转化农杆菌GV3101,菌液PCR鉴定,出现636 bp的目的条带,表明RNAi表达载体pH12-CHSi已成功转入农杆菌。
- 化占勇刘雅莉徐伟荣王跃进张雄飞
- 关键词：同源重组RNAI
- 超声波辅助农杆菌转化OT百合‘罗宾娜’的研究被引量：5
- 2013年
- 【目的】通过超声波处理辅助农杆菌转化OT百合小鳞片,提高农杆菌介导法转化百合的效率。【方法】以OT百合‘罗宾娜’(Lilium tenuifoliumoriental×tumpet‘Robina’)的再生小鳞片为外植体,分别以80W功率的超声波处理1,2,3,4,5min,通过超声波处理辅助根癌农杆菌进行外源基因的转化,同时以未进行超声波处理为对照;利用GUS组织化学法,分别检测转化脱菌后筛选培养7d的外植体和筛选培养60d后形成的潮霉素抗性再生植株叶片、小鳞片、根系的GUS瞬时表达和稳定表达,提取潮霉素抗性植株基因组DNA进行GUS和HPT基因的PCR扩增分析。【结果】超声波处理的农杆菌介导转化的百合外植体经GUS组织化学染色,多数可见蓝色斑点,且以3min超声波处理的蓝色最深;3min超声波处理的外植体对潮霉素的抗性率最高达48.85%,未经超声波处理的仅为15.56%,二者差异达显著水平。从53个潮霉素抗性再生植株的DNA样品中扩增得到了GUS基因和HPT基因的扩增片段,其中超声波处理3min的PCR阳性植株转化率最高,为28.30%,而未进行超声波处理的PCR阳性植株转化率仅为5.66%,初步证明外源基因可能整合到百合基因组中。【结论】20℃条件下80W功率超声波处理3min,可以有效提高农杆菌介导法转化OT百合的效率。
- 王岚刘雅莉娄倩田菲菲
- 关键词：超声波百合农杆菌转基因
- 百合体细胞胚胎发生和植株再生被引量：25
- 2011年
- 以切花百合(Lilium)品种‘黄天霸’(‘Manissa’)花器官为外植体诱导体细胞胚胎发生与植株再生。结果表明,不同花器官、不同激素配比对愈伤组织形成均具有显著影响。花丝为最佳外植体,激素对愈伤组织诱导的影响效应为NAA>6-BA>2,4-D,最适培养基为MS+1.0 mg.L-1NAA+0.2 mg.L-16-BA;激素诱导体细胞胚胎发生的影响效应为2,4-D>KT>6-BA,最佳培养基配方为MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.2 mg.L-1KT+1.0 mg.L-16-BA;MS培养基添加IBA可促进体细胞胚萌发成苗,体细胞胚芽成苗的最佳培养基为MS+0.2 mg.L-16-BA+1.0 mg.L-1IBA。
- 翟彦张宗勤贾敏王岩宋西德周雷
- 关键词：百合外植体胚性愈伤组织体细胞胚胎发生胚状体
